ChABC、GDNF、Nogo-A抗體聯合應用促損傷脊髓再生修復的實驗研究

丁永利，姜 勇，宋躍明，陳 星

（1．河南中醫學院第一附屬醫院骨傷科，河南鄭州 450000；2．四川大學華西醫院骨科，四川成都 610041）

由于成年哺乳動物脊髓的神經細胞已經高度分化，失去有絲分裂的能力，因此脊髓損傷后的再生修復一直是困擾醫學界的難題之一［1］。近年的研究表明，脊髓損傷后修復能力有限與膠質瘢痕的空間阻礙、促神經生長因子的缺乏以及神經抑制因子的存在有關［3］。軟骨素酶ABC（ChABC）能分解受傷區的硫酸軟骨素黏多糖（CS-GAG），清除瘢痕［3］；膠質細胞原性神經營養因子（GDNF）是近年發現的活性最強的新型神經營養因子［4］。本實驗利用成年SD大鼠脊髓全橫斷損傷模型，ChABC、GDNF、抗Nogo-A抗體通過蛛網膜下腔置管灌注，局部單用和聯合應用治療脊髓損傷，采用BDA示蹤及 NF-200、GAP-43、GFAP免疫組化等指標評價藥物治療的長期作用，探索損傷脊髓再生新的有效治療方法。

1 材料與方法

1．1 實驗動物 清潔級雌性Sprague-Dawley（SD）成年大鼠，體質量200～250g，2～3月齡，由四川大學華西動物中心提供。動物實驗室為SPF級華西臨床前藥理實驗室，室溫18～22℃，濕度50%～65%。開始實驗前1周購進大鼠以適應實驗室環境。

1．2 主要試劑及儀器 GDNF及ChABC購自美國Sigma公司；抗Nogo-A抗體購自美國SANTA公司；BDA購自美國Molecular Probes公司；誘發電位儀及BL-420E＋生物機能實驗系統，PE-10導管購自美國BD公司。

1．3 方法

1．3．1 脊髓全橫斷損傷模型的建立 健康雌性SD大鼠，50g／L水合氯醛腹腔內注射麻醉（0．6mL／100g），以T7～8棘突中心做背部正中切口，顯露T7～11椎板，暴露待損傷脊髓，約長4～5mm。將5．5cm長PE-10導管經蛛網膜下腔向頭端置入約1cm，將脊髓完全橫斷，逐層關閉切口。……