一種生化校準(zhǔn)物溯源驗證方法

彭惠芳，韋忠毅，王延英

(1湖南省藥品審評認(rèn)證與不良反應(yīng)監(jiān)測中心，湖南長沙410013; 2湖南圣湘生物科技有限公司，湖南長沙410000)

一種生化校準(zhǔn)物溯源驗證方法

彭惠芳1，韋忠毅2，王延英2

(1湖南省藥品審評認(rèn)證與不良反應(yīng)監(jiān)測中心，湖南長沙410013; 2湖南圣湘生物科技有限公司，湖南長沙410000)

隨著國內(nèi)診斷試劑管理逐漸規(guī)范，近幾年國內(nèi)生產(chǎn)商開始向國際有證參考物質(zhì)進行溯源，但此過程需要有資質(zhì)的實驗室且費用昂貴，還有無國際參考標(biāo)準(zhǔn)物的情況。鑒于此，本文建立一種溯源驗證方法，以5’-核糖核苷酸水解酶為例，通過購買知名廠家的參考物質(zhì)純品，采用稱量法對其進行賦值，然后與同類產(chǎn)品進行臨床比對，偏差均＜5%，即表明該校準(zhǔn)物賦值準(zhǔn)確，將其溯源至參考物質(zhì)，此法簡單方便，并能滿足臨床生化檢驗。

生化校準(zhǔn)物;溯源;驗證

國際標(biāo)準(zhǔn)化組織 (ISO)早在1999年就頒布了與體外診斷試劑制造商關(guān)系密切的ISO 17511《體外診斷醫(yī)療器械生物源性樣品中量的測量校準(zhǔn)品和質(zhì)控物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》和ISO 18153《體外診斷醫(yī)療器械生物源性樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)中酶催化濃度賦值的計量學(xué)溯源性》［1］，我國國家食品藥品監(jiān)督管理局也于2007年10月發(fā)布《體外診斷試劑校準(zhǔn)品 (物)、質(zhì)控品 (物)研究技術(shù)指導(dǎo)原則 (征求意見稿)》，其中明確校準(zhǔn)品應(yīng)有計量學(xué)的溯源要求［2］。溯源性是校準(zhǔn)物的一大特性，溯源終點是SI單位，但實際上還存在一大批既無國際參考測量程序，也無國際參考物質(zhì)的項目，比如5’-核糖核苷酸水解酶(5’-NT)等，需要生產(chǎn)商對其建立“內(nèi)部”測量程序和校準(zhǔn)物為其產(chǎn)品校準(zhǔn)品定值。鑒于這些測定試劑盒在臨床生化檢測上應(yīng)用普遍，需求量也非常大，為了制備有溯源性的校準(zhǔn)品，我們將以5’-NT校準(zhǔn)品為例進行溯源驗證，報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

東芝TBA-120FR全自動生化分析儀，METTLER TOLEDO萬分之一分析天平 (型號 ME 204)，北京利德曼生化股份有限公司生產(chǎn)的5’-NT測定試劑盒，湖南圣湘生物科技有限公司生產(chǎn)的5’-NT測定試劑盒 (前者使用自身配套的校準(zhǔn)品，后者使用自制的校準(zhǔn)品)，5’-NT純品購自sigma公司 (CAS 9025-64-3規(guī)格200U/mg)，40份新鮮人血清樣本取自湖南省腫瘤醫(yī)院。

1.2 方法

1.2.1 5’-NT校準(zhǔn)品的制備

稱取0．0010g的5＇-NT純品放入1 L燒杯中，并用600～800 mL去離子水溶解，然后轉(zhuǎn)入1 L容量瓶中，反復(fù)沖洗燒杯3次，并將液體一并轉(zhuǎn)移入容量瓶中。用去離子水定容至1 L，上下反復(fù)顛倒5～10次，混勻后裝入聚乙烯瓶中，放置2～8℃存放，備用。取上述溶液按照1:7稀釋混勻，即得標(biāo)準(zhǔn)品，理論濃度為25 U/L。

1.2.2 測試參數(shù)設(shè)定

圣湘試劑為:

分析方法:2點線性 反應(yīng)條件:37℃ 10 min，1cm光徑

波長:546 nm(主)/--(副)分析點:21點～27點

樣品:6 μL R1:200 μL R2:100 μL

利德曼試劑為說明書提供的測試參數(shù)。

2 實驗步驟

2.1 利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)測試自制5’-NT校準(zhǔn)品

用利德曼5’-NT測定試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)液、東芝TBA-120FR全自動生化分析儀及測試參數(shù)，定標(biāo)后測定自制5’-NT標(biāo)準(zhǔn)液。每天測定二批，每批重復(fù)測四次，連續(xù)測定3 d。測量值與理論值的偏差≤5%時，即符合要求。

2.2 利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)與圣湘5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)比對實驗

選用利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)與圣湘5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)，前者使用自身配套的校準(zhǔn)品，后者使用自制的校準(zhǔn)品，定標(biāo)后測定40份新鮮人血清樣本中5’-NT的值。每天一批，每批重復(fù)測定二次，共測2 d。要求40份血清樣本測定結(jié)果的平均偏差≤5%。

3 實驗結(jié)果

3.1 利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)測試自制5’-NT校準(zhǔn)品

使用利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)測試自制5’-NT校準(zhǔn)品，理論濃度為25 U/L，實測濃度為 24．64，偏差為 -1．44%，變異系數(shù)為1．85%，均小于5%，符合要求。初步驗證該自制5’-NT校準(zhǔn)品能夠用于5’-NT測定試劑的校準(zhǔn)。結(jié)果如表1所示。

表1 自配5’-NT標(biāo)準(zhǔn)品測試結(jié)果 (U/L)

3.2 利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)與圣湘5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)比對實驗

選用利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)與圣湘5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)，前者使用自身配套的校準(zhǔn)品，后者使用自制的校準(zhǔn)品 (賦值25U/L)，同時測試40份新鮮人血清樣本，測定結(jié)果的相對偏差均＜5%，符合要求 (結(jié)果見表2、表3)。進一步驗證該自制5’-NT校準(zhǔn)品能夠用于5’-NT測定試劑的校準(zhǔn)，滿足臨床生化檢驗需要。

表2 40份人血清樣本測試結(jié)果 (U/L)

續(xù)表

續(xù)表

表3 兩系統(tǒng)樣本測值偏差

續(xù)表

4 分析與討論

目前臨床檢驗量值的溯源性要求主要體現(xiàn)在兩個環(huán)節(jié)［3］，一是產(chǎn)品的校準(zhǔn)物定值，二是臨床檢驗結(jié)果，對象分別是產(chǎn)品的生產(chǎn)企業(yè)和臨床實驗室。目前絕大多數(shù)臨床實驗室使用商品化的試劑盒，因此企業(yè)生產(chǎn)的校準(zhǔn)物的溯源性顯得更為重要。歐盟有關(guān)體外診斷用品導(dǎo)則提出的溯源性要求和ISO17511及ISO18153都是針對生產(chǎn)企業(yè)而言，導(dǎo)則要求“校準(zhǔn)物和/或質(zhì)控物的定值，必須通過現(xiàn)有的較高級別的參考測量程序和/或參考物質(zhì)以保證其溯源性。

ISO對溯源性的定義為測量結(jié)果或標(biāo)準(zhǔn)的值通過連續(xù)的比較鏈與一定的參考標(biāo)準(zhǔn)相聯(lián)系的屬性，參考標(biāo)準(zhǔn)通常是國家或國際標(biāo)準(zhǔn)，比較鏈中的每一步比較都有給定的不確定度”［4，5］。作為生產(chǎn)企業(yè)的我們也一直在尋找可溯源的國際標(biāo)準(zhǔn)，為接通聯(lián)系渠道，決定著手校準(zhǔn)品賦值工作。校準(zhǔn)品賦值工作必須有二個基本條件，首先要有合格的試劑和儀器分析系統(tǒng)，其次要與實際臨床值進行比較，無明顯差異，我們采用與上市同類產(chǎn)品隨機測試40例臨床樣本進行比較。經(jīng)過兩個步驟的實驗研究和對每一個步驟的評估，各項指標(biāo)均符合要求。5’-NT參考物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品是可溯源到sigma公司5’ -NT純品，與國內(nèi)同類產(chǎn)品無顯著差異，這是可溯源的一條理想途徑之一。

［1］薛玲，林華，于泳．體外診斷試劑產(chǎn)品的量值溯源探討——體外診斷試劑產(chǎn)品的系列研究 (二)［J］．首都醫(yī)藥，2008，(12):7．

［2］高尚先，黃杰．體外診斷試劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)國內(nèi)外現(xiàn)狀［A］．中國藥學(xué)會．2007年全國生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)年會論文集［C］．中國藥學(xué)會，2007:7．

［3］王振豐，李宗利，金國紅．實驗室認(rèn)可量值溯源的理解及應(yīng)用 ［J］．現(xiàn)代測量與實驗室管理，2006，(06):40-42．

［4］李潔，張穗忠，徐汾蘭．淺談標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值的溯源性［J］．鋼鐵研究，2004，(06):53-55．

［5］倪曉麗．標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量值溯源性初探［J］．計量技術(shù)，2002，(11):45-61．

R446．1

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2015-01-09