家畜布氏桿菌病的檢疫方法

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家畜布氏桿菌病的檢疫方法

楊曌斌

( 黑龍江省牡丹江市畜牧獸醫局157000)

布氏桿菌病是家畜的一種慢性傳染病，主要侵害生殖系統。感染后，以母畜發生流產和公畜發生睪丸炎為特征，可應用血清學方法檢出血清中有抗體存在，則說明被檢動物為布氏桿菌病畜。動物感染布氏桿菌以后首先出現的是凝集抗體，再過一段時間才出現補體結合抗體，最后產生變態反應性。補體結合反應是一種高度特異性的，其陽性反應與感染的符合率，比血清凝集試驗與感染的符合率高。此種方法用來鑒別注苗后和自然感染所引起的血清學反應很有價值，如4～8個月犢牛注射19號菌苗，經過6個月后補體結合反應為陰性，而血清凝集反應仍為陽性或可疑。我國的家畜布氏桿菌病檢疫應用的免疫生物學方法主要是凝集試驗，補體結合試驗及變態反應試驗。本試驗按《家畜布氏桿菌病試管凝集反應技術操作規程及判定標準》進行。

1材料準備

抗原由獸醫生物藥品廠生產供應。使用時用0.5%石炭酸生理鹽水作1∶20稀釋，長霉或出現凝集塊的抗原不能應用。被檢血清必須新鮮無明顯蛋白凝固，無溶血現象和腐敗氣味。陽性血清和陰性血清由獸醫生物藥品廠生產供應。稀釋液為0.5%石炭酸生理鹽水，用化學純石炭酸與氯化鈉配制，經高壓滅菌后備用。檢疫羊用稀釋液用0.5%石炭酸、10%氯化鈉溶液。

2操作步驟

牛、馬、駱駝用1∶50、1∶100、1∶200、1∶400四個稀釋度；豬、山羊、綿羊和犬用1∶25、1∶50、1∶100、 1∶200四個稀釋度。稀釋血清和抗原加入方法:取5支小試管先加入稀釋液0.5%石炭酸生理鹽水，第一管加2.3mL，從第二管不加，第3、4、5管加0.5mL。取被檢血清0.2mL加入到第一管中，混勻，分別取0.5mL加入2、3管中。將第三管混勻，吸0.5mL加入第四管，混勻，吸0.5mL加入第五管。血清最后稀釋度為1∶25、1∶50、1∶100、1∶200，震蕩使血清和抗原充分混合，放入37℃溫箱18~20h，取出后室溫靜置2h，記錄每管的反應情況，出現50%以上凝集的最高稀釋度就是這份血清的凝集價。 實驗應該設立陰性血清對照、陽性血清對照和抗原對照。陰性血清對照:操作步驟與被檢血清相同。陽性血清對照:陽性血清稀釋到原有滴度，其他同上。抗原對照:已稀釋抗原0.5mL，稀釋液0.5mL。

牛、馬、駱駝血清凝集價在1∶100以上；豬、山羊、綿羊和犬在1∶50以上，判定為陽性。牛、馬、駱駝血清凝集價在1∶50以上；豬、山羊、綿羊和犬在1∶25以上，判定為可疑。可疑家畜經過3~4周重檢，牛、羊重檢仍然為可疑，可判定為陽性，豬、馬重檢仍然為可疑，但是無臨床癥狀判定為陰性。試管凝集試驗也可用簡便方式進行，即以0.2mL吸管將被檢血清以0.08、0.04、0.02及0.01分別加人4支小試管內，然后每管加人1∶40稀釋的抗原1mL，充分搖勻，這樣4管血清的最后稀釋度分別為1∶25、1∶50、1∶100、1∶2000。

牛、馬和駱駝的血清稀釋和加抗原的方法與前述者一致，不同的僅第一管加稀釋液2.4mL及被檢血清0.1mL。加抗原后從第2~5管血清稀釋度依次為1∶50、1∶100、1∶200和1∶400。

每次試驗須作三種對照，陰性血清對照的操作步驟與被檢血清者相同。陽性血清對照須將血清稀釋到其原有滴度，其他步驟同上。抗原對照即將當時使用的乙稀釋抗原0.5mL，稀釋液0.5mL。每次試驗須制備比濁管，以為記錄結果的依據，配制方法即以當時使用的已稀釋抗原加等量稀釋液，

全部試管充分振蕩后，置37～38℃溫箱中，22～24h后用比濁管對照檢查記錄結果。出現50%以上凝集的最高稀釋度就是這份血清的凝集價，因此50%亮度的比濁管很重要。

3結果判定

牛、馬和駱駝血清凝集價為1∶100以上，豬、羊和犬1∶50以上者，判為陽性。牛、馬和駱駝血清凝集價為1∶50，豬、羊和犬為1∶25者判為可疑。可疑反應的家畜經3～4周重檢，牛、羊重檢時仍為可疑，判為陽性。豬和馬重檢時仍為可疑，但農場中未出現陽性反應及無臨診癥狀的家畜，判為陰性。

鑒于豬血清常有個別出現非特異性凝集反應在試驗時須結合流行病學判定結果。如果出現個別弱陽性，但豬群中均無臨診癥狀，可以考慮此種反應為非特異性，經3～4周可采血重檢。