HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度的效果分析

金士萍

HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度的效果分析

金士萍

目的分析高效液相色譜法(HPLC法)測定人血漿中氯氮平濃度的效果。方法選用Eclipse plus C18色譜柱, 具體規格為100 mm×4.6 mm, 3.5 μm；采用0.5%三乙胺溶液作為流動性, 具體規格為冰醋酸調節pH=8.0；甲醇∶水(75∶25, V/V)。流速為1 ml/min, 檢測波長為254 nm, 柱溫定為30℃, 進樣量為20 μl, 以乙醚為萃取液。堿化血漿后, 以Agilent固相萃取小柱將血漿中的氯氮平提取出來, 運用HPLC法對人血漿中氯氮平濃度進行檢測。結果具有良好的線性關系的前提條件為血漿氯氮平的濃度在0.10～2.00 mg/L。最低檢測限為5 μg/L(rsn=3)。對照品血漿的回收率高濃度為(92.1±3.1)%,低濃度為(105.8±7.6)%, 中間濃度為(96.7±8.2)%；日內和日間RSD高濃度分別為0.5%、7.1%, 低濃度分別為7.4%、7.6%, 中間濃度分別為4.6%、5.8%。結論HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度的效果良好,值得推廣。

高效液相色譜法；人血漿中氯氮平濃度；效果

氯氮平是第一代非典型抗精神病藥物, 鎮靜作用強, 在臨床藥物應用中具有強大的抗精神病效應［1］。氯氮平雖然對精神病的治療效果顯著, 但是也存在著不可忽視的弊端, 其不良反應主要為粒細胞缺乏癥和癲癇發作［2］, 從而使氯氮平在臨床上的應用受到限制。如果能夠運用儀器檢測, 得到可靠的血液中氯氮平藥物濃度的量, 給患者正確的使用適宜的藥物劑量, 相應的就可以避免或者減少不良反應的發生。隨著醫學技術的不斷進步, 分析儀器在臨床檢驗中得到應用,使用HPLC法進行藥物濃度檢查, 操作簡單, 可以快速的完成藥物濃度的檢測, 但是在對于氯氮平藥物的檢測效果如何,是否會受到一些外界因素的影響和干擾, 影響檢驗結果的準確性。因此作者通過以下HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度的效果分析得以求證, 對臨床精神疾病指導合理用藥提供可靠依據, 具有重要的參考價值。

1 材料與方法

1.1 試藥與儀器

1.1.1 試藥 購買上海九福制藥廠生產的批號：020417的氯氮平對照品, 純度為99.9%；購買天津市科密歐化學試劑有限公司生產的批號為20140102的甲醇, 屬于HPLC專用；分析純試劑包括乙醚、冰醋酸、三乙胺等。

1.1.2 儀器 Agilent公司生產的1260系列溶劑管理系統、二極管陣列檢測器、固相萃取裝置等；Millipore公司生產的Milli-Q純水過濾儀；天津市東康科技有限公司生產的真空負壓泵；北京醫用離心機廠生產的LDZ5-2低速自動平衡離心機；上海精科實業有限公司生產的XW-80A旋渦混合器；上海上平儀器有限公司生產的FA/JA系列電子分析天平；杭州奧立儀器有限公司生產的PHS系列實驗室pH計；天津市東康科技有限公司生產的DS系列超聲波清洗器。

1.2 色譜條件 美國Agilent公司Eclipse plus C18色譜柱,具體規格為100 mm×4.6 mm, 3.5 μm；采用0.5%三乙胺溶液作為流動性, 具體規格為冰醋酸調節pH=8.0；甲醇∶水(75∶25, V/V)。流速為1 ml/min, 檢測波長為254 nm, 柱溫定為30℃,進樣量為20 μl, 以乙醚為萃取液。

1.3 方法

1.3.1 配置對照品溶液 將1.30 mg氯氮平對照品精密稱取出來, 在10 ml容量瓶中用甲醇稀釋, 搖勻, 將對照品儲備液配制出來, 濃度為130 mg/L, 將母液設定為該儲備液(于4℃避光保存3個月穩定不變備用), 并將系列濃度的對照品溶液分別配制出來［3］。

1.3.2 處理血漿樣品 在-20℃的溫度條件下在暗處將冷凍保存的正常人肝素抗凝血漿自然熔融, 混勻后將1 ml取出來, 置于10 ml磨口試管中, 用微量注射器吸取標準應用液5 μl以及1 mol/L NaOH(氫氧化鈉)溶液200 μl準確加入其中, 然后加入乙醚4 ml, 進行30 s的旋渦振蕩, 并進行5 min離心,離心速率為3000 r/min, 靜止分層, 將全部上清液傾取出來置于錐形離心管中, 進行固相萃取。將離心管置于40℃水浴在氮氣流下將洗脫液吹干。預先用1 ml甲醇活化OASIS固相萃取小柱, 然后用1 ml水對其進行洗滌后備用, 用100 μl甲醇溶解離心管中的殘留物, 用微量注射器吸取出20 μl在色譜儀上進樣(流動相復溶和進樣［4］)。

1.4 統計學方法 采用DAS2.0藥物代謝動力學軟件對數據進行回歸分析。

2 結果

2.1 色譜行為 為了確保血樣測定可靠性, 氯氮平在本法色譜分離條件下, 以 6.5 min的保留時間分離完整, 其檢測不會受到血漿中內源性物質的干擾, 出峰完全。

2.2 制備標準曲線 將100 μl系列濃度的對照品溶液精密量取出來置于10 ml磨口試管中, 將1ml空白血漿加入其中,使血漿中對照品的濃度分別為0.10、0.25、0.50、1.00、1.50、2.00 mg/L, 操作過程中嚴格依據血漿樣品處理方法進行。以對照品氯氮平峰面積(Y)線性回歸其血漿中濃度(X), 將回歸方程得出來, 即Y=1661491.3X+118958.4, r=0.9988(n=6)。從此處可以看出, 具有良好的線性關系的前提條件為血漿氯氮平的濃度在0.10～2.00 mg/L。最低檢測限為5 μg/L(rsn=3)。

2.3 萃取回收率 在對含對照品血漿進行處理的過程中嚴格依據血漿樣品處理方法進行, 進樣前將固相萃取小柱處理, 比較其和對照品直接進樣所得峰面積, 從而對方法的萃取回收率進行有效評價, 結果高濃度為2.00 mg/L, 低濃度為0.10 mg/L, 中間濃度為0.50 mg/L, 每種濃度進行5次重復, 高濃度的萃取回收率為(93.8±4.7)%, 低濃度的萃取回收率為(97.3±4.2)%, 中間濃度的萃取回收率為(96.9±5.5)%。

2.4 加樣回收率和精密度 分別將100 μl不同濃度的對照品溶液量取出來, 向1 ml空白血漿加入, 使血漿中對照品濃度分別為0.10、0.50、2.00 mg/L, 操作過程中嚴格依據血漿樣品處理方法進行, 日內進行6次測定, 隔日進行1次測定,結果高濃度為2.00 mg/L, 低濃度為0.10 mg/L, 中間濃度為0.50 mg/L, 對照品血漿的回收率高濃度為(92.1±3.1)%, 低濃度為(105.8±7.6)%, 中間濃度為(96.7±8.2)%；日內和日間RSD高濃度分別為0.5%、7.1%, 低濃度分別為7.4%、7.6%,中間濃度分別為4.6%、5.8%。

3 討論

從本研究結果中可以看出, HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度的效果良好, 不僅具有較少的干擾、較高的靈敏度、較為簡單的操作、準確性好、分析周期不長、方法很實用等,而且選用的試驗試劑均為國產品價格低廉, 來源容易［5,6］。臨床在檢測血藥濃度過程中測定大批量樣本的要求, 能夠在其作用下得到有效滿足, 值得推廣。

［1］張文英, 郭莉萍, 沈廣虎.在線固萃取—高效液相色譜法檢測人血清中氯氮平濃度.山東醫藥, 2013, 53(19):52.

［2］楊輝, 張冰, 李榮, 等.高效液相色譜法測定人血清中氯氮平濃度.中國實用醫藥, 2010, 5(20):92.

［3］樓江, 王峰, 李煥德.陽離子色譜柱-HPLC法測定人血漿中氯氮平及去甲氯氮平濃度.藥物分析雜志, 2013(1):44-49.

［4］劉偉忠, 陳清霞, 朱軍.等.RP-HPLC法同時測定人血漿中氯氮平、喹硫平濃度.中國藥師, 2010, 13(7):930-932.

［5］馬武翔, 楊穎琳.反相高效液相色譜法測定人血漿中氯氮平濃度.中國藥房, 2003, 14(6):48.

［6］錢南萍, 馬瑩, 夏曉燕.HPLC法測定人血漿中氯氮平濃度.江蘇藥學與臨床研究, 2006, 14(5):303-304.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.04.182

2014-11-26］

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