腦立清丸中膽酸類成分的HPLC指紋圖譜

袁曉芳，張 舒

淮安市食品藥品檢驗所，淮安 223300

腦立清丸中膽酸類成分的HPLC指紋圖譜

袁曉芳，張 舒

淮安市食品藥品檢驗所，淮安 223300

目的：建立腦立清丸中膽酸類成分指紋圖譜，比較、評價不同企業產品之間、同一企業不同批次產品之間的均一性和穩定性。方法：使用中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件對不同產品的相似度進行評價。結果：檢驗的101批腦立清丸的相似度大多＞0.9。結論：HPLC指紋圖譜技術能有效地監測中藥制劑的質量；本次抽取的5個廠家的101批腦立清丸制劑質量穩定。

腦立清丸；指紋圖譜；質量控制

腦立清丸的處方由磁石、赭石、薄荷腦、冰片、豬膽汁等中藥組成，具有平肝潛陽、醒腦安神之功效[1]。市售的腦立清丸處方相同、生產工藝相似，但是現行標準僅對豬膽汁/豬膽粉中豬去氧膽酸予以鑒別，未對豬膽汁/豬膽粉中的其它成分和處方藥材質量加以評鑒，無法全面有效地控制腦立清丸的質量。

HPLC指紋圖譜技術不受樣品揮發性和熱穩定性的限制，分離效能高，分析速度快，可有效地對藥材和制劑進行質量控制[2-3]。本文建立腦立清丸指紋圖譜，對其質量的均一性、穩定性進行評價。

1 材 料

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀，Alletch 3300 ELSD檢測器；中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（版本：2004A，國家藥典委員會）。

1.2 試藥

對照品：膽酸（100078-200414），鵝去氧膽酸（110806-200704），豬去氧膽酸（100087-200610），熊去氧膽酸（110755-9003）；均購自中國藥品生物制品檢定所。

樣品：河北A廠家78批，黑龍江B廠家13批，山西C廠家7批，河北D廠家1批，哈爾濱E廠家2批，共101批；以上各批次樣品規格皆為每10丸重1.1克。處方藥材均為市售藥材，經淮安市食品藥品檢驗所中藥室鑒定品種正確。

試劑：甲酸、氫氧化鈉、鹽酸、乙酸乙酯均為市售分析純，購自南京化學試劑有限公司。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Thermo C18（250 mm×4.60 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.2%甲酸溶液，梯度洗脫，洗脫程序見表1；柱溫：30℃；流速：0.8 mL·min-1；漂移管溫度45℃；載氣為空氣，流量1.5 L·min-1；進樣量10 μL。

表1 梯度洗脫程序

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取膽酸、鵝去氧膽酸、豬去氧膽酸和熊去氧膽酸對照品適量，加乙醇制成每1 mL含4種對照品各0.5 mg的溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取樣品粉末3.2 g（取樣量依據處方中豬膽汁含量計算得到），加10%氫氧化鈉溶液5 mL，120℃加熱4 h，放冷，滴加鹽酸調節pH值至2，搖勻。用乙酸乙酯振搖提取4次，每次10 mL，合并提取液，蒸干，殘渣加乙醇溶解，轉移至10 mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統適應性

2.3.1 精密度試驗 取腦立清丸樣品 （A廠家，批號：101101）3.2 g，制備供試品溶液后連續進樣5次，測定各共有峰相對峰面積和相對保留時間的RSD均小于3.1%。

2.3.2 穩定性試驗 取腦立清丸樣品 （A廠家，批號：101101），制備供試品溶液后分別在0、1、4、8、12、24 h進樣，測定色譜峰相對峰面積和相對保留時間，RSD分別小于1.2%和1.9%。

2.4 指紋圖譜

2.4.1 指紋圖譜的建立 取5個廠家樣品10批及自制樣品，按“2.1”項下色譜條件測定，建立腦立清丸的指紋圖譜，共有峰為4個。見圖1。

圖1 腦立清丸中膽酸類成分指紋圖譜的共有模式

2.4.2 主要色譜峰的鑒定 取“2.2.1”項下的4種對照品溶液，按“2.1”色譜條件分別進樣，所得色譜峰的保留時間與圖1中共有峰相對應，說明1、2、3、4號峰為目標色譜峰。

2.4.3 相似度評價 101批腦立清丸進行指紋圖譜比較，結果表明：各廠家自我比較相似度均大于0.95，與生成的共有圖譜比較，相似度亦大于0.98。以河北A廠78批產品相似度最好，均大于0.99，表明藥材及生產工藝穩定性很好。見表2、3、4。

表2 河北A廠家78批腦立清丸樣品指紋圖譜相似度

表3 其它廠家腦立清丸樣品指紋圖譜相似度

表4 各廠家及對照藥材、自制樣品指紋圖譜相似度

3 討 論

3.1 本實驗采用HPLC梯度洗脫的方法對不同省份、不同廠家的101批腦立清丸建立指紋圖譜分析得到4個共有峰，方法學考察良好，對制劑的鑒別、質控和產品穩定性的研究，提供了實驗依據。

3.2 樣品的相似度評價結果表明，市售腦立清丸制劑質量參差不齊，提示目前的藥品標準不能全面保障制劑質量，有待進一步提高制劑質控指標。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：1012.

[2] 孫國祥，侯志飛，張春玲，等.色譜指紋圖譜定性相似度和定量相似度的比較研究 [J].藥學學報，2007，42（1）：75-80.

[3] 王艷偉，宋立言，代雪平，等.雙黃連注射液HPLC指紋圖譜研究[J].中成藥，2011，（9）：1461-3.

HPLC Fingprint of Cholic Acids from Naoliqing Pills

YUAN Xiao-fang,ZHANG Shu
Huaian Institute for Food and Drug Control,Huaian 223300,China

Objective:To establish the HPLC fingerprint of cholic acids from Naoliqing pills,and to use it to compar and evaluate the homogeneity and stability of products from different enterprises or different batches of the same enterprise.Methods:The similarity of the products was evaluated by the chromatographic fingerprint software.Results:HPLC fingerprint technology can effectively monitor the quality of traditional Chinese medicine preparation;all the 101 batches of Naoliqing pills form five enterprises have stable quality of preparation.

Naoliqing pills;HPLC fingerprint;Quality control

R927

A

1673-7806（2015）01-037-02

袁曉芳，女，副主任中藥師 E-mail:yuanxiaofangzy@163.com

2014-06-12

2014-06-26