病毒性肝炎患者血清自身抗體的變化

黃金保，徐秀亮，胡義忠，吳芬，蘇靜

(池州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，安徽池州247000)

病毒性肝炎患者血清自身抗體的變化

黃金保，徐秀亮，胡義忠，吳芬，蘇靜

(池州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，安徽池州247000)

目的探討病毒性肝炎患者自身抗體的變化及其與病毒性肝炎的相關(guān)性。方法采用免疫印跡法檢測(cè)370例病毒性肝炎患者(包括甲型肝炎56例、乙型肝炎157例、丙型肝炎115例、丁型肝炎23例、戊型肝炎19例)抗線粒體抗體(AMA)、抗線粒體抗體2型(AMA-2)、抗平滑肌抗體(SMA)、抗肝細(xì)胞溶質(zhì)抗原1型抗體(LC-1)、抗肝腎微?？贵w(LKM)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗體(SLA/LP)，同時(shí)采用免疫熒光法檢測(cè)抗核抗體(ANA)。結(jié)果病毒性肝炎患者AMA總陽(yáng)性率為7.03%、AMA-M2總陽(yáng)性率為3.78%、SMA總陽(yáng)性率為0.81%、LC-1總陽(yáng)性率為0.54%、LKM總陽(yáng)性率為1.89%、SLA/LP總陽(yáng)性率為0%、ANA總陽(yáng)性率為18.38%。5種病毒性肝炎中以丙型肝炎患者自身抗體陽(yáng)性率最高，為62.61%，且以ANA陽(yáng)性為主(33.91%);乙型肝炎次之，為26.75%，也以ANA陽(yáng)性為主(15.29%);明顯高于其它3種病毒性肝炎(甲型肝炎8.93%、丁型肝炎4.35%)、戊型肝炎0%)。結(jié)論病毒性肝炎患者血清中存在多種自身抗體，其中又以乙型肝炎、丙型肝炎多見(jiàn)，自身抗體中則以ANA為主。對(duì)病毒性肝炎患者進(jìn)行自身抗體檢測(cè)有助于了解患者機(jī)體免疫狀況，以便指導(dǎo)臨床用藥。

自身抗體;血清;病毒性肝炎

我國(guó)為肝炎高發(fā)地區(qū)，其中以病毒性肝炎最為常見(jiàn)，急性病毒感染后可進(jìn)展為慢性。慢性病毒性肝炎中則以慢性乙型肝炎和丙型肝炎為主，其產(chǎn)生及發(fā)展可能涉及到患者自身抗原出現(xiàn)的免疫應(yīng)答及其產(chǎn)生的多種自身抗體。研究顯示嗜肝病毒感染機(jī)體與相關(guān)藥物治療均可能會(huì)誘發(fā)患者自身免疫[1]，造成肝細(xì)胞免疫損傷與炎癥性壞死，長(zhǎng)期的自身免疫現(xiàn)象則可能會(huì)誘發(fā)肝細(xì)胞惡變[2]。近年來(lái)，病毒性肝炎的自身免疫現(xiàn)象引發(fā)了諸多研究者的關(guān)注，肝炎病毒性感染者血清存在的自身抗體主要包括抗線粒體抗體(antimitochondrial antibody，AMA)、抗線粒體抗體2型IgG(AMA-M2)、抗平滑肌抗體(anti-smooth muscle antibody，SMA)、抗肝細(xì)胞胞質(zhì)抗原1型抗體(anti-liver cytosol type 1 antibody，LC-1)、抗肝腎微?？贵w(anti-liver/kidney microsomal，LKM)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗體(anti-soluble liver antigen/live pancreatic antigen，SLA/LP)、抗核抗體(anti-nuclear antibody，ANA)等。為了解本地區(qū)病毒性肝炎患者自身抗體的存在狀況，我們對(duì)370例病毒性肝炎患者的自身抗體進(jìn)行了分析。

材料和方法

一、對(duì)象

選取2011年1月至2014年12月在池州市人民醫(yī)院就診的病毒性肝炎患者370例，其中男214例、女156例，年齡5～80歲，包括甲型肝炎56例、乙型肝炎157例、丙型肝炎115例、丁型肝炎23例、戊型肝炎19例，全部病例均按《病毒性肝炎防治方案》[3]確診，排除其它自身免疫性疾病。

二、儀器和試劑

奧林帕斯熒光顯微鏡、歐蒙免疫印跡儀。AMA、AMA-M2、SMA、LC-1、LKM、SLA/LP、ANA檢測(cè)試劑盒均由北京和杰創(chuàng)新生物醫(yī)學(xué)科技有限公司提供。

三、方法

采用免疫熒光法檢測(cè)AMA、SMA、ANA。選擇HEp2與猴肝臟冰凍切片作為抗原生物薄片，待測(cè)血清均自1∶100開(kāi)始稀釋，與基質(zhì)溫育、洗滌后，再與異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)標(biāo)記的羊抗人IgG繼續(xù)溫育，洗滌，甘油封片，于熒光顯微鏡下觀察，根據(jù)特異性熒光圖形判斷所得結(jié)果，若組織或細(xì)胞中出現(xiàn)明顯特異性綠色熒光則判定為陽(yáng)性。采用蛋白印跡法檢測(cè)AMA-M2、LC-1、LKM、SLA/LP。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)(f)表示，無(wú)序分類資料比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

病毒性肝炎患者AMA總陽(yáng)性率為7.03%、AMA-M2總陽(yáng)性率為3.78%、SMA總陽(yáng)性率為0.81%、LC-1總陽(yáng)性率為0.54%、LKM總陽(yáng)性率為1.89%、sLA/LP總陽(yáng)性率為0%、ANA總陽(yáng)性率為18.38%。5種病毒性肝炎中以丙型肝炎患者自身抗體陽(yáng)性率最高，為62.61%，且以ANA陽(yáng)性為主(33.91%);乙型肝炎次之，為26.75%，也以ANA陽(yáng)性為主(15.29%);明顯高于其它3種病毒性肝炎。見(jiàn)表1。

表1 病毒性肝炎患者自身抗體檢測(cè)結(jié)果[例(%)]

討論

我國(guó)是病毒性肝炎的高發(fā)地區(qū)，其發(fā)病機(jī)制一直是醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)，而近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，除了自身免疫性肝病，病毒性肝炎患者也存在自身免疫現(xiàn)象，血清中可檢測(cè)出各種自身免疫抗體[4-6]。盡管自身免疫是人體正常的生理現(xiàn)象，但過(guò)度反應(yīng)就會(huì)引發(fā)自身免疫性疾病。KAMMER等[7]認(rèn)為病毒感染是自身免疫性疾病的啟動(dòng)因子，靶細(xì)胞內(nèi)抗原成分改變或因病毒蛋白正常組織間存在同源性故可誘發(fā)機(jī)體自身免疫。研究顯示慢性肝病患者中約有1/3的患者血清中能檢測(cè)出自身抗體，其中以AMA、SMA、ANA為主[8]。丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染后可引發(fā)自身免疫性肝炎[9]，而HBV感染患者中可能檢測(cè)到ANA[10]。肝炎病毒感染后發(fā)生的多種自身抗體是病毒性肝炎病程進(jìn)展中的特征性表現(xiàn)，可觸發(fā)自身免疫反應(yīng)，同時(shí)感染發(fā)生后可經(jīng)多種途徑對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)形成損傷，導(dǎo)致機(jī)體免疫耐受性受到破壞，加重肝臟損傷。病毒性肝炎患者自身抗體的檢測(cè)不僅對(duì)疾病的認(rèn)知有重要意義，對(duì)其治療也存在一定的指導(dǎo)意義。

本研究結(jié)果顯示370例病毒性肝炎患者中除SLA/LP外，AMA、AMA-M2、SMA、LC-1、LKM、ANA均有檢測(cè)到。其中，ANA陽(yáng)性率最高，占18.38%，其次為AMA和AMA-M2。在病毒性肝炎種類中則以丙型肝炎自身抗體檢出率最高，乙型肝炎次之。丙型肝炎之所以存在較明顯的自身免疫現(xiàn)象，是因?yàn)镠CV感染可經(jīng)分子模擬現(xiàn)象激活自身免疫反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞，進(jìn)而引發(fā)自身免疫。此外，HCV更易引發(fā)宿主自身免疫反應(yīng)，也可能與HCV和肝細(xì)胞膜靶抗原存在相同抗原決定簇有關(guān)[11]。但這一結(jié)果與自身免疫性肝病患者相比要低得多[12]?？梢?jiàn)，自身抗體主要發(fā)生于自身免疫性肝病中，而在少數(shù)病毒性肝炎患者，尤其是乙型肝炎和丙型肝炎患者中也可能會(huì)發(fā)生自身免疫反應(yīng)，或合并自身免疫性肝病，故臨床應(yīng)引起重視。此外，本研究中自身抗體陽(yáng)性檢出率與以往報(bào)道[2，5]相比存在差異，其原因可能與自身抗體檢測(cè)方法及試劑差異有關(guān)，也可能與檢測(cè)群體的差異有關(guān)。

目前，有關(guān)慢性病毒性肝炎誘發(fā)自身免疫尚需做進(jìn)一步研究，如病毒性肝炎伴自身免疫現(xiàn)象還是自身免疫性肝炎，對(duì)于這部分患者的診斷鑒別仍十分棘手。對(duì)于病毒性肝炎伴有自身免疫現(xiàn)象者，一般認(rèn)為其并不直接對(duì)免疫系統(tǒng)功能產(chǎn)生影響，但高滴度自身抗體則與自身免疫疾病關(guān)系密切。對(duì)存在自身免疫現(xiàn)象的病毒性肝炎患者來(lái)說(shuō)，在進(jìn)行干擾素抗病毒治療之前一定要先排除自身免疫性肝炎，因干擾素多會(huì)加重或誘發(fā)自身免疫現(xiàn)象。而激素類治療自身免疫性肝炎時(shí)，對(duì)合并病毒性肝炎患者則會(huì)導(dǎo)致病毒復(fù)制增強(qiáng)。故在病毒性肝炎合并自身免疫性肝炎患者的治療過(guò)程中，治療方案的選擇應(yīng)十分慎重[13]。

綜上所述，病毒性肝炎患者中確實(shí)存在自身免疫現(xiàn)象，又以ANA及AMA陽(yáng)性最為多見(jiàn)。故對(duì)病毒性肝炎患者進(jìn)行自身抗體檢測(cè)有助于了解患者機(jī)體免疫狀況，對(duì)于指導(dǎo)臨床合理用藥意義重大。

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(本文編輯:龔曉霖)

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2014-12-31)

黃金保，男，1975年生，碩士，主管技師，主要從事臨床生化檢驗(yàn)工作。