石杉堿甲口服固體制劑質量分析

孫春艷，劉新宇，柳艷云，姜紅

(湖北省食品藥品監督檢驗研究院，武漢 430064)

石杉堿甲口服固體制劑質量分析

孫春艷，劉新宇，柳艷云，姜紅

(湖北省食品藥品監督檢驗研究院，武漢 430064)

目的 評價石杉堿甲口服固體制劑的質量現狀及存在問題。方法 按照國家評價性抽驗的總體要求，在按照法定檢驗方法檢驗的基礎上，開展探索性研究，統計分析石杉堿甲口服固體制劑的質量現狀并進行評價；對不同分析方法所得的結果進行分析。結果 按照法定標準檢驗，結果顯示86批樣品合格率為96.5%。其中有3批不合格，不合格的項目涉及有關物質、含量均勻度、含量。部分企業樣品溶出較低、批內和批間差異較大；有的樣品有關物質較高、含量處于低限。探索性研究結果顯示，不同企業樣品溶出行為存在差異；不同企業生產的產品所使用的原料藥質量不同；現行標準含量測定方法能準確體現樣品含量的真實值，但有關物質檢測方法有待完善；建立的近紅外一致性檢驗模型可以對相應廠家生產的樣品進行有效識別。結論 按現行標準檢驗，石杉堿甲口服固體制劑總體合格率較好，但部分企業需改進生產工藝及處方，提高產品質量。

石杉堿甲口服固體制劑；質量分析；法定檢驗

石杉堿甲(huperzine A，Hup A)是來源于蕨類植物蛇足石杉的一種倍半萜生物堿，為高效、高選擇性、可逆性的乙酰膽堿酯酶(acetylcholine esterase，AChE)抑制藥，1986年其結構得到確認[1]。有神經保護以及對抗氧化應激、改善腦缺血損傷、修復記憶損傷等作用。目前，Hup A治療阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)療效顯著，此外還用于治療重癥肌無力和小兒麻痹癥、提高青春期學生的記憶力、緩解有機磷中毒等。現國內有片劑、膠囊劑、注射劑3種劑型，國外僅美國有石杉堿甲片保健品上市。片劑有9個批準文號、膠囊劑有3個批準文號，注射劑有2個批準文號。石杉堿甲片/膠囊是國家基本藥物，規格均為50 μg。收載于《中華人民共和國藥典》2010年版二部，國外藥典均無收載。

石杉堿甲片/膠囊是2013年國家評價性抽驗品種，根據國家食品藥品監督管理局統一安排對86批抽驗產品實施了法定檢驗，并對出現的問題及質量現狀進行了探索性研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津LC-20AT、Ulimate 3000、Agilent 1260)；RCZ-8B 藥物溶出儀(天大天發科技有限公司)，日本理學Rigaku D/max2500型粉末X-射線衍射儀，MATRIX-F近紅外光譜儀。

1.2 試藥 石杉堿甲對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100243-201202，含量：98.4%)；石杉堿甲原料5批：A廠提供(本企業生產，批號：y130102)、B廠提供(Z廠生產，批號：Q0413091)、C廠提供(Z廠生產，批號：Q04130305)、D廠提供(Z廠生產，批號：Q04130412；N廠生產，批號：20130412)。

2 實驗方法

按照《中華人民共和國藥典》二部標準對樣品進行法定檢驗，針對企業對該產品研發、生產、檢驗的情況，對企業進行調研；參照文獻[2-4]報道，結合按法定標準檢驗的結果，開展了一系列的探索性研究。

2.1 抽樣簡介 共抽取樣品86批，其中石杉堿甲片82批，石杉堿甲膠囊4批。石杉堿甲片涉及生產企業6個，占全國該品種生產企業總數66.7%；石杉堿甲膠囊涉及生產企業2個，占全國該品種總的生產企業數的66.7%。樣品涉及全國24個省、市、自治區，其中批次最多的區域為上海。在醫療機構抽取34批，占樣品總數的39.5%；生產企業抽取7批，占樣品總數的8.1%；藥品經營企業抽取45批，占樣品總數的52.3%。

2.2 依據現行質量標準檢驗結果及分析 本次抽取樣品86批，均按《中華人民共和國藥典》2010年版二部檢驗，合格樣品83批，合格率為96.5%。有3批樣品不符合規定，均為石杉堿甲片，涉及2個企業，3批不合格的樣品中有2批樣品有關物質不合格，1批樣品含量及含量均勻度不合格。

2.3 探索性研究結果及分析 結合調研及檢驗情況，針對影響產品質量的溶出度、有關物質、含量等關鍵因素進行如下研究。

2.3.1 石杉堿甲片溶出曲線考察 石杉堿甲片為低規格藥物，為了客觀評價該產品內在質量，采用4種溶出介質(0.1 mol·L-1鹽酸溶液、水、pH4.5緩沖液和pH6.8緩沖液)，利用高效液相色譜法考察石衫堿甲片在不同介質中的溶出曲線。分析各廠家產品在4種不同溶出介質中得到的溶出曲線，從而了解國內石杉堿甲片的溶出情況以及各廠家間的差異。根據按法定標準檢驗的結果，考慮到D廠生產的石衫堿甲片為本次評價性抽驗中樣品量最大、取得批準文號的時間較早，且實驗中該廠家藥品在不同介質中的溶出率較高，因此采用該公司的石衫堿甲片作為參比。對其他廠家的石衫堿甲片進行相似因子計算，比較溶出行為的差異[5]。

結果顯示：①以0.1 mol·L-1鹽酸溶液為溶出介質，所有廠家在15 min內均達到規定限度的80%，前10 min的溶出量顯示各廠家由于工藝和原料不同，溶出行為有一定差異，其中D、A和C三家企業產品在5 min時溶出率高于50%，E、B與F三家企業產品在5 min時溶出率低于50%，在規定的30 min溶出時間內，各企業產品溶出行為差異不明顯。②以水為溶出介質，在各時間點上，各廠家產品的溶出率差異較大。D廠的產品在水中的溶出情況較好。與在0.1 mol·L-1鹽酸溶液中的溶出率比較，其余廠家產品的溶出率均有不同程度的降低。其中，A企業的產品在實驗進行到30 min時溶出率未達到規定限度的80%。在該介質中，不同企業產品溶出行為差異明顯。③以pH4.5緩沖液為溶出介質和以pH6.8緩沖液為溶出介質，各廠家藥品的溶出行為與在0.1 mol·L-1鹽酸溶液中的較為一致。D、A與C 3個廠家的藥品在5 min時溶出率已達到60%左右或以上，其余3個廠家樣品溶出率均低于40%，在5 min以后溶出率才開始有顯著上升。④A企業的藥品與參比制劑相似程度最高，在3個介質中的相似因子均>50，說明其溶出過程與參比制劑較為相似。C企業的藥品僅在pH4.5的介質中相似因子較高，與參比制劑較為一致。其余廠家在4種介質中的溶出行為與參比制劑有較大的差異。因此可初步判斷A企業的藥品與參比制劑的工藝與輔料質量更為接近，C企業的藥品與參比制劑在處方工藝上也有一定的相似度。其余3個廠家的藥品的處方工藝與參比制劑差異較大。

2.3.2 有關物質檢測方法的考察 在按照法定標準對樣品進行檢測的過程中發現：標準規定有關物質檢查記錄色譜圖至主峰保留時間的2倍，但實驗發現部分樣品在主峰保留時間2倍之后仍有雜質峰及較大輔料峰出現，給下一個樣品的檢測帶來干擾。故對有關物質檢測方法進行了探討，考察輔料對有關物質檢查的影響，同時對不同企業生產的原料的有關物質進行考察，比較不同來源原料藥質量差異。

色譜條件：色譜柱為Acclaim 120 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相A為磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀2.72 g，加水1 000 mL溶解，用磷酸調節pH至2.5)，流動相B為乙腈；分別采用等度(A：B=92：8)和梯度的方式(表1)進行洗脫；檢測波長310 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫35 ℃，進樣量50 μL。

表1 梯度洗脫表 %

首先采用等度加延長記錄時間(記錄至主峰保留時間的5倍)的方法，對本次抽驗的86批樣品有關物質進行檢測。結果顯示，部分樣品有關物質測定結果增加，該項目合格率由原來的97.7%變為96.5%。典型樣品溶液色譜圖及空白輔料溶液色譜圖見圖1A、B。采用等度的方法(記錄至主峰保留時間的2.5倍)對不同企業生產的原料的有關物質進行考察。發現不同企業生產的原料雜質個數及總量差異較大，雜質個數較多的是A企業生產的原料，雜質個數較少的是N藥業有限公司生產的原料。按法定標準檢測的結果顯示，A企業的制劑中有關物質含量普遍高于其他企業樣品中有關物質含量，提示原料藥質量是A企業制劑中有關物質的重要影響因素。

為提高效率，縮短分析時間，采用梯度洗脫的方式檢測有關物質，空白溶劑色譜圖見圖1C、空白輔料溶液色譜圖見圖1D、典型樣品溶液色譜圖見圖1E。結果顯示：①采用梯度洗脫的方式與采用等度加延長記錄時間的方法所測得結果一致。②采用梯度洗脫的色譜條件既能保證雜質與主峰、雜質與輔料的有效分離，又能讓保留時間過長的輔料峰的出峰時間大大提前，從而節省了分析時間。③梯度洗脫測得有關物質的結果與等度基礎上延長保留時間的方法測得的雜質個數及雜質含量一致，但輔料峰個數增加，說明采用梯度洗脫的方式更有利于輔料的洗脫，減小了對色譜柱損傷及對其他樣品檢測的干擾，提高了工作效率。

2.3.3 原料藥晶型和粒度考察 按照現行標準檢驗發現不同原料來源的企業生產的樣品有關物質、溶出度檢測結果有差異，筆者采用X-粉末衍射和電鏡掃描的方式對不同企業生產的原料進行分析，探討原料藥晶型和粒度的差異對產品質量的影響[6]。

X-粉末衍射結果顯示，不同企業生產的石杉堿甲原料X-射線粉末衍射圖衍射峰的強度和個數略有差異。電鏡掃描結果顯示：在500倍的放大倍數下，N企業生產的原料藥的粒徑最小，呈無定型狀；A企業生產的原料稍大，呈片狀和無定型狀；而Z企業生產的原料藥粒徑最大，呈較規則的立體結晶狀，粒徑是N企業有限公司生產的原料藥粒徑的數10倍。不同企業生產產品的電鏡掃描圖見圖2。X-射線粉末衍射和電鏡掃描結果提示：不同生產企業石杉堿甲原料藥的結晶工藝存在差異，這些差異與有關物質及溶出度等內在質量的相關性還需進一步研究。

A.空白輔料(等度條件)；B.樣品溶液(等度條件)；C.空白溶劑(梯度條件)；D.空白輔料(梯度條件)；E.樣品溶液(梯度條件)；1.石杉堿甲

圖1 5種溶液不同檢測方法所得色譜圖

2.3.4 含量測定方法的考察 在對樣品含量及含量均勻度檢測中發現，很多樣品的含量接近于低限，有1批樣品含量均勻度及含量不符合規定，該批樣品各片之間的差異較小，含量均勻度不合格的主要原因為含量較低，導致A+1.80s中的A值(A=|100-含量|)較大。不合格的樣品由C企業生產，該企業樣品的平均片質量約為0.13 g，而主藥石杉堿甲只有50 μg。在含量測定中，輔料可能會影響石杉堿甲的溶解。因此，主藥石杉堿甲的溶出及回收情況是含量測定的關鍵。故從三個方面對含量測定結果的影響因素進行探討：①采用該企業提供的原料及空白輔料，進行了回收率實驗；②取石杉堿甲原料藥配成與含量測定一致的濃度的溶液，分別考察超聲不同時間、自然光照1 d、98 ℃水浴2 h、鐵離子(Fe3+)對含量測定結果的影響；③考察濾膜對含量測定的影響，為石杉堿甲片/膠囊含量測定方法提供參考。

結果顯示：現行標準石杉堿甲片的含量測定方法回收好，能體現樣品含量的真實值。濾膜對石杉堿甲無吸附，樣品溶液濾過后不會造成含量測定結果偏低。超聲、光照、高溫、Fe3+均能造成石杉堿甲含量下降。超聲5 min下降約0.5%，建議在石杉堿甲片/膠囊含量測定過程中避免長時間超聲及光照，在溶出度測定過程中應注意避免Fe3+的影響，選擇材質較好的攪拌槳。

圖2 A、Z、N企業生產的原料的電鏡掃描圖(×500)

2.3.5 快檢方法研究 石杉堿甲片2013年國家評價性抽樣共涉及6個廠家，其中4個廠家的抽樣符合近紅外一致性檢驗模型建模條件，針對該4個廠家分別建立近紅外一致性檢驗模型，可以為各廠家樣品快速篩查、快速質量分析提供有效技術支持。按中國食品藥品檢定研究院建議的一致性模型建模參數條件，選擇本廠家的部分光譜作為建模光譜，建立各廠家的一致性檢驗模型，其余部分光譜作為驗證，并用不同廠家的光譜作驗證。采用OPUS軟件，針對不同廠家生產的樣本分別建立模型，光譜預處理方法為二階導數+向量歸一化，13點平滑，閾值為7，在譜段9 000～7 500 cm-1，6 900～5 600 cm-1，5 000～4 250 cm-1區間范圍可以建立較好的一致性模型。

用未參與建模的本廠家光譜與各不同廠家的光譜對建立的一致性模型進行驗證，驗證結果顯示建立的各廠家產品的一致性檢驗模型均能準確識別本廠家的樣品光譜，并區分不同廠家的樣品光譜，經驗證建立的模型準確可靠，一致性指數(conformity index，CI)分布見圖3。

3 討論

溶出度是指藥物從片劑或膠囊劑等固體制劑在規定介質中溶出的速度和程度，它是評價一種藥物不同劑型之間、不同廠家的同一樣品、同一廠家同一樣品不同批次間的重要質量指標。生物藥劑學分類系統(biopharmaceutics classification system ，BCS)根據藥物制劑中活性成分(active pharmaceutical ingredient ，IPA)的水溶性和滲透性對藥品進行分類。石杉堿甲在水中不溶，脂溶性較強，屬于低溶解性高滲透性的藥物，為第Ⅱ類。通過按照法定標準檢驗和探索性研究，反映不同企業樣品溶出行為存在差異，主要與原料藥的質量、生產工藝的優劣有關，如原料藥的粒度、晶型、制粒的均一性、壓片的硬度、生產投料等。也反映原料藥生產到制劑生產過程中的一系列問題：①不同企業原料藥含量和晶型有所不同，需改善結晶工藝，提高含量。②調研結果顯示，質量控制的關鍵工藝參數有粘合劑濃度、混合時間、篩網數目、顆粒率、含量、水分、溫度、烘干時間、總混時間等。混合時間與顆粒含量相關，顆粒水分、顆粒率與崩解時限、脆碎度有關，顆粒度與片重差異有關，干燥的時間和溫度與有關物質、水分含量有關。探索性研究結果顯示，Fe3+和光照均能造成石杉堿甲的降解，故應在生產及儲存過程中注意Fe3+和光照的影響。③調研結果還顯示D企業生產按103%～105%投料，該企業產品含量測定結果在95.0%～100.0%之間，而A企業生產的樣品含量普遍較低，C企業樣品有一批含量不符合規定，提示可能存在低限投料。

采用DAD檢測器對有關物質檢測的色譜圖進行分析，提取主峰及各雜質峰、輔料峰的紫外吸收色譜圖發現：主峰在230及307 nm波長處有最大吸收，而樣品溶液色譜圖中tR=47.7 min處的輔料峰也在232及307 nm波長處有最大吸收，故在此條件下輔料峰比較明顯。探索性研究結果顯示，石杉堿甲片/膠囊采用梯度洗脫的方式優于現行標準的方法，表現為：①梯度洗脫色譜圖上輔料峰更多，說明采用梯度洗脫的方式可以盡可能地將輔料洗脫下來；②梯度洗脫可以使輔料出峰時間提前，避免輔料峰對其他樣品的干擾，并可通過采用輔料進行定位，扣除空白輔料，避免樣品有關物質檢測結果偏高；③現行標準規定有關物質檢測記錄的時間為主峰保留時間的2倍，而實驗發現部分樣品主峰保留時間2倍之外仍有雜質峰出現，采用梯度洗脫保證了有關物質的檢出，避免樣品有關物質檢測結果偏低的情況。

●為驗證樣本；◆為建模樣本；CI限度線以下的●均為本廠家光譜，CI限度線以上的●均為其他廠家光譜

現行標準能基本反映產品的質量狀況，但有關物質檢測方法有待完善。現行標準溶出度的方法為溶出度測定法第三法，溶出介質為0.1 mol·L-1鹽酸，介質體積為100 mL，轉速為50 r·min-1，經30 min取樣，限度為標示量的80%。鑒于以水為溶出介質時，溶出曲線在15 min時已達平臺，水的區分能力較強，建議在原標準方法的基礎上，將溶出時間修訂為20 min，溶出介質修訂為水，并進一步考察。采用此方法對6個企業的6批樣品進行檢測，結果有1批樣品的溶出度低于限度值。質量評價結果亦顯示部分合格產品也存在溶出行為差異大、有關物質偏高、含量處于低限的現象，提示工藝和生產過程管理有待提升。

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《醫藥導報》編輯部

2014-05-13

2014-10-27

孫春艷(1975-)，女，湖北隨州人，副主任藥師，碩士，研究方向：藥物分析。電話：027-87895875，E-mail：suncy25@126.com。

R971；R927.1

B

1004-0781(2015)09-1215-05

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.09.027

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