酶聯免疫吸附試驗操作關鍵點

張瑞嫻，吳有全，鄭雪蓮，李煒煊（佛山市第一人民醫院檢驗科，廣東528000）

酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是酶免疫測定方法中應用最廣的技術，既可用于定性，又可用于定量檢測。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原-抗體反應在固相表面進行，通過洗滌去除未與固相載體結合的游離成分，加底物顯色進行測定。ELISA 具有操作簡單，靈敏度高，特異性好，廣泛應用于臨床免疫檢驗，是醫學檢驗實習生必須掌握的最基本的試驗操作。ELISA 在操作過程中有很多需要注意的事項，現將作者在日常帶教中認為的關鍵點及如不慎加入孔外則注意事項總結如下。

1 實習前的培訓

實習生在進行ELISA 操作前首先閱讀相應項目的操作規程，本科免疫室使用ELISA 法的項目有11 個，每個試驗的操作規程都不一樣，要求每位實習生熟悉每個項目的操作規程，需要每位實習生多花時間和付出一定的努力，做好這項工作對后面的操作起到很大的作用。

2 試驗過程中帶教的注意事項

本科免疫室使用ELISA 方法的試驗很多，以下是ELISA 操作過程中的一些注意事項。試劑從冰箱取出后，必須在室溫放置30 min[1]再進行檢測，試劑使用前應搖勻，盡量避免有溶血、黃疸、脂血或被微生物污染的標本[2]。加樣前要求學生先檢查標本狀態，對不合格標本退回并要求重抽。用全自動加樣系統，標本加完后要求學生注意是否有漏加的情況，如果漏加了，則用加樣器補上。加酶結合物和底物一般用8 頭加樣器，套吸嘴時要注意是否有套緊，否則加樣量會減少，引起加樣不準確，加液時要加在ELISA 板孔的底部，避免濺出、產生氣泡等。特別是加酶試劑，操作時不能濺到微孔板的外面，酶試劑要加在微孔板的中央，否則很容易使結果產生假陽性。加酶試劑是整個ELISA 試驗中最重要的步驟，這個步驟做好了，這個試驗的質量就得到了保證。加底物時，各種試劑盒的顯色劑不能混用。孵育時間和溫度嚴格按照操作說明書規定， 溫育的條件對結果有一定影響[3]，加樣完畢后封上封紙防止標本或反應液蒸發在孔壁上。洗板的次數可能對結果有影響[4-5]，要嚴格按照說明書規定的次數使用專用洗液。 洗板前應先將洗板機管道清洗干凈將洗液注滿管道， 保證洗液充滿各孔，洗板結束后，應在脫水機上脫去反應板殘留的少量洗液。顯色是ELISA 反應中最重要的一個步驟，關系著試驗的成敗。 孵育時要按照操作規程掌握好孵育的時間和溫度[6]。在加顯色劑時不能加到孔外，應用洗水紙吸干；加終止液時不能產生氣泡；為了提高分析樣本的準確度，應用酶標儀判讀檢測結果，先打開酶標儀電源預熱15 min， 比色前把酶標板底部用吸水紙吸干，然后將板放在酶標儀架上。

3 重視培養學生的質量控制

每批標本都要做空白對照陰性對照、陽性對照和質控，保證操作的質量。

4 生物安全教育

ELISA 檢測的對象多為感染性的標本，因此，對實習生的生物安全教育很重要[7]，一些標本，如梅毒、艾滋病、乙型肝炎、丙型肝炎試劑盒的陽性對照有一定的危害，需妥善處理[8]；如果懷疑是艾滋病的標本，要用有效氯為2 000 mg/L 的消毒液浸泡30 min 后清潔處理。

總之，ELISA 是檢驗醫學實習中最基本的檢驗技術操作，操作過程中有許多細致的步驟和注意事項，要嚴格按照操作規程認真仔細地進行。避免假陽性和假陰性結果的出現，保證檢測結果真實可靠。

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[7] 王偉娟，楊焦峰，鄭輝，等.檢驗科實習生生物安全防護調查及對策[J].檢驗醫學與臨床，2014，11（21）：3082-3083.

[8] 陳利民，張凡非，劉玲，等. 淺析病原微生物試驗室生物安全管理對策[J]. 中國藥物與臨床，2014，10（14）：1457-1458.