尿肌酐測定方法的改良

□ 蒯 霞

肌酐是肌酸和磷酸肌酸代謝的終產物，它主要由肌肉中磷酸肌酸的非酶促反應生成。對正常成人來說，每日產生肌酸酐的量是恒定的，而且肌酸酐的產生量與肌肉量成正比，因此一般男性的數值比女性高一點。經常鍛煉肌肉者和非素食者的數值也較高。肌酸酐的產生量一定，而且不會在過濾后被腎小管重吸收。它的排泄量反映血液中的肌酸酐含量和腎小球的過濾速率，也就是腎臟的機能。當腎發生嚴重病變時，肌酸酐排泄受阻，血液中肌酸酐含量升高。血液中肌酸酐的測定，可以知道腎功能是否有嚴重障礙，肌酸酐的值越高，腎臟的障礙越大;但是血液肌酸酐只有在腎臟有嚴重障礙時才會大幅提高，不能作為早期腎臟病的指標。同時肌酐值也是作為其他檢測項目的校正值。

一、實驗原理

肌酐與過量苦味酸在堿性條件下反應生成橙紅色苦味酸肌酐。在波長492nm處比色定量。

二、實驗器材及耗材

10ml的采尿管;10ml的具塞比色管;96孔板、酶標儀MULTISKAN MK3;加樣槍 5ml、1ml、100ul，槍頭;振蕩器。

三、試劑

(一)飽和苦味酸。稱取苦味酸(A.R)15克，置于大燒杯中，加蒸餾水1，000ml，冷卻后有結晶析出，表示已達飽和，傾出上清夜備用。此液標準飽和度的測定—準確取清夜10ml，用0.1%酚酞作指示劑，以0.1N的氫氧化鈉(NaOH)滴定需5.2～5.4ml應能中和為準。

(二)2.5N的氫氧化鈉溶液。稱取氫氧化鈉(NaOH)100克，加蒸餾水使溶解，冷卻后用蒸餾水稀釋至1升。

(三)堿性苦味酸。準確量稱取飽和苦味酸5份，加2.5N的氫氧化鈉1份，應用時即配即用為宜。

(四)肌酐標準儲備液(1mg/ml)。準確量稱取純肌酐500mg，用0.1mol/L鹽酸溶解，然后移至500ml的容量瓶中，加0.1mol/L鹽酸至刻度。加甲苯數滴防腐，存于冰箱，此溶液穩定，可長期保存。

(五)肌酐標準應用液(0.01mg/ml)。準確量取3ml標準儲備液，置于500ml的容量瓶中，加水稀釋至刻度(此溶液可保存一周以上)。

四、操作步驟

(一)樣品處理。取0.1ml尿樣置于10ml比色管中，加水至3ml。

(二)試劑空白。取3ml水置于10ml比色管中。

(三)繪制標準曲線。取8支比色管，按表1配制。

表1

向各管加入2.0ml堿性苦味酸，混勻，于室溫下反應20～30min，加 5ml水，混勻，備用。

將96孔板每孔先加入0.1ml水，再從比色管中取0.1ml溶液加入。放入酶標儀度數。根據吸光度計算。

相比WS/T97-1996尿中肌酐分光光度測定方法，線性范圍擴大為0～3g/L，可以同時檢測大量樣品。

五、檢測數據

圖1 改良后的標準曲線

圖2 改良前的標準曲線

六、檢測結果

改良過后的方法與之前的方法所測的肌酐值在0～1g/L，區間內差不多一樣。高于1的用722分光光度計做不出來，已經不成線性。

七、結果分析

改良后的方法可以對大量的樣品進行同時度數，且檢測范圍也擴大了，有助于高值的檢測。正常人尿液當中的肌酐范圍在0.35～2.25g/L。但是有時候檢測的尿樣中肌酐含量超過3g/L，所以該良好的方法有助于更好地檢測尿液中的肌酐。此外，改良過后的方法可以同時檢測大批樣品，節約時間，解放勞動力。總之改良好的方法既節約了時間和人力也提高了準確度和檢測范圍。

八、干預措施

尿液中肌酐升高或降低都說明機體可能發生病變，例如升高以后會出現夜尿增多、乏力、口渴、身上出現浮腫、血壓升高、心力衰竭、肺水腫等癥狀，這是水代謝失衡的表現。降低可能是因為患者腎臟內發生了纖維化，而纖維化導致腎臟固有細胞損壞，破壞了腎臟固有細胞的組織結構，損傷了腎功能。