標準物質在獸醫生物制品質量控制中的應用狀況分析

陳光華

（中國獸醫藥品監察所，北京100081）

標準物質在獸醫生物制品質量控制中的應用狀況分析

陳光華

（中國獸醫藥品監察所，北京100081）

探討了獸醫生物制品標準物質的概念及其在生物制品質量控制中的應用狀況，分析了我國現階段獸醫生物制品標準物質供應和使用中存在的問題。建議進一步明確有關概念，形成共識，建立科學的獸醫生物制品標準體系，分清各有關單位在標準物質供應工作中的責任，努力形成合力共同推進我國獸醫生物制品標準物質工作進步。

獸醫生物制品；標準物質；質量控制

與化學藥品相比，生物制品檢驗數據和結果更易受到多種因素（人員、環境、儀器設備、試驗動物、試劑、方法等）的影響，但在生物制品檢驗和試驗中使用標準物質進行控制的重視度和應用度不及化學檢測領域。其原因可能包括：對生物學試驗數據漂移現象的容忍度高、對標準物質的概念和作用等理解不透、符合要求的生物制品標準物質獲取困難。為確保獸醫生物制品檢驗數據和結果的準確度，須在檢驗中增加對標準物質的使用；為確保獸醫生物制品標準物質的供應，須明確各方責任，并使各方共同努力，密切協作。

1 獸醫生物制品國家標準物質有關概念

1.1 規程 收載于2000年版《獸用生物制品規程》［1］的“獸用生物制品國家標準品的制備和標定”規定：獸用生物制品國家標準品包括國家標準品、國家參考品和國家參考試劑。國家標準品是指用國際標準品標定的，用于衡量某一制品效價或毒性的特定物質，其生物活性以國際單位表示；國家參考品是指用國際參考品標定的，用途與國家標準品相似的特定物質，一般不定國際單位；國家參考試劑是指用于微生物（或其產物）鑒定或疾病診斷的生物診斷試劑、生物材料或特異性抗血清。

2000年版《中國生物制品規程》［2］則將生物制品國家標準物質分為二類：生物制品國家標準品，即用國際標準品標定的或我國自行研制的（尚無國際標準品者）用于衡量某一制品效價或毒性的特定物質，其生物活性以國際單位或以單位表示；國家參考品，即用國際參考品標定的或我國自行研制的（尚無國際參考品者）用于微生物（或其產物）鑒定或疾病診斷的生物診斷試劑、生物材料或特異性抗血清以及用于某些不用國際單位表示的制品的定量鑒定用特定物質。

1.2 標準物質／標準樣品生產者能力認可準則（2010）標準物質／標準樣品生產者能力認可準則（2010）［3］定義的標準物質（Reference Material）是指具有一種或多種足夠均勻且穩定規定特性的材料，已被確定其符合測量過程的預期用途。

1.3 如何正確理解獸醫生物制品國家標準物質含義由于不同行業、不同領域質量檢驗工作的特殊性，其對標準物質的解釋和要求也是不同的，關于“標準物質”的一般定義不能完全適用于所有行業、所有領域。

對于獸醫藥品（獸醫生物制品）標準物質，至今尚無法定定義。理解獸醫生物制品國家標準物質的含義時，應注意把握以下幾點：獸醫生物制品標準物質不同于一般標準物質；國家標準物質不同于工作標準物質；獸醫生物制品國家標準物質包括不同層級（標準品、參考品、參考試劑），但均由國家法定機構標定和供應；獸醫生物制品國家標準物質用于按國家標準進行檢驗；獸醫生物制品國家標準物質可用單位表示，也可不用單位表示；獸醫生物制品國家標準物質可用于定量，也可用于定性；具有至少一種穩定的特性（定值或定性）。根據以上理解，可將“獸醫生物制品國家標準物質”定義為：由法定單位制備和供應，供獸醫生物制品國家標準中制品生物學特性檢驗用，具有均勻且穩定特性，用以給被檢樣品定性或賦值的物質。

在實際工作中經常有不少疑問，如檢驗用菌毒種、用于試驗用動物篩選的試劑、用于活菌計數和無菌檢驗或支原體檢驗的培養基等，是否屬于標準物質？根據上述定義判定，檢驗用菌毒種對保藏和運輸條件要求較高，自身特性通常難以確保穩定，因此應不屬于標準物質；各種檢驗用培養基、用于試驗動物篩選的試劑，一般做不到由法定單位統一制備和供應，通常可使用商業化產品，因此均不屬于國家標準物質。當然，有些檢驗用材料（如細菌、病毒培養基），盡管不屬于標準物質，但由于其自身質量優劣直接影響檢驗結果的準確性，需設法對其質量加以控制。

制訂標準物質的標準時須充分考慮其預期用途。脫離用途制訂的標準物質標準，必然是無法執行的標準。例如對“豬瘟活疫苗（細胞源）鑒別檢驗用豬瘟抗血清標準物質”，可以制訂出適宜的質量標準；而對“豬瘟抗血清標準物質”則難以制訂出適宜的質量標準，若一定要制訂出標準，那么只能在綜合考慮其所有可能用途的基礎上制訂出超出實際需要的、過于嚴格的標準。

適用于預期用途的標準物質，完全有可能不適用于其他用途，通常不存在適用于所有相關用途的標準物質。如某種抗血清，用于中和方法鑒別檢驗時，只要具備一定的特異性中和能力即為合格的標準物質，即使其中含有一定的外源抗體，也不影響其發揮作用；用于外源病毒檢驗時中和疫苗樣品的特異性抗血清，則須具有足夠的中和能力，且不得有外源抗體；用于診斷試劑敏感性檢驗時，須明確標示血清效價，對是否有其他抗體可無要求。

已經確定用途的標準物質，擴大用途時必須經過充分證明。

2 標準物質在生物制品質量控制中的用途

2.1 直接用于特定制品檢驗 直接為被檢樣品定性（鑒別、純凈、敏感性、特異性）、賦值（含量、效力、效價）或用作對照。

病毒含量測定。如進行雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯活疫苗病毒含量測定時，須用IBV特異性抗血清中和IBV以測定NDV病毒含量，用NDV特異性抗血清中和NDV以測定IBV病毒含量；在進行馬立克氏病活疫苗（HVT FC126株）蝕斑計數［4］時，對待檢品計數的同時，須設立參照品，并進行蝕斑形態和數量對照。

抗原含量檢測。如進行豬肺炎支原體滅活疫苗、豬圓環病毒2型桿狀病毒載體滅活疫苗效力檢驗時，將被檢苗與參考苗一起處理，采用特定方法檢測各自抗原含量，并根據二者結果計算被檢苗相對效力（RP）值；在狂犬病滅活疫苗效力檢驗中，按NIH法對被檢苗和參考苗同時進行檢驗，計算PD50值，進而根據參考苗的國際單位數計算被檢苗的國際單位數。

免疫抗體水平測定。如在高致病性禽流感H5亞型滅活疫苗效力檢驗HI抗體效價測定中所用HA抗原和陰陽性血清、雞新城疫滅活疫苗組份效力檢驗所用HA抗原及陰陽性對照血清、破傷風抗毒素效價測定（結果以IU表示）中所用抗毒素標準品等，均為典型的標準物質。

鑒別檢驗（定性）。如有關活疫苗鑒別檢驗中所用IBDV特異性抗血清、IBV特異性抗血清、NDV特異性抗血清、小鵝瘟病毒特異性抗血清等。

診斷抗原的效價測定。如在布氏菌病平板凝集試驗抗原效價測定中須用陽性血清國家標準品，雞白痢雞傷寒多價染色平板凝集試驗抗原效價測定中須用標準型血清標準品和變異型血清標準品進行平板凝集試驗，提純牛結核菌素PPDB效價測定中須用PPDB標準品。

診斷試劑的敏感性檢驗。如在牛羊口蹄疫病毒VP1結構蛋白抗體ELISA診斷試劑盒敏感性檢驗中須用VP1陽性參考血清。

可實現對電能質量、計劃 用電、用電稽查、負荷狀態和故障狀態的數據分析處理，工作人員可及時發現電網系統中的各項異常情況，并且妥善采取解決措施降低危害及風險，為電力用戶提供強有力的保障。

診斷試劑的特異性檢驗。如在布氏菌病平板凝集試驗抗原特異性檢驗中須用陰性血清作為標準物質，雞白痢雞傷寒多價染色平板凝集試驗特異性檢驗中須用陰性血清。

2.2 用于通用方法和項目的檢驗 外源病毒檢驗［4］中，通常情況下須用特異性抗血清將疫苗病毒中和處理，非禽源外源病毒檢驗中所用多種熒光抗體，REV檢測中所用REV熒光抗體，BLV檢測中所用ELISA試劑，雞檢驗法外源病毒檢驗中須用各種抗體檢測試劑，均屬標準物質。

2.3 檢驗質量控制（對照） 為提高檢驗結果的準確性，須對檢驗工作采取質量控制措施，其中，標準物質的使用是必不可少的。如在禽白血病病毒檢驗法［4］（COFAL試驗或ELISA試驗）中須用病毒對照（將RAV1和RAV2接種細胞單層，與被檢樣品進行類似的傳代等操作），補體結合試驗中須用BLV標準抗血清；非禽源疫苗（或細胞、種毒）外源病毒檢驗-熒光抗體檢查法中須用特定病毒陽性對照。

3 獸醫生物制品標準物質供應和應用方面存在的問題

3.1 對標準物質重要性認識不足 可能源于對檢驗或試驗數據質量意識的淡薄和質量控制方法的欠缺，在獸醫生物制品研制中未對標準物質的制備及其質量等進行充分研究；國家標準制定中未充分考慮標準物質的研制供應狀況，造成大量國家標準發布實施后缺乏對應的國家標準物質供應，進而造成國家標準無法執行；部分獸醫生物制品國家標準物質未按科學程序進行研制、審批即投入使用，存在一些“不標準”的“國家標準物質”。

3.2 概念混亂責任不清 《獸用生物制品規程》中只就“生物制品國家標準品”做了簡單的定義，但對其用途及企業質量檢驗所用標準物質缺少進一步規范。根據國際通行做法，標準物質應區分為一級標準物質（國家標準物質）和二級標準物質（或稱次級標準物質、工作標準物質）［5］。科研生產單位應根據國家標準物質制備和標定工作標準物質，用于科研生產單位內部的質量檢驗。目前我國的多數科研生產單位未履行制備標定工作標準物質的職責，通常直接購買國家標準物質用于內部檢驗，在一定程度上造成資源浪費。大量國家標準物質被降級為工作標準物質使用時，當國家標準物質供應不能滿足科研生產單位需要時，這些科研生產單位又反過來將供應不足的責任推給國家法定機構。根據《獸藥管理條例》［6］規定，農業部設立的獸藥檢驗機構只有標定和供應國家標準物質的責任和義務。當國家標準物質供應短缺時，科研生產單位理應自行解決其自身所需工作標準物質的供應問題［7］。在生物制品監督檢驗中還存在另一種現象，即在對部分制品（主要是進口生物制品）實施監督檢驗時，因缺少國家標準物質，將從有關企業索取的工作標準物質用于監督檢驗（即用作國家標準物質），這一現象在一定程度上也反映了對國家標準物質理解不透、標定供應責任不清的問題。

3.3 獸醫生物制品質量標準體系混亂 我國獸醫生物制品標準尚未建成體系，是有關標準物質制備供應責任不清、供應跟不上需求的根本原因。根據《標準化法》，標準體系包括國家標準、行業標準、地方標準和企業標準。具體到獸醫生物制品標準體系，應包括國家標準和企業標準。但在實際管理中，將大量的企業標準審批發布為國家標準，并未制定在全國范圍內真正適用于所有同類產品的國家標準。如此一來，本應由企業自行制備標定的二級標準物質統統成為應由中國獸醫藥品監察所制備標定和供應的國家標準物質。只有建立起符合《標準化法》和與國際標準接軌的獸醫生物制品標準體系，使國家標準和企業標準分離，法定機構供應國家標準物質、企業制備標定二級標準物質的責任和義務才能得到明晰。

3.4 國家標準物質不標準 國家標準物質應按照適宜方法予以建立；其持續適用性需通過預定計劃進行監測。由于目前的獸醫生物制品國家標準物質制備標定工作程序尚不十分規范，個別標準物質制備方法不科學，加之有些實驗材料（如試驗動物）不過關，檢測手段不全面，試驗系統有缺陷，部分國家標準物質可能還不能完全符合預期用途，無法確保檢驗數據、結果、結論的準確性。

3.5 建立的質量標準方法不合理 標準物質與質量標準相伴而生。離開質量標準談標準物質，純屬空談；沒有標準物質的質量標準屬無法實施的標準。部分標準物質無法供應恰恰反映出質量標準制定工作上存在的突出問題。如血清中和試驗是病毒類活疫苗鑒別檢驗的常用方法，但并不意味著該方法是唯一科學的方法，對于不能有效中和的病毒（雞傳染性喉氣管炎病毒、雞痘病毒）或高效價中和用血清難以獲得的有關產品（如高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒），完全可以根據研究資料提出其他方法（如免疫熒光法）標準。此外，獸藥典附錄中的方法永遠不是唯一科學合理的方法，當某些產品質量標準中完全采用獸藥典附錄方法和標準時（如中和10頭份疫苗），可能造成實際檢驗中無法實施，其表面現象雖為標準物質不符合使用用途（如抗血清不能中和10頭份疫苗），但其問題本質是標準不科學。

4 改進措施建議

4.1 建立科學的獸醫生物制品標準體系 明確獸醫生物制品標準物質、國家標準物質、工作標準物質等有關概念，厘清各單位在標準物質制備供應工作的責任。有關技術法規中應明確：獸醫生物制品標準物質包括國家標準物質（一級標準物質）和工作標準物質（二級標準物質）；獸醫生物制品生產企業在產品質量檢驗中所用企業標準物質應由企業供應，并溯源到國家標準物質。

有關法規中應明確：獸醫生物制品標準體系由國家標準和企業標準組成。制訂國家標準時，須由獸藥典委員會根據我國現階段的技術條件、國際標準狀況、國內企業獸藥生產和產品質量狀況，就產品的關鍵技術參數制訂適用于同類產品的檢測方法和限度指標。具體工作中可將有關企業標準作為參考之一，但絕不能作為唯一依據。國家標準中采用的多為最為成熟和被廣泛認可的、經典的、適用范圍最廣的方法，限度指標為保證產品基本質量要求所必需的最低限度要求。而企業標準則有諸多不同特點：其參數可多于國家標準，可根據其產品工藝和質量特點增加自認為必要的質量控制參數；其方法可以是不同于國家標準的、經試驗證明與國家標準方法有一定相關性的、利用最新技術進步的或更加易于操作的方法；其限度指標應根據產品穩定性數據來確定，以確保該產品在規定的保存條件下保存至承諾的有效期末仍能符合國家標準的限度要求。如此一來，國家標準數量將大大減少，國家標準物質需求的確定性大大提高，完成其供應職責才具有現實的可能性。

中國獸醫藥品監察所負責獸醫生物制品國家標準物質制備供應，企業負責制備和供應執行企業標準時所需的配套標準物質。即使企業標準中等同采用國家標準方法，各企業也應建立本企業的工作標準物質，中國獸醫藥品監察所可不供應國家標準物質用于企業內部質量檢驗。

4.2 形成合力，推動獸醫生物制品標準物質工作

新制品研制中應就標準物質制備標定等開展扎實的研究工作，在推出新制品的同時即應推出配套的標準物質。生物制品技術評審中應加強對標準物質研究資料的審查，對雖然產品質量過硬但因缺乏有關標準物質而無法進行質量控制的，不予以審批。標準制定工作應與標準物質研制標定工作協調一致，對標準物質供應可能存在困難的標準，應暫不列為國家標準。法定檢驗機構和各企業應切實提高對標準物質工作的重視程度，制定并執行嚴格的標準物質工作規范，確保國家標準物質和工作標準物質的質量。GMP檢查驗收中須加強對企業內部的工作標準物質供應以及檢驗工作質量的監督檢查。

［1］ 中國人民共和國農業部.中華人民共和國獸用生物制品規程（二○○○年版）［S］.

［2］ 中國生物制品標準化委員會.中國生物制品規程2000年版［S］.

［3］ 中國合格評定國家認可委員會.標準物質／標準樣品生產者能力認可準則（CNAS-CL04）［Z］.

［4］ 中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二○一○年版（三部）［S］.

［5］ 歐洲藥品管理局.歐洲藥典8.4版［S］.

［6］ 中華人民共和國國務院.獸藥管理條例［Z］.

［7］ 農業部令第44號.獸藥注冊辦法［Z］.

（編輯：侯向輝）

Analysis on the Application of Reference Material in the Quality Control of Veterinary Biological Products

CHEN Guang-hua
（China Institute of Veterinary Drug Control，Beijing 100081，China）

The concept of reference material of veterinary biological products and its application in the quality control of veterinary biological products was investigated.Existing problems in supply and application related to the reference material of veterinary biological products were analyzed.Proposals made according to current situation and existing problems include clarifying the definition and classification of reference material of veterinary biological products so as to reach a consensus，establishing a scientific quality standard system for veterinary biological products，differentiating the responsibility of different entities in supplying reference material of veterinary biological products and making dramatic progress in supplying reference material of veterinary biological products through cooperative arduous efforts.

veterinary biological products；reference material；quality control

2015-04-02

A

1002-1280（2015）05-0001-04

S851.66

陳光華，碩士，副研究員，從事獸藥（獸醫生物制品）質量監督工作。E-mail：chenguanghua＠ivdc.org.cn