雞白痢平板凝集試驗方法

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雞白痢平板凝集試驗方法

印寶東

(遼寧省盤錦市動物疫病預防控制中心124010)

雞白痢是由雞白痢沙門氏菌引起的雛雞最常見的、危害性很大的傳染病，也稱雛白痢。本病主要通過消化道感染。病雞的排泄物污染了飼料、飲水和用具等均可傳播，患病母雞可通過種蛋將病菌傳給后代。公雞的睪丸也能帶菌，通過交配可把病菌傳給后代。各種年齡的雞都能感染雞白痢。雛雞在出殼后第三天就能致病，7日齡左右死亡率最高。

1實驗原理

在有電解質存在的條件下，細菌等顆粒性抗原和特異性抗體相互結合，出現肉眼可見的凝集顆粒(塊)，稱為凝集反應。根據顆粒的大小與出現的快慢判定試驗反應結果。參與反應的抗原與抗體分別稱為凝集原和凝集素。平板凝集試驗具有由于簡易、快速、敏感、特異的特點，長期以來廣泛用于人畜多種傳染病的快速診斷，在家禽最常用的是雞白痢雞與敗血支原體感染的檢驗。

2實驗儀器、設備及材料

雞白痢抗原是用雞白痢沙門氏桿菌培養物加入0.3%的甲醛溶液滅活后，制成每毫升含菌100億的懸浮液，并加入抗凝劑和色素制成，由獸醫生物制品廠提供。雞白痢標準陽性血清由獸醫生物制品廠提供。被檢血清或全血采自被檢雞群。實驗儀器有潔凈玻璃板、微量移液器或滴管、采血針頭、不銹鋼絲環、混合棒及被檢雞若干只。

3實驗步驟

操作程序。取一潔凈玻片，用蠟筆劃成若干方格，并編號，將抗原充分振蕩混勻，用移液器或滴管吸取雞白痢抗原，垂直滴1滴(約0．05mL)于平板各格上，在第一格抗原上滴上雞白痢標準陽性血清1滴，在第二格抗原上滴上陰性血清1滴。其余各格為樣品檢測格(每只雞一格)，用針頭刺破被檢雞的翅靜脈或雞冠，用不銹鋼絲環沾取血液一環或用移液器吸取血液0.05mL滴加在抗原滴上，用滅菌牙簽迅速將被檢雞全血與抗原混勻并散開至直徑約為2cm的薄層后，輕輕晃動玻板，觀測5min，判定結果并記錄。

結果判定標準。在陽性對照出現100%凝集和陰性對照液體均勻混濁無凝集現象的前提下，抗原與血液或血清混和后，于1min內出現很多大塊的凝集顆粒且底液清亮者為強陽性反應，記錄為“#”；1～3min內出現很多大小不等的凝集顆粒且底液略有混濁者為中強度陽性反應，記錄為“++～+++”；3～4min后，出現少量細微顆粒，底液較混濁者為弱陽性反應，記錄為“+”；未見凝集現象發生或在4min以后出現不明顯的凝集現象者為陰性反應，記錄為“-”。

4實驗注意事項

雞白痢平板凝集試驗的應用。雞白痢是流行普遍、危害嚴重的家禽傳染病，其傳播的重要途徑之一是經卵垂直傳播。因此，在種雞群中做好該病的控制和凈化工作是防制本病的重要手段。雞白痢平板凝集試驗以簡便、快捷、特異、敏感等特點在國內外普遍用于該病的臨床檢驗，監視該病的控制與凈化效果，指導控制與凈化措施的修訂與實施。

對一般性商品生產種雞群作雞白痢檢疫時應注意以下問題，檢測樣品抽檢比例一般為1%～2%。檢測出的陽性雞只可淘汰也可不淘汰。檢測的時間間隔對后備雞群，首次檢驗應在40~70日齡，第二次檢測在全面開產后每年檢測2～3次。檢測工作一定要配合有效的防疫工作，檢測后對結果作統計，計算感染的陽性率并與上次檢驗結果比較，以便評估上次檢測后相應防疫措施的效果，以便修訂防疫計劃，直至雞群感染率下降至最低水平。

對以建立凈化雞白痢為目的的SPF雞群作檢疫時應注意以下問題：檢測樣品的比例應為100%。檢測出的陽性雞只應予淘汰。檢測時間間隔應為每月1次，或根據具體凈化計劃確定間隔時間。對陰性雞群實施特別嚴格的隔離、衛生消毒措施和藥物防制措施。雞群完全凈化的基本標準是以最后連續三次檢測全為陰性，且雞群在該段時間未用過對相應疾病敏感的藥物。

雞白痢抗原應保存于8~10℃，避光、干燥處，使用過程中應不斷搖勻。雞白痢抗原適用于檢查產蛋母雞及一年以上的公雞，對幼齡雞的敏感性較差。平板凝集反應應在20℃以上的室溫下進行。使用藍紫色雞白痢抗原作試驗，最好襯以白色背景以便于觀察。本試驗還可以以被檢雞卵黃液作被檢材料，判斷標準同上。

作者簡介：孟維珊(1980-)，男，黑龍江齊齊哈爾人，碩士，從事家畜生態養殖方面的研究工作。