探析利用“自上而下”方法對8項特種蛋白指標定量檢測不確定度的評估

王雁勇，曹輝彩，蔡會欣，戴冬雪，馬雅文

(保定市第一中心醫院檢驗科，河北保定071000)

探析利用“自上而下”方法對8項特種蛋白指標定量檢測不確定度的評估

王雁勇，曹輝彩，蔡會欣，戴冬雪，馬雅文

(保定市第一中心醫院檢驗科，河北保定071000)

目的通過分析8項特種蛋白指標定量檢測不確定的評估，探析其價值與意義。方法收集本實驗室2013年4月至9月共6個月的室內質量控制(簡稱室內質控)數據及2011年至2013年6次參加衛生部臨床檢驗中心特種蛋白室間質量評價(簡稱室間質評)的結果，參照《醫學實驗室——測量不確定度的評定與表達》，采用“自上而下”方法評定免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM、補體C3、補體C4、抗鏈球菌溶血素O(ASO)、類風濕因子(RF)、C反應蛋白(CRP)的相對測量不確定度(ucrel)和相對擴展測量不確定度(urel)。結果經統計發現，8項檢測指標的urel存在明顯的差異，C4的urel最大為16.01%，與美國臨床實驗室改進修正法案(CLIA'88)的允許總誤差比較，除C4外，其它7項指標均處于允許范圍之內。結論利用室內和室間質控數據，采用“自上而下”方法對免疫速率散射比濁法測定特種蛋白的測量不確定度的評價，方法簡單、方便，能在進行測量不確定度評定的同時充分了解實驗室檢測系統分析性能，具有很好的臨床應用價。

不確定度;評估;室內質量控制;室間質量評價;特種蛋白

測量不確定度是于20世紀60年代提出[1]，直到90年代其評定和表示方式才逐步得到公認[2]。測量不確定度是表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量準確度為負相關[3]。它是測量結果質量的指標。不確定度愈小，所述結果與被測量的真值愈接近，質量越高，水平越高，其使用價值越高;不確定度越大，測量結果的質量越低，水平越低，其使用價值也越低。在ISO17025文件中也明確提出檢測實驗室需要對結果的不確定度進行評估。

在2005年，王治國等[4]首次介紹了“自上而下”評定不確定度的方法。中國合格評定國家認可委員會(China National Accreditation Service for Conformity Assessment，CNAS)于2012年發表了以“自上而下”方法評定醫學實驗室不確定度的技術報告[5]。“自上而下”方法是在控制不確定度來源或程序的前提下評定測量不確定度，即運用統計學原理直接評定特定測量系統的受控結果的測量不確定度。典型方法是依據特定方案(正確度評估和校準方案)的試驗數據、QC數據或方法驗證試驗數據進行評定，正確度/偏移(b)和精密度/實驗室內復現性[s(Rw)]是兩個主要的分量。“自上而下”方法評定測量不確定度是基于正確度和實驗室內測量復現性進行測量不確定度評定的方法。對于常規醫學實驗室，“自上而下”評定測量不確定度的方法是經濟、實用和可接受的方法。我們利用室內質量控制(簡稱室內質控)和室間質量評價(簡稱室間質評)數據，采用“自上而下”方法探析測量不確定度評估在8項特種蛋白指標定量檢測中的應用。

材料和方法

一、儀器和試劑

IMMAGE 800特種蛋白分析儀及原裝試劑、校準品、質控品由美國Beckman-Coulter公司提供。

二、數據來源

1.室內指控數據收集本實驗室2013年4月至9月共6個月的室內質控數據，計算其靶值、標準差(s)和變異系數。

2.室間質控數據收集2011年至2013年6次參加衛生部臨床檢驗中心特種蛋白室間質評的結果，取與室內質控中值水平接近的公認值(Ccons)、每個參加實驗室的測量值(xi)及由全部能力驗證(proficiency testing，PT)數據得出的測量復現性(SR)。

三、方法

1.批內重復性將特種蛋白的室內質控品重復測定20次，和臨床標本一起測定，用雙側迪克遜檢驗法(P=95%)剔除離群值，計算其均值()、標準差(s)及批內變異系數(CVw)。

2.批間重復性統計2013年4月1日至9月30日6個月內每天檢測的8項特種蛋白的室內質控數據，利用儀器繪制的質控圖分別計算其、s及批間變異系數(CVb)。

3.方法偏倚(CVbias)的計算根據王治國等[4]建議的方法，收集本實驗室2011年至2013年參加的衛生部臨床檢驗中心8項特種蛋白6次室間質評結果。根據衛生部臨床檢驗中心提供的靶值和本實驗室的測定值，計算6次結果的百分偏差(dn%)及其均值(dm%)和標準差(sdr=，根據如下公式計算出

4.相對測量不確定度(ucrel)的計算(1)ucrel的計算公式為;(2)參照文獻[6]建議的以6次PT結果數據作為評定測量不確定度的依據，即用PT數據作為由偏移引入的不確定度進行合成并進行計算，為此Nordtest提出一個新的術語“方法和實驗室偏移”，符號為RMSbias。RMSrel(bias)=，公式中bias為單次PT的偏移量值，n為PT次數。urel(Cref)，其中urel(cons，i)=，式中RSDR，i為單次PT的相對測量復現性;m為參加單次PT的實驗室數量。ucrel(bias)為偏移引入的相對測量不確定度分量，計算公式為。(3)實驗室內測量復現性引入的相對測量不確定度分量urel(Rw)，計算公式為urel(Rw)=[s(Rw)/||]×100%，其中urel(Rw)=RSD(Rw);s(Rw)= u(Rw)。s(Rw)和RSD(Rw)分別為室內質控的標準差和變異系數。

5.相對擴展測量不確定度(urel)的計算對于95%的置信水平，包含因子k=2，urel=2×ucrel。

結果

一、8項特種蛋白室內質控的CVw和CVb見表1。

表1 8項特種蛋白室內質控的CVw和CVb結果

二、偏倚計算

以IgA為例，選擇與室內質控最接近的值計算其偏倚，結果見表2。以同樣的方法計算其它項目的偏倚。

表2 IgA室間質評信息

三、8項指標測量不確定度結果

以美國臨床實驗室改進修正案(CLIA'88)允許總誤差(TEa)為質量目標，7項特種蛋白指標的不確定度均符合目標不確定度要求，外體C4不符合目標不確定度要求，見表3。

表3 8項特種蛋白指標測量不確定度結果

討論

誤差多數情況下是指測量誤差，它的傳統定義是測量結果與被測量真值之差。誤差是客觀存在的，它應該是一個確定的值。但由于在絕大多數情況下，真值是不知道的，所以真誤差也無法準確知道。我們只是在特定的條件下尋求最佳的真值近似值，并稱之為約定真值。因此可能確定的誤差只是其估計值。經典的誤差理論并不完全適用于醫學檢驗的實際工作，并具有一定的不確定度。測量不確定度是目前對于誤差分析最新的理解和闡述，是誤差理論發展到一定程度的產物。測量不確定度無須對隨機和系統誤差進行分類，提供了一種包括測量真值在內的一組測量結果范圍，表征被測量值的分散性，使檢驗結果質量的衡量成為可能，可行性更高，是與測量水平密切相關的參數。楊振華[7]認為可以考慮將經驗方法評定測量不確定度應用到臨床化學實驗室。張曉紅等[8-9]依據Nordtest準則，利用室內質控和室間質評數據評估臨床生化檢驗中的測量不確定度。CNAS的技術報告也對Nordtest準則建議方法進行了詳盡的說明。

本研究利用室內和室間數據對8項特種蛋白指標的不確定度進行了評估。結果顯示，7項特種蛋白指標的不確定度均符合目標不確定度要求，外體C4不符合目標不確定度要求。分析其原因，外體C4不精密度和偏倚對合成不確定度的構成比分別為59.4%和70.4%。提示引起測量不確定度高的主要原因在于正確度較差，可以通過提高檢測項目的準確性來降低RMSbias，減小其擴展不確定度。由此可見，不同的檢測項目若要改進其擴展不確定度，需對分量貢獻的大小進行質量改進。

本研究利用室內和室間質控數據對免疫速率散射比濁法檢測8項特種蛋白指標的測量不確定度。在評估過程中我們發現，因為使用了6個月的室內質控數據和3年6次室間質控數據對各項指標的不確定度進行評定，所以能更真實地反映實驗室每日檢測的不確定度情況，最大化地找出不確定度潛在來源的概率。

綜上所述，我們通過評估8項特種蛋白指標的不確定度，發現了影響擴展不確定度的主要因素，為改善臨床檢測質量提供科學的依據，確保檢測結果的準確性。

[1]International Organization for Standardization.Guide to the expression of uncertainty in measurement[S].ISO，1995.

[2]KRISTIANSEN J.The guide to expression of uncertainty in measurement approach for estimating uncertainty:an appraisal[J].Clin Chem，2003，49 (11):1822-1829.

[3]FUENTEN-ARDERIU X.Uncertainty of measurement in clinical laboratory sciences[J].Clin Chem，2000，46(9):1437-1438.

[4]王治國，王薇，李小鵬.測量不確定度及其在臨床檢驗中應用[J].中國衛生統計，2005，22(2):85-86.

[5]中國合格評定國家認可委員會.醫學實驗室-測量不確定度的評定與表達[S].2012.

[6]Nordtest.Handbook for calculation of measurement uncertainty in environmental laboratories[R].Espoo: Nordtest，2011.

[7]楊振華.用“經驗辦法”評定測量不確定度[J].中華檢驗醫學雜志，2011，34(3):278-230.

[8]張曉紅，魯辛辛.依據Nordtest準則評估測量不確定度更適合于臨床實驗室[J].中華檢驗醫學雜志，2012，35(5):404-406.

[9]張曉紅，劉向煒，文江平，等.利用“室內質控和室間質評”數據評估臨床生化檢驗中的測量不確定度[J].中華檢驗醫學雜志，2012，35(5):457-462.

1673-8640(2015)07-0747-03

R446.1

A

10.3969/j.issn.1673-8640.2015.07.018

2014-12-26)

(本文編輯:龔曉霖)

王雁勇，1970年生，男，學士，副主任技師，從事臨床生化、微生物檢驗工作。

蔡會欣，聯系電話:0312-5976674。