高譜對(duì)銀杏葉黃酮內(nèi)酯含量的測(cè)定及銀杏葉的鑒用

阮成鋒 阮成鈞

（河南省信陽(yáng)市潢川縣人民醫(yī)院中藥房，河南 信陽(yáng) 465150）

1 銀杏葉的含量測(cè)定

1.1 儀器與試藥：①高效液相色譜儀。②微量注射器。③分析天平。④水浴鍋，分析漏斗蒸發(fā)器。⑤甲醇。⑥蒸餾水。⑦C18色譜柱，⑧銀杏總黃酮醇苷，萜類內(nèi)酯對(duì)照品。⑨銀杏葉。⑩甲醇-40%磷酸、五氧化二磷、醋酸乙酸等。11微孔濾膜（0.45 mm）有機(jī)組。

1.2 總黃銅醇進(jìn)行含量測(cè)定

1.2.1 利用高效液色譜條件與系統(tǒng)適用性進(jìn)行試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑，以甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）為流動(dòng)組，檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm。理論塔板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2500、山奈素峰與異鼠李素峰的分離度應(yīng)＞1.5[1]。

對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱取五氧化二磷干燥的槲皮素，山奈素，異鼠李素對(duì)照品，各加甲醇制成每1 mL含槲皮素0.03 mg、山奈素0.03 mg、異鼠李素0.02 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。

供試品溶液的制備：取銀杏葉20 g，除去雜質(zhì)精密稱定，研細(xì)取約相當(dāng)于總黃酮醇苷19.2 mg的粉末，精密稱定，精密加入甲醇20 mL稱定重量超聲處理20 min，放冷。再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 mL，置100 mL錐形瓶中，加甲醇10 mL，25%鹽酸溶液5 mL，搖勻，置水浴中加熱回流30 min，迅速冷卻至室溫轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微子（濾膜0.45 mm）濾過(guò)，去濾液，既得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 mL注入液相色譜儀，測(cè)定。分別計(jì)算檞皮素，山奈素，和異鼠李素的含量，測(cè)定出總黃酮醇苷的含量。

1.2.2 用高效液色譜儀再對(duì)萜類內(nèi)酯含量進(jìn)行測(cè)定。高效液色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑以正丙醇-四氫呋喃-水（1∶15∶84）為流動(dòng)相，用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，理論塔板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，白果內(nèi)酯峰與銀杏內(nèi)酯C峰的分離度應(yīng)＞1.5。

對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱取白果內(nèi)酯，銀杏內(nèi)酯A銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C對(duì)照品適量加甲醇制成每1 mL含銀杏內(nèi)酯A 1 mL，銀杏內(nèi)酯B 1 mL銀杏內(nèi)酯C 1 mL的混合溶液既得。

供試品溶液的制備：取銀杏葉20 g，除去雜質(zhì)，精密稱定，研細(xì)，取相當(dāng)于總黃酮醇苷的76.8 mg、萜內(nèi)酯19.2 mg的粉末，精密稱定。精密加入甲醇50 mL稱定重量，超聲處理20 min，放冷再稱重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20 mL回收甲醇?xì)堅(jiān)铀?0 mL，置水浴中溫?zé)崾谷苌⒓?%鹽酸溶液2滴，用乙酸乙酯振搖提取4次（15、10、10、10 mL）合并提取液，用5%醋酸鈉溶液20 mL洗滌，分取醋酸鈉液，再用醋酸乙酯10 mL洗滌。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗滌2次，每次20 mL，合并水洗液，用醋酸乙酯10 mL洗滌，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，殘?jiān)帽芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加丙酮至刻度，搖勻，既得。

用測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10、15 μL，供試品液10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程分別計(jì)算白果內(nèi)酯，銀杏內(nèi)酯A銀杏內(nèi)脂B銀杏內(nèi)酯C的含量。既得。本品每片含萜類內(nèi)酯以白果內(nèi)酯（CH15H18O8），銀杏內(nèi)酯A（C20H24O9）銀杏內(nèi)酯B（C20H24O10）銀杏內(nèi)酯C（C20H24O11）的含量之和記。

2 銀杏葉屬性

2.1 銀杏葉屬綱：銀杏葉屬銀杏綱Ginkgopsida植物為落葉喬木，枝條有長(zhǎng)短枝之分。單葉，扇形，先端二裂，葉脈二叉狀分枝。花雌雄異株，精子具多纖毛。種子核果狀[2]。

2.2 銀杏葉屬科：銀杏葉屬銀杏科Ginkgoaceae：它的形態(tài)特征是落葉喬木，營(yíng)養(yǎng)性長(zhǎng)枝頂生，葉螺旋狀排列，稀疏，有較長(zhǎng)的葉柄：生殖性短枝側(cè)生，葉簇生。葉片扇形，2裂。雄球花葇荑花序狀，雄蕊多數(shù)具短柄，花藥2室：雌球花具長(zhǎng)柄，柄端有兩個(gè)杯狀心皮，又稱珠托，其上各生一直立胚珠，長(zhǎng)一個(gè)發(fā)育。種子核果狀：外種皮肉質(zhì)，成熟時(shí)橙黃色：中種皮白色，骨質(zhì)：內(nèi)種淡紅色，紙質(zhì)。胚乳肉質(zhì)。

3 性狀鑒別

葉片多皺折或破碎，完整呈扇形，長(zhǎng)4～8 cm，寬5～10 cm，上緣有不規(guī)則波狀缺刻，有的中央凹入，基部楔形，葉脈細(xì)密，為多數(shù)二叉狀平行脈；葉柄長(zhǎng)2～7 cm。紙質(zhì)，易縱向撕裂。氣微，味微澀。以色黃綠、完整者為佳。分布：僅有一屬一種和幾個(gè)變種，產(chǎn)于中國(guó)及日本。

4 化學(xué)成分

銀杏葉的有效成分為黃酮類：其中有3種雙黃酮：①單黃酮類主要為槲皮素，山奈酚和異鼠李素及它們形成的苷類物質(zhì)。②雙黃酮類化合物主要有銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮、去甲銀杏雙黃酮、穗花衫黃酮、金松雙黃酮及1-5甲氧基去甲銀杏雙黃酮等。③茶素類主要有兒茶素、表二茶素、沒(méi)食子酸兒茶素和表沒(méi)食子酸兒茶素等[3]。除此之外，還有苦味質(zhì)，酸性化合物，萜內(nèi)酯主要有銀杏內(nèi)酯A、B、C、M、J和白果內(nèi)酯等。

5 銀杏葉的藥理作用

①對(duì)心血管系統(tǒng)的作用：從銀杏葉中提取的黃酮醇對(duì)豚鼠離體心臟灌流能引起冠狀血管擴(kuò)張；注射給藥對(duì)豚鼠后肢血管亦有擴(kuò)張作用。葉的粗提物（每毫升含總黃酮甙4.263 mg）可對(duì)抗腎上腺素所致離體兔耳的血管收縮作用，總甙的作用較弱；對(duì)麻醉兔肌肉注射臨床用量的20～40倍，對(duì)血壓、呼吸均無(wú)影響。②對(duì)腦血管系統(tǒng)的影響：葉的提取制劑口服或靜脈注射，可使帕金森病患者的腦血流量增加，改善腦的營(yíng)養(yǎng)[4]。銀杏葉制劑（CBE）能增加腦血流量，對(duì)腦細(xì)胞缺血缺氧，腦水腫有保護(hù)作用。③對(duì)血小板聚集，血栓形成的影響：銀杏內(nèi)酯可濃度依賴性地仰制血小板活化因子（PAF）誘導(dǎo)的血小板聚集，但對(duì)花生四烯酸及adp誘導(dǎo)的血小板聚集幾無(wú)影響。④對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響：槲皮素具有良好的祛痰作用，能促進(jìn)痰液分泌和氣管纖毛運(yùn)動(dòng)β-谷甾醇有鎮(zhèn)咳祛痰的作用。⑤鎮(zhèn)痛：皮下注射銀杏葉總黃酮可顯著減少醋酸所致小鼠扭動(dòng)次數(shù)，皮下注射和側(cè)腦室注射銀杏葉總黃酮均可顯著提高小鼠熱板法祛痛。

6 銀杏葉的臨床運(yùn)用

銀杏葉可廣泛用于帕金森病、腦血管病、冠心病、心絞痛、高膽固醇血癥等癥的治療[5-8]。

7 總 論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)銀杏葉高效液色譜法，所建立的基于高效液相色譜法進(jìn)行化學(xué)分析同時(shí)，測(cè)定銀杏葉提取物中總黃酮醇苷和萜類內(nèi)酯的含量及鑒別應(yīng)用，具有快速、高效、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，該方法為提高銀杏葉提取物及其制劑的質(zhì)量控制水平，準(zhǔn)確全面地評(píng)價(jià)其內(nèi)在品質(zhì)提供了有力的技術(shù)數(shù)據(jù)。保證了療效使臨床用藥更加安全有效。

參考資料

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[2]姚振生.藥用植物學(xué)[M].北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2002:215.

[3]匡海學(xué).中藥化學(xué)[M].北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2002:178.

[4]侯佳玉.中藥藥理學(xué)[M].北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2002:151.

[5]李靜玲,林小鳳,馮鵬,等.銀杏葉提取物保護(hù)心肌缺血再灌注損傷的研究進(jìn)展[J].臨床合理用藥雜志,2013,6(25):180-181.

[6]劉馨雨,鄭詠秋,劉建勛.銀杏葉有效成分抗腦缺血再灌注損傷作用的機(jī)制研究進(jìn)展[J].世界中醫(yī)藥,2013,8(10):1142-1146.

[7]呂錫亮.中藥治療帕金森病方法及其藥理作用研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2013,9(7):62-63.

[8]孫秀玲.銀杏葉制劑的臨床應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2014,12(35):262-263.