穿山龍提取物薯蕷皂苷對糖尿病模型大鼠血清HA和5-HT的影響

冷錦紅 邱 獅 董佳妮 張 蘭 李文金 于世家 侯 平

（遼寧中醫藥大學附屬醫院，遼寧沈陽110032）

穿山龍提取物薯蕷皂苷對糖尿病模型大鼠血清HA和5-HT的影響

冷錦紅 邱 獅 董佳妮 張 蘭 李文金 于世家 侯 平

（遼寧中醫藥大學附屬醫院，遼寧沈陽110032）

目的：探討中藥穿山龍提取物薯蕷皂苷對糖尿病大鼠血清組胺（HA）和5-羥色胺（5-HT）的影響，以期為后期痛性糖尿病周圍神經病變（DPN）的研究奠定理論基礎。方法：以2%鏈脲佐霉素溶液誘發糖尿病，將造模成功的大鼠，隨機分為干預2周、4周、8周的模型組、薯蕷皂苷組和強的松組，另取24只血糖正常的大鼠分為各時期正常組，分別灌胃相應藥物或生理鹽水后用Elisa法觀察不同時期各組大鼠血清HA和5-HT的蛋白表達。結果：模型組治療各時期血清HA和5-HT表達均明顯高于正常組（P＜0.01），薯蕷皂苷組和強的松組大鼠治療各時期上述指標明顯低于模型組（P＜0.01），其中薯蕷皂苷組干預效果明顯高于強的松組（P＜0.01）。結論：中藥穿山龍提取物薯蕷皂苷可改善糖尿病（DM）大鼠血清致痛物質的表達，療效強于強的松。

糖尿病 穿山龍 植物提取物 薯蕷皂苷 HA 5-HT 大鼠 實驗研究

目前約有四分之一糖尿病患者存在痛性糖尿病周圍神經病變（DPN），防治DPN的研究已成為糖尿病臨床研究所面臨的重要課題。近年來的研究發現，在神經痛的病理狀態下，末梢感受器、背根神經節及軸突損傷區有多種物質的變化，致痛物質等都有不同程度的上調或下調。中藥穿山龍的有效成分主要為甾體皂苷類，包括薯蕷皂苷、纖細皂苷和水溶性皂苷，其中薯蕷皂苷含量較多[1-3]。研究表明，薯蕷皂苷具有抗炎、鎮痛、調節免疫等作用，其對糖尿病周圍神經病變的防治作用也日益受到關注。本研究應用現代分子生物學技術探討薯蕷皂苷對糖尿病模型大鼠血清組胺（HA）和5-羥色胺（5-HT）蛋白表達的影響，以期為后期痛性糖尿病周圍神經病變的研究奠定理論基礎。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 健康雄性清潔級Wistar大鼠120只，體重范圍為200～250g，由遼寧省長生生物技術有限公司提供，許可證號:SCXK（遼2010-0001）。

1.2 試劑與儀器 鏈脲佐霉素 （美國sigma公司，批號:S-0130）；薯蕷皂苷（陜西慈緣生物技術有限公司，批號:CY140607）；強的松（天津力生制藥股份有限公司，批號:201402005）；酶標儀（TECAN中國有限公司）；穩步型血糖儀（美國強生公司）。

2 實驗方法

2.1 分組與造模 大鼠適應性喂養1周后，采用隨機數字表方法分為正常組24只和造模組96只。造模組大鼠在造模之前禁食12h，腹腔內單次注射2%鏈脲佐霉素溶液53mg/kg（由0.1mol/L的pH4.2枸櫞酸緩沖液配制）誘發糖尿病模型。72h后通過血糖儀測定大鼠尾靜脈血的血糖，血糖大于16.7mmol/L者可列入觀察的對象[4]。正常組24只大鼠禁食12h之后一次性腹腔內注射相等容積的0.1mol/L枸櫞酸緩沖液。實驗期間全部大鼠予普通飼料喂養，可自由進食和飲水[5]。將正常組24只大鼠隨機分為3組，分別為2周、4周、8周正常組，每組8只。96只造模組大鼠中，4只造模未成功，2只死亡。將造模成功的90只大鼠隨機分為2周、4周、8周模型組、薯蕷皂苷組和強的松組，每組10只。

2.2 給藥方法 正常組與模型組予生理鹽水10mL/（kg·d）灌胃；薯蕷皂苷組予36.18mg/（kg·d）薯蕷皂苷溶液灌胃，劑量參照“實驗動物與人按體表面積等效劑量換算比率表”確定[6]；強的松組予1.35mg/（kg·d）強的松灌胃。各組大鼠均于造模成功后開始給藥，每日給藥1次至各組實驗結束（2周、4周、8周）。

2.3 檢測指標

2.3.1 血糖情況 分別于治療后的2周、4周、8周和治療前（0周）尾靜脈取血，用血糖儀測定血糖。

2.3.2 Elisa方法檢測各組大鼠血清致痛物質 5-HT、HA表達 各組大鼠治療結束后腹腔內注射20%烏拉坦（0.4mL/100g）麻醉，腹主動脈取血約5mL，離心取上清待Elisa檢測用。Elisa檢測方法:①包被，②加樣，③配液，④洗滌，⑤加底物液顯色，⑥終止反應，⑦判定結果[在450nm波長處，檢測各孔的吸光度（OD值），測定需在加終止液后的10min以內進行]。

2.4 統計學方法 采用SPSS 17.0軟件進行統計分析。數據用（±s）表示，進行正態性檢驗，非正態的資料可進行數據的轉化。多組間比較用單因素方差分析，方差不齊時用Dunnett’C進行兩兩的組間比較，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 各組大鼠治療各時期血糖比較 造模之后模型組、各給藥組大鼠血糖水平均明顯高于同時期正常組（P＜0.01）；各給藥組各時期血糖水平與同期模型組比較無統計學差異（P＞0.05）。見表1。

3.2 各組大鼠血清致痛物質5-HT、HA蛋白表達比較 模型組與各給藥組各時期5-HT、HA蛋白表達均明顯高于正常組（P＜0.01），提示痛性DM模型造模成功；薯蕷皂苷組、強的松組給藥各時期5-HT、HA蛋白表達明顯低于模型組（P＜0.01），說明治療有效，而此2組中薯蕷皂苷組各時期對2指標的改善明顯優于強的松組（P＜0.01）。見表2。

4 討論

有評估顯示，中國有25年以上病史的糖尿病患者中，有50%會發展到神經性疼痛。因此，痛性糖尿病神經病變已成為臨床頑疾之一，防治本病已成為糖尿病工作者面臨的重要課題。強的松是短效糖皮質激素，在抑制免疫、抗炎鎮痛方面在臨床廣泛應用，但是其副作用使得患者依從困難。

疼痛與神經遞質、細胞因子的關系極為密切。當疼痛發生時，受損組織便向細胞外液中釋放內源性的化學物質，我們稱之為致痛物質，包括HA、5-HT、P物質等，其中HA和5-HT是單胺類化合物，是體內存在的一種很強的致痛物質，在局部血液循環障礙引起疼痛的情況下，致痛物質的表達明顯上升，同時會引起血管活性物質功能增強，血管通透性增強。

穿山龍為薯蕷科薯蕷屬植物穿龍薯蕷的根莖，以地下的根狀莖入藥，中醫學認為其具有祛風止痛、活血舒筋等功效，應用歷史悠久，用于治療風寒濕痹、跌打損傷、腰腿疼痛和筋骨麻木等。穿山龍的有效成分主要為甾體皂苷類，總皂苷酸水解產生薯蕷皂苷元[7-8]，甾體類藥物對免疫功能具有廣泛的作用，作為具有類似結構的薯蕷皂苷元，同樣具有廣泛的免疫調節和鎮痛抗炎的作用。

本研究結果表明，薯蕷皂苷和強的松均可明顯減少糖尿病模型大鼠血清中致痛物質的表達，薯蕷皂苷療效強于強的松，且隨著療程的延長療效更加明顯。目前單味中藥對痛性糖尿病神經病變的研究尚不多見，本研究揭示了單味中藥穿山龍提取物薯蕷皂苷可有效減少痛性物質表達，療效確切，副作用少，作用多靶點，可為臨床選擇最佳治療用藥提供深層次的理論基礎。同時，痛性DM大鼠模型的成功建立，將為痛性DPN模型的成功建立提供依據。在離子通道功能障礙理論的指導下，我們將進一步探討薯蕷皂苷對痛性DPN大鼠坐骨神經離子通道蛋白表達的影響，為薯蕷皂苷治療痛性DPN提供深層次的理論基礎，同時完善痛性DPN的發病機制研究。

表1 各組大鼠治療各時期血糖比較（±s） mmol/L

表1 各組大鼠治療各時期血糖比較（±s） mmol/L

注：與同期正常組比較，▲P＜0.01。

2周0周（治療前）動物數4周8周（只） 血糖 動物數（只）正常組組別動物數（只） 血糖24 5.88±0.58 248 5.99±0.35 30 23.26±5.32▲30 5.7±0.38血糖 動物數（只）16血糖5.86±0.17模型組 24.58±2.94▲20 20.45±2.83▲10 21.59±4.33▲薯蕷皂苷組 30 23.33±4.31▲30 21.72±2.21▲20 19.27±0.68▲10 20.29±2.61▲強的松組 30 22.71±5.09▲30 25.62±4.32▲20 21.7±2.46▲10 20.69±4.13▲

表2 各組大鼠血清5-HT、HA蛋白表達比較（±s）

表2 各組大鼠血清5-HT、HA蛋白表達比較（±s）

注：與同期正常組比較，▲P＜0.01；與同期模型組比較，★P＜0.01；與同期強的松組比較，△P＜0.01。

組別 時間 動物數（只）2周組 8 5-HT HA 150.87±3.83 289.18±11.97正常組4周組8周組8 8 154.09±2.29 153.32±4.10 10 10模型組2周組4周組277.07±4.25 276.33±3.74 760.29±20.27▲629.70±32.66▲1430.33±57.68▲1400.28±35.48▲8周組 10 2周組 10 363.19±10.31▲★△847.05±26.56▲★△4周組 10 292.91±14.03▲★△540.45±21.42▲★△薯蕷皂苷組8周組 10 270.53±2.87▲★△500.77±30.10▲★△590.36±42.90▲1432.79±50.19▲強的松組2周組 10 427.35±77.67▲★895.8±49.49▲★4周組 10 365.36±34.82▲★674.27±50.79▲★8周組 10 356.62±11.30▲★645.05±23.65▲★

[1] 都述虎，劉文英，付鐵軍，等.穿龍薯蕷總皂苷中甾體皂苷的分離與鑒定.藥學學報，2002，37（4）：267

[2] 姚麗，劉樹民.中藥穿山龍新的藥理作用及其有效部位的實驗研究.中華中醫藥學刊，2010，28（9）：1979

[3] 刁興彬，高文學，張芳，等.穿山龍提取物質量標準研究.中國藥事，2014，28（8）：871

[4] 冷錦紅.不同通絡中藥對糖尿病大鼠周圍神經病變的保護作用及其機制研究.沈陽：遼寧中醫藥大學：2008

[5] Sally.A Price，Sithiporn Agthong，etc.Mitogen-Activated Protein Kinase p38 Mediates Reduced Nerve Conduction Velocity in Experimental Diabetic Neuropathy.Diabetes，2004，7（53）：1851

[6] 陳奇.中藥藥理研究方法學.北京：人民衛生出版社，1993：50

[7] 丁小林，李卿.中藥穿山龍的研究進展.重慶中草藥研究，2003（2）：55

[8] 李長輝.益氣活血化瘀法治療痛性糖尿病周圍神經病療效機制的研究.沈陽：遼寧中醫藥大學，2013

R587.1

A

1672-397X（2015）08-0076-03

冷錦紅（1974—），女，醫學博士，副主任醫師，內分泌學專業。

侯平，醫學博士，主任醫師，碩士研究生導師。1577292550@qq.com

2015-04-30

編輯：吳 寧

遼寧省科技廳科學技術計劃項目（2013226012）；沈陽市科學技術項目計劃項目（F13-221-9-55）