風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準研究

李立紀　張風(fēng)雷　鄒雁寧

【摘 要】 目的：建立風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準。方法：采用HPLC測定葛根素的含量，薄層色譜法TLC鑒別方中的葛根、麻黃及陳皮。結(jié)果：定量方法簡單、準確。葛根素在00230～05750μg濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性方程：Y=44282X-69577，R2=1；葛根素平均回收率9876% ，RSD為15% （n=6）。TLC鑒別專屬性強，無干擾。結(jié)論：本質(zhì)量標(biāo)準可有效的控制風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 風(fēng)寒感冒顆粒；HPLC；TLC；質(zhì)量標(biāo)準

【中圖分類號】R286 【文獻標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）24-0019-03

Quality standard for Fenghan Ganmao Granules

LI Liji，ZHANG Fenglei，ZOU Yanning

Kunming Institute of Medical Science ，Kunming 650051，China

Abstract：Objective To establish the quality standard for Fenghan Ganmao Granules.Method The contents of puerarin were determined by HPLC.TLC was used to identify Radix Puerariae，Pericarpium Citri reticulatae Blanco and Ephedra sinica Stapf.Results The linear range of puerarin was 00230～05750μg，y = 44282x69577，R2=1.The average recovery was 98.76% ，RSD 1.5% （n=6） .The compounds were identified by TLC .Conclusion The methods are simple.The result is accurate ， the reproducibility is good.There mothods can be used as the quality control of Fenghanganmao Granules.

Keywords：Fenghan Ganmao Granules；HPLC puerarin； TLC；quality standard

風(fēng)寒感冒顆粒由麻黃、葛根、紫蘇葉、防風(fēng)等1l味中藥組成，具有解表發(fā)汗、疏風(fēng)散寒之功效，臨床用于治療感冒身熱，頭痛，咳嗽，鼻塞，流涕之癥。是一種治療感冒常用的中成藥，風(fēng)寒感冒顆粒收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準[1]，原標(biāo)準項下只有顆粒劑通則檢查項，缺乏鑒別和含量測定項目。方劑中麻黃具有發(fā)汗散寒、宣肺平喘、利水消腫。陳皮具有理氣健脾、燥濕化痰的功效，葛根在2005版《中國藥典》中有粉葛、野葛，其葛根素含量相差很大，為了研究風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量控制，我們選用野葛，按部版要求制作了三個批次的風(fēng)寒感冒顆粒，制定了葛根、陳皮、麻黃的薄層鑒別方法及葛根素高效液相色譜定量的方法。

1 材料

11 儀器 高效液相色譜儀：Agilent1100系列，包括G1314A紫外檢測器、G1316A柱溫箱、G1313A自動進樣器、G1311A四元梯度泵、G1322A真空脫氣機、Agilent ChemStation工作站，色譜柱：Zorbax LiChrospher 100 RP-18（46×250mm，5-Micron），島津2400紫外分光光度儀。

12 供試藥 風(fēng)寒感冒顆粒、風(fēng)寒感冒顆粒空白陰性試樣：自制（按國藥準字Z43020521），批號：20050823，20050824，20050825；高純水采用蒸餾水過MILLIPORE Simplicity 185純水機制備；甲醇（HPLC），乙醇（AR）；陳皮苷、葛根素對照品由中國藥品生物制品檢定所購得，批號：11072-200512，110752-200511。

2 方法

21 化學(xué)成分的TLC鑒定

211 葛根的薄層鑒別 取三批樣品各10g，加50ml甲醇，超聲處理30min，過濾，濾液蒸干，殘渣加30ml水溶解，分別用乙酸乙酯、正丁醇提取3次，每次20ml。分別合并乙酸乙酯、正丁醇，用水洗滌3次，每次20ml，分別蒸干乙酸乙酯、正丁醇。殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取葛根素對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品。展開劑用甲醇∶水（100∶10∶13）展二次；展開，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視，供試品乙酸乙酯部分與對照品相同位置上，顯相同顏色的熒光斑點（見圖1A）。經(jīng)陰性對照試驗及三批樣品試驗觀察，斑點分離清晰，層析效果好，陰性對照無干擾，達到了薄層鑒別目的，確定本法可行。

212 陳皮的薄層鑒別 取葛根素薄層鑒別項下的供試品溶液的乙酸乙酯部分，另取陳皮苷對照品1mg，加吡啶制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品。展開劑用乙酸乙酯∶甲醇∶水（100∶17∶13）展開至約4cm或8cm，取出，晾干。噴以三氯化鋁試液；置紫外燈（365nm）下檢視，供試品與對照品相同位置上，顯相同亮黃色的熒光斑點（見圖1B）。經(jīng)陰性對照試驗及三批樣品試驗觀察，斑點分離清晰，層析效果好，陰性對照無干擾，達到了薄層鑒別目的.

213 麻黃的薄層鑒別 取葛根素薄層鑒別項下的正丁醇部分供試品溶液，另取麻黃對照品藥材1g，加濃氨水8滴，再加氯仿20ml，加熱回流1h，過濾，濾液蒸干，殘渣加2ml甲醇充分溶解，過濾，濾液作為對照品溶液。以氯仿∶甲醇∶濃氨水試液（20∶5∶05）為展開劑；展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，再加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紅色斑點。達到了薄層鑒別目的（見圖1C），確定本法可行。

A： 顆粒中葛根素的TCL鑒定，依次為1、2、3三個批次，4為葛根藥材，5為對照品，6陰性對照

B：顆粒中陳皮苷的TCL鑒定，依次為1、2、3三個批次，4為陳皮藥材，5為對照品，6陰性對照

C：顆粒中麻黃的TCL鑒定，依次為1、2、3三個批次，4為麻黃對照藥材，5陰性對照

22 HPLC定量測定傷風(fēng)顆粒中的苦杏仁苷

221 含量測定方法學(xué)考察 色譜條件：色譜柱：Zorbax LiChrospher 100 RP-18（46×250mm，5μm），流動相：甲醇-水（25∶75） [2]；檢測波長250nm；流速10ml/ min，柱溫∶25℃；進樣量：10μl。在此色譜條件下，風(fēng)寒感冒顆粒中葛根素其他組分均能達到基線分離（見圖2-B），葛根素峰的理論板數(shù)大于3000，對照品、樣品、及陰性對照品HPLC圖見圖2（A、B、C）

222 對照品溶液的制備 精密稱取苦杏仁對照品230mg，用1ml甲醇溶解，置100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供HPLC用的對照品溶液。

223 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液1、2、5、10、15、20、25μl按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值（Atm*s）為縱坐標(biāo)，進樣量（μg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線，計算回歸方程，葛根素：y=4428269577，R2=1；結(jié)果表明葛根素進樣量在00230～05750μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

224 精密度考察 吸取葛根素對照品溶液，每次進樣20μl，重復(fù)進樣5次，計算RSD為096%。

225 樣品的測定

2251 樣品的提取方法的考察 根據(jù)文獻資料，準確取1g顆粒采用90%、70%、50%、30%超聲提取20min，過濾，定容，待測。90%甲醇提取物雜質(zhì)多，未達到基線分離，且提取率低；30%甲醇提取HPLC分離尚可，文獻報道用此法多，但很難過濾，葛根素提取不完全；50%甲醇超聲提取，葛根素提取率高。

2252 供試品溶液的制備 準確稱取05g的顆粒，加入15ml的50%甲醇超聲20min，濾過除去大部分不溶的淀粉，定容至25ml；尚還有細小的淀粉顆粒，再次過濾至清亮，最后用微孔濾膜（05μm）濾過。用于高效液相分析，供試品中葛根素與雜質(zhì)峰達到基線分離（見圖2B）。

2253 重復(fù)性實驗 精密稱取顆粒05g，共5份，按上述方法制成供試品溶液并進行測定，結(jié)果表明，葛根素5次測定值的RSD為18%。

2254 穩(wěn)定性實驗 取對照品溶液及供試品溶液，分別于1、2、4、6、8小時考察葛根素對照品溶液及供試品溶液穩(wěn)定性，葛根素峰面積積分值的相對標(biāo)準偏差分別為12、23%，對照品溶液及供試品溶液均穩(wěn)定。

2255 加樣回收率 分別精密稱取6份已測知含量的樣品05g，研細，精密稱取，置具塞錐形瓶中，分別精密加入葛根素對照品溶液（用50%甲醇水配制成0023mg/mL）05、15、2ml，再加入15ml 50%甲醇，以下按供試品溶液制備方法從，“超聲處理……”起，同方法操作。計算回收率。結(jié)果見表1。

2256 樣品測定 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl ，分別注入液相色譜儀進行測定，取2次測定的平均值作為結(jié)果，詳見表2。

3 討論

筆者曾選擇測定防風(fēng)中的升麻素苷C22H27O11和5-O-甲基維斯阿米醇苷C22H28O10，因含量低，尚未達到基線分離，因此最終沒有作為指標(biāo)成分。在本實驗中，樣品提取方法薄層定性檢測和HPLC略有不同，HPLC用30%的乙醇提取所得的葛根素最大。干擾很小。三個薄層均選用甲醇提取，分別用乙酸乙酯、正丁醇溶劑分配，麻黃檢測用正丁醇部分，葛根、陳皮用乙酸乙酯部分。采用本研究所制定的質(zhì)量標(biāo)準可有效的控制風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量。

參考文獻

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準（中藥成方制劑第1冊）[S].1998：45.

[2]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005：223.

（收稿日期：20141028）

A： 顆粒中葛根素的TCL鑒定，依次為1、2、3三個批次，4為葛根藥材，5為對照品，6陰性對照

B：顆粒中陳皮苷的TCL鑒定，依次為1、2、3三個批次，4為陳皮藥材，5為對照品，6陰性對照

C：顆粒中麻黃的TCL鑒定，依次為1、2、3三個批次，4為麻黃對照藥材，5陰性對照

22 HPLC定量測定傷風(fēng)顆粒中的苦杏仁苷

221 含量測定方法學(xué)考察 色譜條件：色譜柱：Zorbax LiChrospher 100 RP-18（46×250mm，5μm），流動相：甲醇-水（25∶75） [2]；檢測波長250nm；流速10ml/ min，柱溫∶25℃；進樣量：10μl。在此色譜條件下，風(fēng)寒感冒顆粒中葛根素其他組分均能達到基線分離（見圖2-B），葛根素峰的理論板數(shù)大于3000，對照品、樣品、及陰性對照品HPLC圖見圖2（A、B、C）

222 對照品溶液的制備 精密稱取苦杏仁對照品230mg，用1ml甲醇溶解，置100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供HPLC用的對照品溶液。

223 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液1、2、5、10、15、20、25μl按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值（Atm*s）為縱坐標(biāo)，進樣量（μg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線，計算回歸方程，葛根素：y=4428269577，R2=1；結(jié)果表明葛根素進樣量在00230～05750μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

224 精密度考察 吸取葛根素對照品溶液，每次進樣20μl，重復(fù)進樣5次，計算RSD為096%。

225 樣品的測定

2251 樣品的提取方法的考察 根據(jù)文獻資料，準確取1g顆粒采用90%、70%、50%、30%超聲提取20min，過濾，定容，待測。90%甲醇提取物雜質(zhì)多，未達到基線分離，且提取率低；30%甲醇提取HPLC分離尚可，文獻報道用此法多，但很難過濾，葛根素提取不完全；50%甲醇超聲提取，葛根素提取率高。

2252 供試品溶液的制備 準確稱取05g的顆粒，加入15ml的50%甲醇超聲20min，濾過除去大部分不溶的淀粉，定容至25ml；尚還有細小的淀粉顆粒，再次過濾至清亮，最后用微孔濾膜（05μm）濾過。用于高效液相分析，供試品中葛根素與雜質(zhì)峰達到基線分離（見圖2B）。

2253 重復(fù)性實驗 精密稱取顆粒05g，共5份，按上述方法制成供試品溶液并進行測定，結(jié)果表明，葛根素5次測定值的RSD為18%。

2254 穩(wěn)定性實驗 取對照品溶液及供試品溶液，分別于1、2、4、6、8小時考察葛根素對照品溶液及供試品溶液穩(wěn)定性，葛根素峰面積積分值的相對標(biāo)準偏差分別為12、23%，對照品溶液及供試品溶液均穩(wěn)定。

2255 加樣回收率 分別精密稱取6份已測知含量的樣品05g，研細，精密稱取，置具塞錐形瓶中，分別精密加入葛根素對照品溶液（用50%甲醇水配制成0023mg/mL）05、15、2ml，再加入15ml 50%甲醇，以下按供試品溶液制備方法從，“超聲處理……”起，同方法操作。計算回收率。結(jié)果見表1。

2256 樣品測定 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl ，分別注入液相色譜儀進行測定，取2次測定的平均值作為結(jié)果，詳見表2。

3 討論

筆者曾選擇測定防風(fēng)中的升麻素苷C22H27O11和5-O-甲基維斯阿米醇苷C22H28O10，因含量低，尚未達到基線分離，因此最終沒有作為指標(biāo)成分。在本實驗中，樣品提取方法薄層定性檢測和HPLC略有不同，HPLC用30%的乙醇提取所得的葛根素最大。干擾很小。三個薄層均選用甲醇提取，分別用乙酸乙酯、正丁醇溶劑分配，麻黃檢測用正丁醇部分，葛根、陳皮用乙酸乙酯部分。采用本研究所制定的質(zhì)量標(biāo)準可有效的控制風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量。

參考文獻

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準（中藥成方制劑第1冊）[S].1998：45.

[2]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005：223.

（收稿日期：20141028）

A： 顆粒中葛根素的TCL鑒定，依次為1、2、3三個批次，4為葛根藥材，5為對照品，6陰性對照

B：顆粒中陳皮苷的TCL鑒定，依次為1、2、3三個批次，4為陳皮藥材，5為對照品，6陰性對照

C：顆粒中麻黃的TCL鑒定，依次為1、2、3三個批次，4為麻黃對照藥材，5陰性對照

22 HPLC定量測定傷風(fēng)顆粒中的苦杏仁苷

221 含量測定方法學(xué)考察 色譜條件：色譜柱：Zorbax LiChrospher 100 RP-18（46×250mm，5μm），流動相：甲醇-水（25∶75） [2]；檢測波長250nm；流速10ml/ min，柱溫∶25℃；進樣量：10μl。在此色譜條件下，風(fēng)寒感冒顆粒中葛根素其他組分均能達到基線分離（見圖2-B），葛根素峰的理論板數(shù)大于3000，對照品、樣品、及陰性對照品HPLC圖見圖2（A、B、C）

222 對照品溶液的制備 精密稱取苦杏仁對照品230mg，用1ml甲醇溶解，置100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供HPLC用的對照品溶液。

223 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對照品溶液1、2、5、10、15、20、25μl按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值（Atm*s）為縱坐標(biāo)，進樣量（μg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線，計算回歸方程，葛根素：y=4428269577，R2=1；結(jié)果表明葛根素進樣量在00230～05750μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

224 精密度考察 吸取葛根素對照品溶液，每次進樣20μl，重復(fù)進樣5次，計算RSD為096%。

225 樣品的測定

2251 樣品的提取方法的考察 根據(jù)文獻資料，準確取1g顆粒采用90%、70%、50%、30%超聲提取20min，過濾，定容，待測。90%甲醇提取物雜質(zhì)多，未達到基線分離，且提取率低；30%甲醇提取HPLC分離尚可，文獻報道用此法多，但很難過濾，葛根素提取不完全；50%甲醇超聲提取，葛根素提取率高。

2252 供試品溶液的制備 準確稱取05g的顆粒，加入15ml的50%甲醇超聲20min，濾過除去大部分不溶的淀粉，定容至25ml；尚還有細小的淀粉顆粒，再次過濾至清亮，最后用微孔濾膜（05μm）濾過。用于高效液相分析，供試品中葛根素與雜質(zhì)峰達到基線分離（見圖2B）。

2253 重復(fù)性實驗 精密稱取顆粒05g，共5份，按上述方法制成供試品溶液并進行測定，結(jié)果表明，葛根素5次測定值的RSD為18%。

2254 穩(wěn)定性實驗 取對照品溶液及供試品溶液，分別于1、2、4、6、8小時考察葛根素對照品溶液及供試品溶液穩(wěn)定性，葛根素峰面積積分值的相對標(biāo)準偏差分別為12、23%，對照品溶液及供試品溶液均穩(wěn)定。

2255 加樣回收率 分別精密稱取6份已測知含量的樣品05g，研細，精密稱取，置具塞錐形瓶中，分別精密加入葛根素對照品溶液（用50%甲醇水配制成0023mg/mL）05、15、2ml，再加入15ml 50%甲醇，以下按供試品溶液制備方法從，“超聲處理……”起，同方法操作。計算回收率。結(jié)果見表1。

2256 樣品測定 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl ，分別注入液相色譜儀進行測定，取2次測定的平均值作為結(jié)果，詳見表2。

3 討論

筆者曾選擇測定防風(fēng)中的升麻素苷C22H27O11和5-O-甲基維斯阿米醇苷C22H28O10，因含量低，尚未達到基線分離，因此最終沒有作為指標(biāo)成分。在本實驗中，樣品提取方法薄層定性檢測和HPLC略有不同，HPLC用30%的乙醇提取所得的葛根素最大。干擾很小。三個薄層均選用甲醇提取，分別用乙酸乙酯、正丁醇溶劑分配，麻黃檢測用正丁醇部分，葛根、陳皮用乙酸乙酯部分。采用本研究所制定的質(zhì)量標(biāo)準可有效的控制風(fēng)寒感冒顆粒的質(zhì)量。

參考文獻

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準（中藥成方制劑第1冊）[S].1998：45.

[2]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005：223.

（收稿日期：20141028）