HPLC法測定注射用葡醛酸鈉的含量

韓 蕓，蔡姍英，王雪芹

（海南省食品藥品檢驗所，海南?？?70216）

HPLC法測定注射用葡醛酸鈉的含量

韓 蕓，蔡姍英，王雪芹

（海南省食品藥品檢驗所，海南?？?70216）

目的：建立測定注射用葡醛酸鈉中葡醛酸鈉含量的高效液相色譜方法．方法：依利特Hypersil BDS C18柱（4．6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：0．25%四丁基氫氧化銨溶液（用磷酸調節pH至5．0）-乙腈（95∶5）；流速：1．0 mL／min；檢測波長：210 nm．結果：葡醛酸鈉在0．25～2．01 g／L范圍內線性關系良好，r＝1．000，平均回收率為99．4%（n＝9），定量限為0．80 μg．結論：該方法靈敏、準確、專屬性高，可用于注射用葡醛酸鈉的質量控制．

葡醛酸鈉；高效液相色譜法；含量測定

0 引言

注射用葡醛酸鈉為葡醛內酯在堿性條件下水解所得葡醛酸鈉的無菌凍干品，其進入機體后，在酶的作用下變為葡糖醛酸而起作用，可降低肝淀粉酶的活性，阻止糖原分解，使肝糖原含量增加，脂肪貯藏減少，對食物或藥物中毒時的保肝及解毒有輔助作用［1］．葡醛酸鈉為肝臟病輔助用藥，可用于急慢性肝炎和肝硬化的輔助治療．由于葡醛酸鈉結構中含多個羥基，親水性強，在現行質量標準含量測定方法中，該成分出峰早，基本不保留［2］．本實驗室建立的HPLC法可同時測定葡醛酸鈉的有關物質和含量，相對于原標準，本方法具有專屬性高、靈敏度高、準確性好的特點，可有效地運用于葡醛酸鈉的質量控制．

1 儀器和試藥

1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；工作站為Chemstation；XS105電子天平（METTLER TO-LEDO公司）；葡醛酸鈉對照品（批號100495-200601，含量92．0%，中國食品藥品檢定研究院）；注射用葡醛酸鈉（海南皇隆制藥股份有限公司，批號：20100801、20110101-2、201301013）；乙腈為色譜純（美國Tedia公司）；超純水，自制（美國Millipore公司）；其余試劑為分析純．

2 方法和結果

2．1 色譜條件 色譜柱：依利特Hypersil BDS C18（4．6×250 mm，5 μm）；流動相：0．25%四丁基氫氧化銨溶液（取10%四丁基氫氧化銨25 mL，用水稀釋至1000 mL，用磷酸調節pH值至5．0）-乙腈（95∶5）；流速：1．0 mL／min；進樣量：20 μL；柱溫：25℃；檢測波長：210 nm．

2．2 系統適用性實驗 稱取葡醛酸鈉對照品10 mg，置10 mL量瓶中，用流動相 5 mL溶解后，加入1 mol／L氫氧化鈉溶液1 mL，放置30 min，再加入1 mol／L鹽酸溶液1 mL中和，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為系統適用性試驗溶液，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖．葡醛酸鈉峰的保留時間約為10 min，葡醛酸鈉峰與堿降解物峰（相對保留時間約為1．1 min）分離度應大于1．5．

2．3 對照品溶液的配制 精密稱取對照品適量，用流動相溶解并定量稀釋制成1 mg／mL的溶液，即為對照品溶液．

2．4 供試品溶液的配制 精密稱取裝量差異項下供試品適量，用流動相溶解并定量稀釋制成1 mg／mL的溶液，即為供試品溶液．

2．5 線性關系考察 精密稱取葡醛酸鈉對照品適量，加流動相制成1 mg／mL的溶液，分別進樣5、10、20、30、40 μL，記錄色譜圖．以峰面積A對葡醛酸鈉質量濃度C進行線性回歸，得葡醛酸鈉的回歸方程：A＝667．02C+2．0061（r＝1．000，n＝5），結果表明葡醛酸鈉質量濃度在0．25～2．01 g／L范圍內線性關系良好．

2．6 精密度試驗 精密稱取葡醛酸鈉對照品適量，加流動相制成1 g／L的溶液，進樣20 μL，重復進樣5次．得濃度峰面積的RSD為0．19%，表明儀器精密度良好．

2．7 重復性試驗 取批號為20100801的樣品，按2．4方法操作，平行制備6份供試品溶液，分別測定，結果葡醛酸鈉含量的RSD為0．33%，表明重復性良好．2．8 定量限 精密量取葡醛酸鈉對照品溶液，逐級稀釋，按信噪比（S／N）為10，測得葡醛酸鈉定量限為0．80 μg．

2．9 穩定性試驗 按2．4方法制備供試品溶液，在4℃、室溫下分別于0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 h進樣20 μL，結果峰面積的RSD分別為0．47%和0．45%，表明供試品溶液在4℃、室溫時10 h內穩定性均良好．2．10 回收率試驗 在空白輔料中，分別加入一定量的葡醛酸鈉對照品，配成高、中、低三種濃度溶液（0．8、1．0、1．2 g／L），按上述的色譜條件進行分析，測得回收率分別為99．4%，99．4%和99．5%，RSD分別為0．37%，0．37%和0．37%（n＝3），平均回收率為99．4%（n＝9）．

2．11 樣品的含量測定 三批樣品按前述方法測定，結果葡醛酸鈉的標示量百分率分別為 93．4%、90．9%、93．5%．

3 討論

注射用葡醛酸鈉現有標準及文獻中大多數采用C18色譜柱，磷酸鹽溶液-乙腈系統、磷酸鹽溶液系統或庚烷磺酸鈉溶液0．1 mol／L磷酸二氫鉀溶液的流動相體系，經試驗復核，在以上色譜系統中，葡醛酸鈉不保留［3］．經試驗摸索，流動相采用四丁基氫氧化銨溶液（pH 5．0）-乙腈（95∶5）時，葡醛酸鈉在色譜柱上保留，主峰保留時間約為10 min，峰型較好［4］．該方法結果準確，操作簡單，可作為該品種的質量控制方法．

［1］杜立峰．病毒性肝炎的治療藥物研究進展［J］．西北藥學雜志，2004，19（2）：92-94．

［2］國家藥典委員會．化學藥品地方標準上升國家標準：第8冊［S］．北京：化學業出版社，2002：235．

［3］仇麗穎，張 丹，趙 曦，等．HPLC測定注射用葡醛酸鈉的含量及有關物質［J］．華西藥學雜志，2005，20（2）：149-151．

［4］陳 輝．RP-HPLC法測定葡醛酸鈉注射液的含量［J］．西北藥學雜志，2011，26（2）：104-106．

Content determination of sodium glucuronic acid for injection by HPLC

HAN Yun，CAI Shan-Ying，WANG Xue-Qin
Institutefor Drug and Food Control of Hainan Province，Haikou 570216，China

AIM：To establish the high performance liquid chro-matography（HPLC）method for quantifying the contents of sodi-um glucuronic acid for injection．METHODS：A Elite Hypersil BDS C18 column（4．6 mm×250 mm，5 μm）was used with 0．25%tetrabutyl-ammoium hydroxide solution（pH adjusted to 5．0 with phosphoric acid）-acetonitrile（95∶5）as mobile phase．The flow rate was 1．0 mL／min，and detection wavelength was 210 nm．RESULTS：The calibration curve was linear（r＝1．000）in the range of 0．25～2．01 g／L for sodium glucuronic acid，with the average recovery rate being 99．4% （n＝9）．The LOD was 0．80 μg．CONCLUSION：HPLC method is sensitive，reliable and specific，and can be used for the quality control of sodium glucu-ronic acid．

sodium glucuronic acid；HPLC；content determina-tion

R927．2

A

2095-6894（2015）06-122-02

2015-04-25；接受日期：2015-05-10

韓 云．本科，主管藥師．E-mail：25026427＠qq．com