聚烯烴滴眼劑瓶中4種抗氧劑含量測定及遷移研究

朱海燕，張廣湘，鄭 杰

（廣東省醫療器械質量監督檢驗所，廣東廣州510663）

聚烯烴滴眼劑瓶中4種抗氧劑含量測定及遷移研究

朱海燕，張廣湘，鄭 杰

（廣東省醫療器械質量監督檢驗所，廣東廣州510663）

目的：建立測定聚烯烴滴眼劑瓶中抗氧化劑1010、330、168、1076的高效液相色譜法（HPLC），并研究這4種抗氧劑向玻璃酸鈉滴眼液中的遷移情況。方法：色譜柱為Inertsil?ODS-SP，（5μm，4.6mm×250mm），流動相為乙腈-四氫呋喃-水（體積比6∶3∶1），柱溫為25℃，流速為1.0ml／min，檢測波長為276nm和266nm，柱溫為25℃。結果：抗氧劑1010、330、168、1076分別在0.9996～79.97μg／ml，0.5049～80.78μg／ml，1.531～40.11μg／ml，2.035～81.42μg／ml范圍內線性關系良好，加標回收率在82.17%～120.39%內，相應RSD均小于5%。結論：本文所建方法準確、靈敏、簡便，適用于聚烯烴滴眼劑瓶及玻璃酸鈉滴眼液中四種抗氧劑的含量檢測。

抗氧劑；聚烯烴滴眼劑瓶；HPLC

聚烯烴作為塑料包裝產品的主流，常用于滴眼劑的包裝中，聚烯烴加工工藝時常加入酚類、亞磷酸酯類、硫酯類抗氧劑，抗氧劑與藥液接觸時發生相互作用或直接遷移至藥液時，影響藥效的發揮甚至危及人體健康［1］。因而，嚴格控制滴眼劑瓶中抗氧劑含量及其遷移量是必要的。國內YBB藥包材標準［2］收錄的滴眼劑瓶有聚丙烯型及低密度聚乙烯型，但并未對抗氧劑作出相關規定。玻璃酸鈉滴眼液臨床上主要用于各種內外因疾患所致的角結膜上皮損傷，尤其適用于干燥綜合征和斯-約綜合征等需長期用藥的患者，玻璃酸鈉滴眼液按進口西藥標準進行質量控制，暫未查閱到其對抗氧劑的限量要求?！稓W洲藥典》7.0［3］版對非腸道制劑及眼科制劑用聚丙烯包裝容器規定配方中單個抗氧劑含量不得超過0.3%，總量不得超過0.3%。本研究參照《歐洲藥典》及相關文獻［5-6］，建立高效液相色譜法測定聚丙烯型及低密度聚乙烯單劑量滴眼劑瓶中抗氧劑含量及其在玻璃酸鈉滴眼液中的遷移量，所建方法簡便，結果準確，專屬性強，可有效控制產品的質量。

1 實驗部分

1.1 試驗儀器：LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司），色譜柱Inertsil?ODS-SP，（5 μm，4.6 mm×250 mm）；Synergy超純水系統（Merck MILLIPORE）；電子天平（BS210S，startorius公司）；手動固相萃取儀（AES-12，天津奧特賽恩斯有限公司）；固相萃取小柱：Wondasep?C18。

1.2 試劑與樣品：抗氧劑168：亞磷酸三（2，4-二叔丁基苯基）酯，C42H63O3P，CAS：31570-04-4，批號：MKBF0813V，98%；抗氧劑330對照品：1，3，5-三甲基2，4，6-三（3，5-二叔丁基-4-羥基芐基）苯，C54H78O3，CAS：1709-70-2，批號：MKBF6188V，99%；抗氧劑1010對照品：四-［β-（3，5-二叔丁基-4-羥基苯基）丙酸］季戊四醇酯，C73H108O12，CAS：6683-19-8，批號：MKBF3728V，98%；抗氧劑1076對照品：β-（3，5-二叔丁基-4-羥基苯基）丙酸正十八碳醇酯，C35H62O3，CAS：2082-79-3，批號：MKBB8963V，99%；以上抗氧劑均購自SIGMA-ALDRICH公司?？寡鮿?68氧化物（168’）：三（2，4-二-叔丁基苯基）磷酸酯，C42H63O4P，CAS：95906-11-9，購自TORONTORESEARCH CHEMICALS INS，批號：7-T-YKZ-65-2，100%。

甲醇、乙腈、四氫呋喃均為色譜純，二氯甲烷為分析純；實驗用水為Synergy超純水。

低密度聚乙烯單劑量滴眼劑瓶，批號：B-140901、B-140902、B-140903，Equistar公司產品；

玻璃酸鈉滴眼液原料，批號：140901、140902、140903，ZY公司產品；

聚丙烯滴眼劑瓶，批號：140501，140502，140503，FQ公司產品。

1.3 色譜條件：采用Inertsil?ODS-SP，（5 μm，4.6 mm×250 mm）為色譜柱，乙腈-四氫呋喃-水（體積比6∶3∶1）為流動相，流速為1.0ml／min，波長：276 nm用于抗氧劑1010、1076和330的定量和266 nm用于抗氧劑168和168氧化物的定量，進樣量：20μl，柱溫為25℃。

1.4 溶液制備：抗氧劑對照液：稱取抗氧劑168氧化產物，抗氧劑168、330、1010、1076標準品各約60.0mg分別溶于10.0 ml乙腈與四氫呋喃等體積混合的溶液中。分別吸取上述溶液2ml用混合液（乙腈與四氫呋喃等體積混合液）稀釋至50ml，得對照液A、對照液B。

供試液S1：精密稱定2 g滴眼劑瓶，剪碎，置于圓底燒瓶中，加80 ml甲苯煮沸回流2 h，冷卻至60℃，邊攪拌邊加入120 ml甲醇，用4號砂芯漏斗過濾。用25 ml甲苯-甲醇（40∶60）沖洗燒瓶和漏斗，將洗液并入濾液中，用同樣溶液稀釋至250 ml。取50 ml揮干，用適量四氫呋喃-乙腈（1∶1）溶解殘留物，定容至5ml，0.45μm濾膜過濾。

供試液S2：取滴眼劑瓶，剪成2cm×0.5cm的長條，置燒杯中，加水150ml洗滌，室溫干燥后，移至錐形瓶中，按照6cm2／ml比例加入玻璃酸鈉滴眼液原料150ml，置于高壓蒸汽滅菌鍋中，121℃保持30min，冷卻至室溫，移出，得樣品液。取100ml樣品液上C18SPE小柱（預先用3 ml甲醇和3ml水依次活化），控制流速為1.5～2ml／min。用5ml甲醇與3ml二氯甲烷依次洗脫，洗脫液用甲醇定容至10 ml，0.45μm濾膜過濾。

2 方法學驗證

2.1 線性實驗：將對照液A、對照液B稀釋至不同濃度溶液，按“1.3”色譜條件測定，每個濃度測3次，取平均值?？寡鮿?68結構為亞磷酸鹽，易被氧化成168氧化物。因此抗氧劑168以抗氧劑168與抗氧劑168氧化物測得濃度之和表示。峰面積為橫坐標（A），濃度為縱坐標（C），進行線性回歸，得抗氧劑的線性方程。

2.2 最低檢測限和定量限試驗：分別稱取抗氧劑168、330、1010、1076、168’適量，用乙腈與四氫呋喃等體積混合液溶解稀釋，定容，稀釋至信噪比為3，即樣品的檢測限，稀釋至信噪比為10，即樣品的定量限。

2.3 精密度試驗：將對照儲備液稀釋成三個濃度，分別進樣20 μl，注入液相色譜儀，每個濃度連續進樣3針，記錄色譜圖，抗氧劑1010的RSD在0.17%～3.58%，抗氧劑1076的RSD在0.12%～3.10%，抗氧劑330的RSD在0.11%～5.87%，抗氧劑168的RSD在1.78%～2.89%，可見本方法的精密度良好。

2.4 回收率試驗：取滴眼劑瓶（批號分別為B-140901、140501）4份，精密加入不同濃度的4種抗氧劑，按“1.4”項下方法制備供試品S1，“1.3”方法測定各抗氧劑含量，計算回收率。

取玻璃酸鈉滴眼液（批號140901）4份，精密加入不同濃度的4種抗氧劑，按“1.4”項下方法制備供試品S2，“1.3”方法測定各抗氧劑含量，計算回收率。

3 實驗結果與評價

取滴眼劑瓶及玻璃酸鈉滴眼液，按“1.4”項下處理樣品，“1.3”項下色譜條件進行分析，記錄圖譜，外標法定量，結果表明聚丙烯滴眼劑瓶抗氧劑檢出量小于0.02%，而低密度聚乙烯單劑量滴眼劑瓶抗氧劑檢出量小于等于0.0005%，而相應的遷移液中均未檢出抗氧劑。

4 討論

本研究對《歐洲藥典》7.0版中抗氧劑檢測色譜條件進行改進，4種抗氧劑紫外吸收數據表明，抗氧劑1010、1076、330最大吸收波長為276 nm，抗氧劑168及其氧化產物最大吸收波長為266 nm，本研究采用同一流動相雙波長同時檢測4種抗氧劑，所建方法準確、快速、分離度能滿足要求，可為聚烯烴類滴眼劑瓶抗氧劑含量及在玻璃酸鈉滴眼液中遷移量提供實驗參考。

［1］曹承敬，張書珍，張銑.四種受阻酚類抗氧劑的毒理研究［J］.北京醫學院學報，1982，14（2）：105-109.

［2］國家食品藥品監督管理局.直接接觸藥品的包裝材料和容器標準匯編［S］.2006，第一輯，5-15.

［3］歐洲藥典［S］.7.0版：338-341.

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1002－2376（2015）11－0024－02

2015－09－06