實時熒光定量PCR 檢測對HCV抗體弱陽性標本的確認價值

張美華 徐清芳 楊敏

實時熒光定量PCR 檢測對HCV抗體弱陽性標本的確認價值

張美華 徐清芳 楊敏

目的 探討和分析實時熒光定量聚合酶鏈式反應(PCR) 檢測對丙型肝炎病毒(HCV)抗體弱陽性標本的確認價值。方法 50例谷丙轉氨酶(ALT)指標正常, 無惡心、嘔吐、乏力、發熱等臨床癥狀, 但行胃腸組織檢查的患者。使用熒光劑定量PCR對其HCV抗體弱陽性進行檢測分析。結果 對于ALT指標正常且抗陽性在1～20 S/CO的患者行熒光劑定量PCR檢測的過程中, 發現2例(4%)患者檢測結果高于最低檢測值。對患者使用熒光定量PCR的方法對于HCV陽性血清進行檢測, 并且對于ALT指標正常的患者, 行HCV抗體檢測, 發現3例(6%)丙肝陰性抗體。結論 對于HCV抗體弱陽性的檢測,雖然在一定程度上存在局限性, 對于HCV-RNA含量較低的情況下存在一定的失誤性, 但能夠較為準確的對患者HCV抗體弱陽性進行檢測。具有較高的臨床醫學價值, 值得在HCV抗體檢測領域得到進一步的完善、推廣和應用。

熒光定量聚合酶鏈式反應；檢測；丙型肝炎病毒抗體；谷丙轉氨酶

在當今社會生活中, 雖然人們的生活水平得到了一定的提升, 但由于人們對于生活質量的忽視, 丙型肝炎在生活中出現的頻率也越來越高。丙型肝炎作為一種傳染性極強的疾病, 在人體內部變異性也極強, 現在醫學中還未見對其特效藥, 這就在很大程度上要求人們加強對于HCV的預防, 為了很好的對其預防, 應該提高HCV的檢測準確度［1］。在現代醫學研究中, 對于HCV的診斷多為綜合診斷, 在臨床醫學中, HCV抗體弱陽性的檢測多采用熒光定量的方法, 在傳統醫學中對于HCV的檢測上, 熒光定量PCR的使用作出了卓越的貢獻, 大大提高了HCV抗體弱陽性的檢測精準度, 具有較為深遠的意義。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對象選取本院2009年4～11月收治50例ALT指標正常, 無惡心、嘔吐、乏力、發熱等臨床癥狀,但行胃腸組織檢查的患者。患者年齡45～63歲, 平均年齡(51.65±4.69)歲。

1.2 方法 由于患者胃腸功能較差, 在檢查前需要對HCV進行檢測, 使用熒光定量PCR的方式對于HCV-RNA陽性血清進行必要的檢測, 進而實行對于HCV抗體的檢測。定量熒光PCR檢測使用的儀器是由美國應用生物公司制造的PCR Prism7500型儀器, 使用由上海捷瑞生物工程有限公司生產的熒光定量檢測試劑盒。經患者及其家屬知情同意后進行 HCV抗體檢測。

2 結果

對于ALT指標正常且抗陽性在1～20 S/CO的患者行熒光定量PCR檢測的過程中, 發現2例(4%)患者檢測結果高于最低檢測值。對患者使用熒光定量PCR的方法對于HCV陽性血清進行檢測, 并且對于ALT 指標正常的患者, 行HCV抗體檢測, 發現3例(6%)丙肝陰性抗體。雖檢測結果個別存在失誤性, 但對于絕大多數HCV抗體的檢測都較為準確。

3 討論

隨著時代的進步和發展, HCV抗體的檢測技術由常規PCR檢測發展為現今熒光定量PCR檢測［2］。新興的PCR檢測技術相較于常規PCR檢測而言, 存在極大的檢測優勢, 使其檢測精準度得到了大幅度的提升。具有特異性強、操作簡便、靈敏度極高等各方面優點, 已然成為了國內外對于HCV抗體檢測的生物研究活動中的主流技術［3］。實時熒光定量PCR檢測系統, 主要是充分的利用了熒光信號隨著PCR產物增加而增加的技術原理。在PCR產物不斷增加和擴大的過程中, 對于反應系統中有關熒光信號的變化進行有效和精準的檢測, 是實時熒光定量PCR檢測的核心內容。根據在反應系統中的熒光信號在不斷的變化過程中得出的平均值以及其平均標準差, 并且在99.7%的置信度的具體情況下所計算出來的熒光值數據在定量熒光PCR進行HCV檢測過程中顯得十分重要。在HCV抗體檢測過程中選取實時定量熒光PCR技術與傳統常規的PCR技術而言, 能夠在很大程度上增加抗體定量檢測的精準度［4］。

在試驗過程中, 選取的50例ALT指標正常, 并無惡心、嘔吐、乏力、發熱反應的患者使用實時熒光定量PCR對其HCV-RNA陽性血清進行精確的檢測和分析。存在2例(4%)患者檢測出HCV-RNA的含量高于最低檢出限, 48例(96%)患者見檢測低于最低檢出限, 為陰性。造成這種現象的原因可能是既往感染帶來的免疫反應, 由于患者自身機能抵抗力強, 體內病毒少量存在, 未出現任何臨床反應, 病毒逐步消失, 但抗體仍然存在于體內。由國內外學者研究和查閱相關文獻得知, 熒光定量PCR檢測的敏感度極強, 降低了檢測過程中RNA的耗費。在一定意義上, 熒光定量PCR檢測方法作為只用于被確診為攜帶HCV的患者的好辦法, 在醫學研究上也做出了卓越貢獻。另外在檢測結果中, 存在3例(6%)患者檢測結果表明HCV抗體呈陰性, 其余47例(94%)患者在檢測后得出的HCV抗體具體數值均在80～150 S/CO的正常范圍之內。由于試驗選取的患者具體情況存在一定的差異,并且選取患者例數有限, 不排除部分患者HCV-RNA血清呈陽性但并未產生HCV抗體的情況。

綜上所述, 實時熒光定量PCR檢測技術在國內外HCV抗體弱陽性的檢測領域發展尤為迅速, 也在不斷的完善。但在HCV抗體弱陽性的檢測過程中, 還需對HCV-RNA進行一定的檢測, 并根據患者的臨床表現對丙肝抗體病毒進行綜合評定。而實時熒光定量PCR檢測方法不失為一種好辦法,值得得到廣泛應用。

［1］ 范文勇.實時熒光定量-PCR和酶聯免疫吸附法檢測巨細胞病毒-IgM抗體的比較.中國醫藥導報, 2011, 8(2):83-84.

［2］ 劉義慶, 鄒建文, 田文君, 等.化學發光免疫分析檢測抗-HCV抗體與HCV-RNA的關聯研究.國際檢驗醫學雜志, 2014, 35(13): 1749-1750.

［3］ 邵芳.HCV抗原、HCV抗體及HCV-RNA聯合檢測與ALT的相關性及其臨床意義.中國中西醫結合消化雜志, 2014, 22(2): 80-82.

［4］ 姚仁南, 陳復興, 陳玲, 等.化學發光免疫分析法檢測獻血者HCV抗體的應用評價.中華全科醫學, 2011, 9(3):450-453.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.24.019

2015-01-20］

463000 駐馬店市第一人民醫院檢驗科(張美華徐清芳)；駐馬店市第四人民醫院檢驗科(楊敏)