2014年度風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒國家監督抽驗質量分析

【作　者】于　婷，曲守方，張小燕，孫　楠，高尚先，李海寧，黃　杰

1 中國食品藥品檢定研究院體外診斷試劑一室，衛生部生物技術產品檢定方法及其標準化重點實驗室，北京市，100050

2 江蘇省醫療器械檢驗所，南京市，210022

2014年度風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒國家監督抽驗質量分析

【作者】于婷1，曲守方1，張小燕2，孫楠1，高尚先1，李海寧1，黃杰1

1 中國食品藥品檢定研究院體外診斷試劑一室，衛生部生物技術產品檢定方法及其標準化重點實驗室，北京市，100050

2 江蘇省醫療器械檢驗所，南京市，210022

目的 對風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒進行國家監督抽驗，評價其質量現狀。方法 采用法定檢驗結合探索性研究，對陰陽性符合率、檢測限和重復性項目進行檢驗，結果 法定檢驗顯示16批次中15批次合格（93.8%），不合格項目為陰性符合率；探索性研究中僅11批次滿足行業標準要求（68.8%），不合格項為陽性樣本符合率、檢測限和重復性。結論 目前上市的風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒存在一定的質量問題，建議今后在注冊檢驗中，統一采用行業標準和國家參考盤，以促進企業改進產品質量。

風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒；國家監督抽驗；質量分析

風疹病毒（Rubella Virus，RV）屬于皰疹類病毒中的披膜病毒科風疹病毒屬，為單鏈RNA病毒。人群對其普遍敏感，是其唯一自然宿主。RV主要通過呼吸道傳播，潛伏期約2～3周[1-2]。臨床表現類似麻疹，但較麻疹感染癥狀輕，感染的成年人，預后良好。RV對人類健康的最大威脅是它的致畸性，RV感染孕婦可對胎兒產生先天性的損害，尤其是妊娠前12周，病毒可經過血液傳播侵犯胎兒，導致自發流產、死產或胎兒感染[3-4]；被風疹病毒感染的胎兒會有嚴重的出生缺陷，包括白內障、耳聾、心臟病或智力低下等，這些被稱為先天性風疹綜合征。據報道，母體感染發生在受孕后的8周，會影響胎兒多種器官的發育，致畸率100%。風疹病毒可以通過注射疫苗來預防，但是一旦感染，就沒有特效的治療方法，因此，近幾年風疹病毒的檢測作為優生優育項目之一，應用范圍越來越廣[5]。

臨床上通過檢測孕婦血清中風疹病毒IgM抗體，以確定新近感染或急性感染。目前人體血清中風疹病毒IgM抗體的檢測主要有酶聯免疫法、化學發光法、膠體金法和時間分辨免疫熒光法，前兩種方法試劑盒為主流產品。風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒生產企業眾多，在試劑原材料選擇和參考品制備方面存在差異，導致質量參差不齊，因此為了加強對風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒的監督管理，規范市場秩序，保障產品使用安全有效，2014年6月中國食品藥品檢定研究院起草了《風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒抽驗方案》，并于2014年10月中旬前完成檢驗檢測工作，現將抽驗情況及結果匯報如下。

1　儀器與試劑

儀器 酶標儀（型號：MULTISKAN MK3，美國熱電公司）；全自動化學發光免疫分析儀（型號：Liaison XL型，DiaSorin S.p.A公司）；化學發光免疫分析儀（型號：MP280，北京泰格科信生物科技有限公司），化學發光儀（型號：Maglumi 2000，深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司）；化學發光微粒子免疫分析儀（型號：ARCHITECT i2000，Abbott Ireland Diagnostics Division公司）。

參考品 風疹病毒IgM抗體國家參考品：批號：360006-201101，由19份樣品組成，包含5份陽性參考品、10份陰性參考品、1份重復性參考品和3份最低檢測限參考品，均由中國食品藥品檢定研究院提供；企業參考品均由各企業提供。

樣品 本次抽驗共收到來自14家生產企業的17批次試劑，其中酶聯免疫類試劑13批次，化學發光類試劑4批次。樣品中，國產試劑15批次，進口試劑2批次；主要抽自生產企業15批次，僅2批次抽自使用單位（臨床醫院）。

2　檢驗依據和方法

法定檢驗 按照企業產品注冊標準，采用企業參考品，對各試劑進行檢測，檢驗項目包括陽性符合率、陰性符合率、重復性和檢測限。各項目要求參見各標準。試驗中操作步驟嚴格按照各自說明書進行。

探索性試驗 按照風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒行業標準，采用風疹病毒IgM抗體國家參考盤，對各試劑進行檢測，檢驗項目同法定檢驗。各項目要求分別如下： 5份RV IgM抗體陽性參考品，應不得出現假陰性（陽性符合率）； 10份RV IgM抗體陰性參考品，應不得出現假陽性（陰性符合率）；重復性參考品應檢測為陽性，且批內精密度變異系數（CV%）應不大于15.0%（精密度）； 3份最低檢測限參考品，L1和L2應能檢出（檢測限）。試驗中操作步驟嚴格按照各自說明書進行。

3　檢驗結果

除1批次試劑盒因企業不提供參考品，無法進行檢驗予以退檢，其余16批試劑結果如下：

法定檢驗 按照企業產品注冊標準和企業參考品進行檢驗，16批次中15批次試劑的陰、陽性符合率、檢測限均滿足要求，合格率為93.8%。批內精密度變異系數在1.6%～7.3%范圍內，均小于10.0%。1批次試劑部分陰性樣本出現陽性結果，陰性符合率不符合規定，判為不合格。

探索性試驗 采用行業標準和國家參考品進行檢驗，16批次中僅11批次試劑合格，合格率為68.8%，5批次不合格試劑主要不符合項及表現分別為：重復性參考品檢測結果為陰性（5批次）；檢測限參考品L1～L3均為陰性或者L2～L3均為陰性（3批次）；陽性參考品P1～P5均為陰性（1批次）。

4　討論

國家食品藥品監督管理總局網站上的信息統計結果顯示，截止至2015年1月，風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒國產注冊證28個，進口注冊證14個。主要為酶聯免疫法試劑盒，其次為化學發光法試劑盒。國產生產企業為24家，主要集中北京和廣東省，其余散布于浙江、河南、福建和山東。進口代理企業有12家，分布于上海、北京和廣東省。此次監督抽樣僅抽取了來自5個省市的生產企業或使用單位的試劑，共計14家企業的17批產品，抽樣生產或代理企業僅占38.9%。建議今后加大抽驗力度，完善和優化抽樣模式，使抽驗產品可以反映該類產品的真實情況，抽驗結果可以成為有效的參考數據。

法定檢驗中，依據企業注冊標準和企業參考品進行檢測，1批次試劑不合格，陰性參考品檢測結果為陽性，其產生的主要原因可能是：①陰性參考品在分裝的時候被污染了；②與同種屬病毒發生交叉反應；③與其他抗體類型如IgG等發生交叉反應；④陰性參考品在分裝的時候被污染，或者分裝錯誤。

風疹病毒IgM抗體已有國家參考品和行業標準（YY/T 1235—2014），故本次監督抽驗中還開展了探索性實驗，參照行業標準要求，以國家參考品為樣本進行檢測。在探索性研究實驗中，不合格批次上升至5批次，合格率下降至68.8%。主要體現為假陰性表現，其產生的主要原因可能是：①企業選擇的風疹病毒IgM抗體的配對抗原或抗抗體，親和力不足，在識別風疹病毒IgM抗體的時候，識別效率低；②包被的抗原或抗抗體濃度較低；③企業檢測限或靈敏度參考品設置不合理，導致試劑盒質量無法保證。

通過對此次監督抽驗結果的分析，我們認為，由企業提供企業參考品進行注冊檢驗，在判定產品合格方面存在著一定的風險。因為檢驗機構無法有效確認企業參考品信息的真實性，難以進行合理的監督和管理。建議今后檢驗機構采用國家參考品進行注冊檢驗，企業則盡量采用國家參考品或經國家參考品標化的企業參考品，用于試劑的質量控制。因為國家參考品來源信息清楚，多種方法確認并經協作標定，質量可靠，判斷標準客觀公正。

同時，我們發現企業注冊標準也存在以下問題：①2家企業產品注冊標準中缺少關鍵性條款——檢測限 而檢測限是反映試劑可檢測的最低樣本濃度，是判斷試劑敏感性、關系產品質量的重要指標之一，不應省略，故建議在延續注冊時，補充該條款。②標準中條款內容措辭不嚴謹或不完整 如“生產企業最低檢測限參考品應不低于1:800倍稀釋”，這句話從字面的理解，只是描述了最低檢測限參考品的情況，并沒有說明對檢測限項目的要求，此即措詞不嚴謹，應有明確的限定：“生產企業最低檢測限參考品1:800倍稀釋后，應能檢出”。又比如下面這項對最低檢出限的描述：“系列稀釋度參考品S1～S5（系列稀釋度從1:2～1:32）：S1～S3須檢測為陽性，S4可檢測為陰性或陽性”，缺少S5的檢測結果。此即措詞不完整，應增加：“S5檢測應為陰性”。以上問題雖非原則性問題，但企業在制定標準時，應遵循科學、嚴謹、準確、完整的基本原則。③標準項目表述不一 本次抽驗檢測4個項目，各項目表述五花八門，如陽/陰性參考品符合率、陽/陰性符合率、陽/陰性樣本符合率等；而對于檢測限，也有靈敏度、最低檢出限、最低檢出量等多種表述；同樣，精密度、精密性、重復性、批內不精密性、批內精密度、分析內精密度。雖然這些表述都無原則性錯誤，但建議今后的企業標準項目的書寫應參考行標表述，規范用詞。

針對本次監督抽驗中發現的問題，建議將監督抽驗工作作為一項延續性的工作，對問題原因進行深入分析，促使企業改進產品質量，之后再次啟動風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒的監督抽驗，在不同年度通過連續跟蹤的方式動態評價其質量變化，最終達到促進企業提高產品質量的目的。

[1] 馬靜, 郝利新, 羅會明. 風疹病毒及其免疫策略研究進展[J]. 中國疫苗和免疫, 2010, 16(1): 69-71.

[2] Goodson JL, Masresha B, Dosseh A, et al. Rubella epidemiology in Africa in the prevaccine era, 2002-2009[J]. J Infect Dis, 2011, 204 (Suppl) : S215-225.

[3] 崔曉榕. 淺談風疹病毒對孕期的危害及其預防[J]. 中國傷殘醫學, 2013, 21(12): 388-388.

[4] 龍訓琴, 劉韌, 高建萍, 等. 孕婦血清風疹病毒抗體IgM檢測的臨床意義[J]. 臨床醫藥文獻雜志, 2014, 1(9): 1481-1482.

[5] 索慶麗, 胡晞江, 姚婷. 36254例妊娠期孕婦風疹病毒感染狀況分析[J]. 重慶醫學, 2012, 41(32): 3380-3382.

The Quality Analysis of National Supervising Sampling for Rubella Virus IgM Diagnostic Kits in 2014

【 Writers 】YU Ting1, QU Shoufang1, ZHANG Xiaoyan2, SUN Nan1, GAO Shangxian1, LI Haining1, HUANG Jie1
1 The 1st Department of In Vitro Diagnostic Products, NIFDC, Key Laboratory of the Ministry of Health for Research on Quality and Standardization of Biotech Product, Beijing, 100050
2 Jiangsu Institute of Medical Device Testing, Nanjing, 210022

Objective To evaluate the quality status of rubella virus IgM diagnostic kits by national supervising sampling. Methods Using legal inspection combining with exploratory study, the positive and negative coincidence rate, detection limit and repeatability of kits were verified. Results The results showed that 15 of 16 batches of kits were qualified using legal inspection, and the passing rate was 93.8%. The unqualified item was negative coincidence rate. In exploratory study, only 11 batches (68.8%) complied with industry standard. The unqualified items were negative coincidence rate, detection limit and repeatability. Conclusion At present, rubella virus IgM diagnostic Kits have some quality problems in the market. It is recommended that we adopt industry standard and national reference panel in the registration inspection for the future, which will prompt enterprises to improve quality.

rubella virus diagnostic kit, national supervision, quality analysis

R450；TH771

A

10.3969/j.issn.1671-7104.2015.04.013

1671-7104(2015)04-0282-03

2015-03-26

國家高技術研究發展計劃( 863 計劃) (2011AA02A115)

于婷，E-mail: yuting@nifdc.org.cn

黃杰，E-mail: jhuang5522@126.com