致犢牛腹瀉大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

魏潤

（新疆沙灣縣草原工作站832100）

致犢牛腹瀉大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

魏潤

（新疆沙灣縣草原工作站832100）

對農七師123團牛場犢牛所發生的一種以急性腹瀉、脫水及虛脫為主要特征的傳染病進行了病原的（病料：心血、肝、脾淋巴）分離、培養和鑒定，觀察了對兔血的溶血情況，并對兩株分離株進行小白鼠感染試驗，確定引起此次發病的病原菌為大腸桿菌。通過對兩株分離株做藥敏試驗，表明該分離菌對硫酸鏈霉素、慶大霉素、恩諾沙星敏感，對土霉素中敏，對其他藥物有抗藥性。確定引起該牛場犢牛腹瀉的病原，為臨床預防和治療提供了依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病原來源

農七師123團牛場病死犢牛的心血、肝、脾、淋巴結。

1.1.2 培養基

LB培養基、麥康凱培養基、SS培養基、三糖鐵瓊脂培養基、鮮血平板、生化鑒定培養基。

1.1.3 藥敏紙片

慶大霉素、卡那霉素、硫酸鏈霉素、恩諾沙星、土霉素等。

1.1.4 生化試劑

1.1.4.1 革蘭氏染色試劑

碘化鉀、草酸銨、堿性復紅、95%乙醇、碘片、結晶分析純化學試劑，自配。

1.1.4.2 生化鑒定試劑

葡萄糖、乳糖、麥芽、甘露醇、蔗糖、靛基質、硫化亞鐵、硫酸鈉、α-萘酚、氫氧化鉀、甲基紅、無水乙醇、硫化氫。

1.1.5 實驗動物

5只18～20g健康小白鼠。

1.2 方法

1.2.1 流行病學調查

了解飼養管理，消毒，天氣，發病過程，發病率，死亡率，發病癥狀以及大體解剖學的病變，以便于進一步了解其發病特征。

1.2.2 病料的采集及鏡檢

無菌操作，采集病死牛的心血、肝、脾、淋巴結，并進行涂片、染色、鏡檢。

1.2.3 病原菌的分離、培養

分別接種于LB肉湯中37℃培養24h，并進行革蘭氏染色，鏡檢、觀察。

1.2.4 病原菌的純化

細菌分離培養將肺臟、肝臟、脾臟和淋巴結分別接種新鮮兔血營養瓊脂平板，每種臟器接種4份平板，2份進行普通需氧培養，2份進行普通厭氧培養，置于37℃恒溫箱內24h后觀察結果，對培養出的細菌進行革蘭氏染色及鏡檢，將培養出的細菌純培養，將純培養物接種LB、麥康凱、三糖鐵斜面（穿刺），培養基37℃需氧培養，24h后觀察結果。

1.2.5 生化鑒定

1.2.5.1 糖類分解試驗

取分離菌的24h純培養物分別接種于葡萄糖、乳糖、麥芽甘露醇培養基內，37℃培養24h，觀察結果。

1.2.5.2 MR/VP試驗

取分離菌的24h純培養物分別接種在葡萄糖蛋白胨水溶液中，培養37℃24～48h，加入指示劑。

1.2.5.3 硝酸鹽還原試驗

取分離菌的純培養物接種到硝酸鹽培養基中，37℃培養24h，在加試劑甲和乙，30s內變紅即為陽性，若無顏色出現，加少量鋅粒，隨后出現紅色則是真正的隱形試驗。

1.2.6 藥敏試驗

用藥敏紙片法（主要為常用的青霉素類和四環素類）來檢測對抗生素藥物的敏感性。

1.2.7 動物試驗

動物致病性試驗，將分離到的大腸桿菌接種到營養肉湯，37℃培養10h，取其培養液接種實驗動物，設置對照組。

1.2.8 溶血試驗

采用平板辦法測定分離溶血特性，將大腸桿菌菌種接種到5%兔鮮血LB平板，37℃培養48h后觀察溶血情況，菌落周圍出現溶血圈者判為溶血陽性。

2 小結與討論

（1）通過流行病學調查、臨床癥狀、病理變化、病原分離鑒定和動物試驗，確定該牛場犢牛死亡原因為大腸桿菌感染所致。

（2）藥敏試驗結果表明，菌株對各種藥物的敏感性存在明顯的差異，所有菌株均對硫酸鏈霉素和慶大霉素敏感，對新霉素和四環素耐藥。由于臨床上長期盲目用藥所造成，建議各地區治療牛大腸桿菌病時要定期輪換用藥，最好先進行藥敏試驗，選出敏感藥物進行有效治療，避免因盲目用藥造成經濟損失。

（3）防治本病要采用綜合性的防治措施，避免各種應激因素；平時應加強對犢牛的飼養管理，逐步改善牛舍的通風條件；認真落實牛場獸醫衛生保健措施；另外在要勤洗犢牛喂奶用具，因為本病的傳染與環境密切相關。

（4）通過本試驗，為微生物實驗室提供了兩只犢牛腹瀉大腸桿菌株兩株，以便進一步研制預防該病的疫苗。