牛病毒性呼吸道疾病診斷技術

孔祥明

摘要：對牛的病毒性呼吸道疾病的病原學診斷方法進行了介紹。

關鍵詞：牛病毒性呼吸道疾病；病原學診斷；防治

中圖分類號：S858.23 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2014）11-0048-01

牛呼吸道疾病（BRD）對全球養牛業造成嚴重危害。導致該病的病因相對較為復雜，病毒成為其中主要病原之一。已分離到的病毒主要有牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）、牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV）、牛副流感病毒（BPIV-3）、牛呼吸道合胞體病毒（BRSV）等。另外也與環境因素有關，例如，溫度、濕度、飼料、粉塵、營養缺失等原因都能引起BRD疾病。

1 病原學診斷方法

1.1 病毒分離鑒定

針對上述已經檢測到的病毒，都可以依附牛腎細胞進行培養和生長。現場檢查時，樣本可以采集病牛的鼻腔分泌液即可。剖檢則采集氣管黏膜或發生病變的的肺部組織，也可將血液或者脾臟器官用做樣本采集使用。BVDV具有兩種病變類型：致細胞病變型（CP）和非致細胞病變型（nCP）。其中CP-BVDV讓感染細胞變圓，使胞漿發生空泡現象，形成細胞單層拉網，最后引起細胞死亡。實際上，臨床中主要以nCP-BVDV為主要分離類型，所以，應該結合免疫熒光或者RT-PCR對分離毒株培養物鑒定。IBRV能夠使細胞圓縮，然后形成葡萄樣群落，并在單層細胞上出現空洞，偶爾會發現合胞體。若要鑒定IBRV是否為致細胞病變的病毒，須將細胞培養的上清液放置特定的抗血清或單克隆抗體進行中和試驗。一旦細胞確是被IBRV所感染，那么一定會出現核內包涵體。

BPIV-3會造成牛腎細胞出現拉網狀，并且最終會使細胞發生脫落。對于那些不易產生病變的毒株細胞，可以通過應用紅細胞吸附試驗驗證病毒是否存在，其中一些毒株必須經過較長時間的體外停留才能顯現出具體現象。BRSV是一種可以充分生存在呼吸系統的細胞培養物上面，特別是牛鼻甲細胞最適合對病毒進行分離和培養，具體病變情況是可見細胞融合現象，處于晚期的細胞多呈現出圓縮、腫脹和聚集的情況，并且容易出現多個合胞體，最后細胞死亡并脫落。對于發生病變的細胞可以使用HE染色，通過鏡檢能夠看到核內包涵體。但是，受到病毒滴度不夠穩定的影響，很容易在運輸過程中無法有效生存，使其敏感度降低，因此，運輸過程必須嚴格且迅速，才能保證細胞盡早接種，從而取得較好的結果。

1.2 病毒核酸檢測

病毒核酸檢測方法具有較高的敏感性和特異性，并且能夠對受到感染的或是不完整的病毒的基因組進行有效檢測。有些專家依據BVDV5′UTR基因序列，合成了特異性引物，形成了能夠對BVDV進行檢測的RT-PCR方法。這種方法能夠從BVDV Oregon C24V中擴增出特異性片段，而從豬瘟病毒（CSFV）、IBRV、BRSV、BPIV-3中的擴增結果為陰性。

2 呼吸道疾病綜合防治

（1）對牛群引進做好管理措施。堅決不從疫區引進牛，也不能從正在發病的牛群區域引進牛。對于引進牛應進行檢疫檢測，并與本區牛群之間進行一段時間的隔離觀察，確保無病再與健康牛群混群。

（2）加強飼養管理。對不同年齡和不同來源的牛進行分類喂養飼料。適當對牛加強營養補充，如富含維生素、礦物質元素等的飼料，保證全價營養。

（3）注重疾病防控。對牛舍做好通風、清潔以及消毒，對于病牛早發現、早隔離、早治療。同時應注意避免牛舍環境過度擁擠。

3 小結

本文結合了病原學診斷方法，分別從病毒分離鑒定和病毒核酸檢測兩個方面進行論述，并在最后提出簡略的綜合防治措施，希望能夠為診斷和防治牛的病毒性呼吸道疾病提供參考。