SD大鼠血液生化指標正常區間初步建立

賀學英，王 輝，湯菊莉，管 博，曾亞力，史建峰

(北京市醫療器械檢驗所，醫療器械檢驗與安全性評價北京市重點實驗室，北京101111)

SD大鼠血液生化指標正常區間初步建立

賀學英，王 輝，湯菊莉，管 博，曾亞力，史建峰

(北京市醫療器械檢驗所，醫療器械檢驗與安全性評價北京市重點實驗室，北京101111)

實驗動物血液生化檢測是評價長期應用于人體的醫療器械毒性的必不可少的指標。本實驗擬建立亞慢毒性試驗中最常用的SD大鼠多項生化指標的正常參考區間，用以指導對試驗結果的正確分析。通過近3年數據的積累，目前已初步建立15項生化指標的本實驗室正常參考區間。在研究過程中也發現采用人血檢測的試劑時，要慎重確立檢測條件，種系差異會造成生化反應條件的變化，建立穩定的研究系統的參考區間可能是解決這一問題的可行方式。

SD大鼠;生化檢測;參考區間

0 前言

亞慢毒性試驗是評價植入人體或反復長期應用于人體的醫療器械的安全性的重要手段，根據GB/ T16886.11－2011《醫療器械生物學評價—全身毒性試驗(ISO 10993.11:2006，IDT)》中的要求進行醫療器械亞慢毒性試驗時，血液生化檢測是反應毒性變化的必不可少的指標。但目前尚無實驗動物血液學、血液生化等的權威參考值，也鮮有專用的檢測試劑(基本使用人血檢測試劑)，再加之動物品系的差異，因此各實驗室之間的數據可比性差，建立實驗室自己系統的正常參考區間對于動物生化檢驗結果的分析具有重大意義，這關系到能否對待檢物做出客觀科學的評價。本研究擬建立我室常用的亞慢實驗動物—SD大鼠血液生化指標的正常參考區間以指導相關試驗的結果分析。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SD大鼠，雌雄各半。

1.2 檢測生化項目

總蛋白(Total protein)、白蛋白(Albumin)、總膽紅素(Total bilirubin)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶/谷氨酸－草酰乙酸轉氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酐(Creatinine)、尿素(U-rea)、肌酸激酶(CK)、葡萄糖(Glucose)、總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、鉀離子(K)，鈉離子(Na)和氯離子(CL)。

2 檢測系統

(1)儀器:日立7180生化分析儀。

(2)試劑:除氯離子檢測試劑為九強生物，其它項目均采用中生北控生化試劑。

3 試驗方法

(1)為了更好地應用于亞慢試驗中生化檢測項目的分析，參考區間測定在亞慢試驗過程中進行。由于所檢醫療器械產品多數為預期低毒樣品(很多已在臨床應用多年)，因此本著“3R”的動物福利原則，為減少實驗動物使用量，我們同時檢測對照組及試驗組試驗動物的相關指標，對各檢測項目所得結果進行統計分析，如各組間結果無統計學差異，則將相關實驗數據均納入參考區間的測定中，在數據處理中均刪去離群值(超出均值 ± 3SD)。

(2)由于在亞慢試驗中采用不同給藥途徑，各途徑給藥時間有較大差異，如連續14d經靜脈給藥，連續28d靜脈給藥，90d經口給藥，分別對應8～10周齡，10～12周齡，19～21周齡大鼠;為了排除生化指標隨年齡變化，本研究分別統計3個年齡組別大鼠各項指標的參考區間，以更好指導實際工作，做出客觀科學的分析。

4 結果與討論

4.1 8～10周齡SD大鼠15項生化指標檢測的參考區間

歷時3年，共獲得雌雄各140個有效數據，經統計分析，剔除離群值，15項生化指標參考區間見表1(雄)，表2(雌)。

4.2 10～12周齡SD大鼠15項生化指標檢測的參考區間

表1 8～10周齡SD大鼠15項生化指標檢測的參考區間(雄，n=140)

表2 8～10周齡SD大鼠15項生化指標檢測的參考區間(雌，n=140)

表3 10～12周齡SD大鼠15項生化指標檢測的參考區間(雄，n=50)

表4 10～12周齡SD大鼠15項生化指標檢測的參考區間(雌，n=50)

表5 19～21周齡SD大鼠15項生化指標檢測的參考區間(雄，n=120)

表6 19～21周齡SD大鼠15項生化指標檢測的參考區間(雌，n=120)

歷時3年，共獲得雌雄各50個有效數據，經統計分析，剔除離群值，15項生化指標參考區間見表3(雄)，表4(雌)。

4.3 19～21周齡SD大鼠15項生化指標檢測的參考區間

歷時3年，共獲得雌雄各120個有效數據，經統計分析，剔除離群值，15項生化指標參考區間見表5(雄)，表6(雌)。

檢測數據顯示不同周齡，不同性別大鼠在有些生化指標上有較大的差異，如ALP隨著動物周齡的增加，該值不斷下降，而且雌雄鼠之間也有較大差異，如圖1所示。另外總蛋白、白蛋白、尿素氮等指標性別間差異也較大，而且隨大鼠周齡增加呈逐漸升高趨勢，如不進行分層統計，則有可能誤用參考區間。

在參考區間建立期間，還發現大鼠白蛋白與總蛋白比值基本都小于1，這與人類的參考區間有較大不同，經與蛋白電泳進行比對后，發現應用臨床生化試劑檢測大鼠血清白蛋白數值較低，校正系數為1.1(本研究中白蛋白數值均未進行校正)。這點也提示我們直接應用人類臨床試劑進行動物指標檢測可能會存在種屬之間的差異從而造成測定結果偏差，但如果每個檢測機構的系統穩定，建立特定的參考區間用以該系統數據的分析時則不會造成結論上的錯誤，但同時也說明需慎重采用不同系統所得的參考區間。

5 結論

亞慢試驗中觀測的生化指標，有些項目的檢測值與大鼠周齡、性別有很大的關聯性，因此建立與標準中要求相應的不同周齡、性別大鼠的生化指標參考區間對正確分析試驗結果有重要意義。

圖1 不同性別不同周齡大鼠ALP變化

［1］苗明.實驗動物和動物實驗技術［M］.北京:中國醫藥出版社，1997，336，337，353－354.

［2］劉成玉.臨床檢驗基礎［M］.北京:科學技術文獻出版社，2005.

［3］林健，鄭麗宏.大鼠血常規正常參考值范圍及評價方法的探討［J］.海峽預防醫學雜志，2007，13(4): 57－58.

［4］陳華李春海賀蘇蘭性別因素對大鼠部分血液學，血液生化指標和臟器系數的影響［J］實驗動物科學與管理，1996:13(1);21.

［5］GB/T 16886.11－2011醫療器械生物學評價.第11部分:全身毒性試驗(ISO 10993.11:2006，IDT)［S］.

［6］YY/T 0127.15－2009口腔醫療器械生物學評價.第2單元:試驗方法亞急性和亞慢性全身毒性試驗:經口途徑［S］.

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