子宮腺肌病患者子宮內膜組織HGF、C-Met、MMP-9和TIMP-1表達變化及意義

任紅英，黃玉琴，周宇涵，李明群，洛若愚(武漢大學人民醫院，武漢430060)

子宮腺肌病患者子宮內膜組織HGF、C-Met、MMP-9和TIMP-1表達變化及意義

任紅英，黃玉琴，周宇涵，李明群，洛若愚
(武漢大學人民醫院，武漢430060)

摘要:目的探討肝細胞生長因子(HGF)及其受體原癌基因(C-Met)、基質金屬蛋白酶9(MMP-9)、金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)在子宮腺肌病發生、發展中的作用。方法選擇子宮腺肌病患者30例(觀察組)，因子宮肌瘤行子宮切除術的患者30例(對照組)。采用免疫組化SP法檢測觀察組在位及異位內膜、對照組內膜組織HGF、C-Met、MMP-9和TIMP-1，HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1之間的關系采用多元統計相關分析。結果觀察組異位內膜、在位內膜及對照組內膜組織、HGF、C-Met、MMP-9表達依次升高，TIMP-1依次降低;兩兩比較，P均＜0.01。觀察組異位內膜中HGF、C-Met、MMP-9兩兩均呈正相關，并均與TIMP-1呈負相關(P均＜0.01)。觀察組在位內膜及對照組內膜組織HGF、C-Met、MMP-9兩兩均呈正相關，C-Met、MMP-9與TIMP-1均呈負相關(P均＜0.01); HGF與TIMP-1無關(P＞0.05)。結論子宮腺肌病患者異位內膜組織HGF、C-Met、MMP-9降低，TIMP-1升高，各指標間均具有相關性，可能與疾病的發生、發展有關。

關鍵詞:子宮腺肌病;肝細胞生長因子;肝細胞生長因子受體原癌基因;基質金屬蛋白酶9;金屬蛋白酶組織抑制因子1

子宮腺肌病患者子宮內膜腺體和間質侵入子宮肌層，并伴隨周圍肌層細胞代償性肥大和增生。多數研究認為，子宮基底層內膜細胞增生并侵入到子宮肌層間質是其發病原因［1］。在這一過程中，細胞因子起到了關鍵作用，其中肝細胞生長因子(HGF)及其受體原癌基因(C-Met)與細胞侵襲力有關［2，3］。HGF與C-Met蛋白結合后，可啟動一系列跨膜信號轉導通路，從而發揮多種生物活性，使子宮內膜細胞具有侵襲和轉移的特性［4，5］。基質金屬蛋白酶9(MMP-9)能降解基底膜主要成分Ⅳ型膠原［6］，金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)可與活化的MMP-9形成復合體而抑制其活性，并且能抑制血管生成素誘導血管內皮細胞出芽［7，8］，但其在子宮腺肌病的發生、發展中的作用鮮見報道。為此我們進行了如下研究。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2012年7～12月武漢大學人民醫院收治的子宮腺肌病患者30例(觀察組)，取其在位及異位內膜組織標本。患者年齡35～50歲，平均44.2歲，均行子宮次全切除術或子宮全切術。選擇因子宮肌瘤行子宮切除術的患者30例(對照組)，取其內膜組織標本。患者年齡35～50歲，平均44.1歲，均為未絕經婦女。兩組術前3個月內未行激素治療，無其他腫瘤疾病史。兩組年齡具有可比性。

1.2子宮內膜組織HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表達檢測采用免疫組化SP法。將兩組標本脫蠟后行微波爐抗原修復，HGF抗體及C-Met抗體以1∶200稀釋，MMP-9抗體及TIMP-1抗體以1∶100稀釋。4℃孵育過夜，以PBS代替一抗作為陰性對照，嚴格按照試劑盒說明書操作。陽性判定標準: HGF、C-Met主要表達于子宮內膜間質細胞與上皮細胞的細胞質和細胞膜，MMP-9、TIMP-1主要表達于子宮內膜腺上皮的細胞質，少量表達于間質細胞的細胞質;細胞染色呈黃色為陽性表達，棕黃色為強陽性表達。每張切片在光鏡下隨機取6個不同視野，以切片染色的背景作對照，經HPIAS1000病理圖文分析系統(同濟醫學院千屏影像公司)分析，測定陽性信號的平均灰度值。分析HGF、C-Met、MMP-9與TIMP-1的關系。

1.3統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。計量資料以珋x±s表示，組間比較采用單因素方差分析; HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1之間的關系采用多元統計相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1兩組內膜組織HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表達比較見表1。

表1　兩組內膜組織HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表達比較(灰度值，)

表1　兩組內膜組織HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1表達比較(灰度值，)

注:與對照組比較，*P＜0.01;與觀察組在位內膜比較，#P＜0.01。

組別　n HGF　C-Met　MMP-9　TIMP-1觀察組30異位內膜　110.65±17.86* #　114.43±15.93* #　112.08±17.14* #　175.37±9.77* #在位內膜　124.32±18.75*　125.97±17.72*　130.48±17.77*　140.42±14.04*對照組　30　136.97±16.14　146.41±15.77　142.73±14.86　129.76±13.17

2.2兩組HGF、C-Met、MMP-9及TIMP-1的關系觀察組異位內膜組織中，HGF與C-Met、MMP-9均呈正相關(r分別為0.937、0.886，P均＜0.01)，C-Met 與MMP-9呈正相關(r = 0.807，P＜0.01)，HGF、CMet、MMP-9與TIMP-1均呈負相關(r分別為－0.777、－0.724、－0.905，P均＜0.01)。觀察組在位內膜組織中，HGF與C-Met、MMP-9均呈正相關(r分別為0.921、0.865，P均＜0.01)，C-Met與MMP-9呈正相關(r = 0.787，P＜0.01)，C-Met、MMP-9與TIMP-1均呈負相關(r分別為－0.718、－0.908，P均＜0.01)，HGF與TIMP-1無關(P＞0.05)。對照組HGF與C-Met、MMP-9均呈正相關(r分別為0.908、0.892，P均＜0.01)，C-Met與MMP-9呈正相關(r = 0.806，P＜0.01)，C-Met、MMP-9與TIMP-1均呈負相關(r分別為－0.588、－0.802，P均＜0.01)，HGF與TIMP-1無關(P＞0.05)。

3　討論

研究發現，子宮腺肌病患者異位內膜組織含有豐富的MMP-9，可能與破壞子宮基層細胞外基質(ECM)、侵襲病變周圍組織有關［9］。HGF對血管內皮細胞有強烈的促有絲分裂作用，并可通過與血管內皮細胞膜上受體C-Met結合，促進細胞分裂增殖，調節細胞骨架蛋白重排及誘導MMP分泌。組織中的HGF、C-Met可能通過打破MMP-9、TIMP-1平衡、降解ECM，而促進血管內皮細胞增生及血管管腔的形成［10］。同時，HGF、C-Met可以使細胞對Fas-Fasl配體系統的敏感性降低，抑制異位子宮內膜細胞凋亡，使異位子宮內膜更容易侵襲、種植和生長［11］。

本研究結果表明，觀察組異位內膜、在位內膜及對照組HGF、C-Met、MMP-9表達均依次升高，TIMP-1依次降低，與以往研究結果一致［4］。表明隨著在位內膜和異位內膜MMP-9表達增加，破壞了與TIMP-1之間的平衡，TIMP-1對MMP-9的抑制作用減弱甚至失效。相關分析表明，觀察組異位內膜HGF、C-Met、MMP-9兩兩均呈正相關，并均與TIMP-1呈負相關。推測在病理條件下子宮內微環境發生改變，HGF、CMet分泌增加促使子宮腺肌病患者在位內膜轉化為具有更強種植侵襲能力的異位內膜;同時打破了MMP-9、TIMP-1平衡，使異位內膜中TIMP-1的抑制作用減弱，活化的MMP-9水解破壞基底膜，使細胞遷移侵襲入間質，最終形成新生血管，從而促進異位內膜侵襲周圍組織在子宮肌層中生長。

綜上所述，子宮腺肌病患者異位內膜HGF、CMet、MMP-9降低，TIMP-1升高，各指標間均具有相關性，可能與子宮腺肌病的發生發展有關。今后我們將根據本研究結果進行動物及臨床相關研究，以期為子宮腺肌病的治療提供依據。

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收稿日期:( 2015-02-05)

文章編號:1002-266X(2015)36-0057-02

文獻標志碼:B

中圖分類號:R711.7

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.36.022