氟尿嘧啶微乳原位凝膠的溶出度測(cè)定

王璐璐，陳少華，相莉，鄭穩(wěn)生

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥物研究所、藥物傳輸技術(shù)及新型制劑北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050)

氟尿嘧啶微乳原位凝膠的溶出度測(cè)定

王璐璐，陳少華，相莉，鄭穩(wěn)生

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)藥物研究所、藥物傳輸技術(shù)及新型制劑北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050)

目的 建立氟尿嘧啶微乳原位凝膠體外溶出度的測(cè)定方法。方法 采用紫外分光光度法，按照橫置旋轉(zhuǎn)滲透池系統(tǒng)，在溶出介質(zhì)pH7.2磷酸鹽緩沖液中，測(cè)定氟尿嘧啶微乳原位凝膠體外溶出度。結(jié)果 加入處方量80%，100%，120%氟尿嘧啶加樣平均回收率分別為98.42%，97.56%，99.34%；RSD分別為1.22%，1.86%，0.49%。氟尿嘧啶在0.5～16.0 μg·mL-1范圍內(nèi)藥物濃度和紫外吸光度呈良好的線性關(guān)系。使用該實(shí)驗(yàn)確定的方法，氟尿嘧啶微乳原位凝膠具有良好的緩釋效果。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便易行、準(zhǔn)確可靠，且重復(fù)性好，可用于氟尿嘧啶微乳原位凝膠體外溶出度的測(cè)定。

氟尿嘧啶；微乳原位凝膠；溶出度

結(jié)直腸癌發(fā)病率日益上升，已高居惡性腫瘤的第三位，并有趕超胃癌的趨勢(shì)。文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)直腸癌患者好發(fā)年齡約45歲，<40歲者占35%，<30歲者占12%。氟尿嘧啶(fluorouracil，5-FU)是治療結(jié)直腸癌基本用藥，現(xiàn)有給藥方式為注射及口服。5-FU用藥的安全范圍較窄，其主要不良反應(yīng)為骨髓抑制、口腔炎、消化性潰瘍和其他胃腸道反應(yīng)。口服產(chǎn)生的骨髓抑制作用較靜脈注射持久。靜脈注射和靜脈滴注的給藥途徑較好，但是注射部位易發(fā)生靜脈炎，少數(shù)患者發(fā)生神經(jīng)系統(tǒng)和心臟毒性，以及維生素B1缺乏癥，長(zhǎng)期動(dòng)脈插管給藥，會(huì)引起動(dòng)脈血栓[1]。5-FU直腸給藥可以降低系統(tǒng)毒性，并且藥物直接接觸癌癥部位，病灶部位濃度高[2-5]。因此，筆者研制了5-FU微乳原位凝膠以增加藥物的吸收、減少藥物刺激性。本實(shí)驗(yàn)建立了測(cè)定5-FU微乳原位凝膠溶出度的方法，并采用DIBBERN等[6]提出的橫置旋轉(zhuǎn)滲透池系統(tǒng)考察了藥物的釋放。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 MA260S型電子分析天平(上海第二天平儀器廠，感量0.01 mg)，HP8453紫外分光光度計(jì)(美國(guó)惠普公司)，RCZ-8A智能溶出儀(天津大學(xué)精密儀器廠)。

1.2 試藥 5-FU對(duì)照品(USP Rockville.MD.LOT，No.1097658，含量：99.99%)，5-FU微乳原位凝膠(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院制備，批號(hào)：130514，130515，130516)，磷酸二氫鉀、鹽酸、氫氧化鈉均為分析純，實(shí)驗(yàn)室用純凈水為重蒸去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 5-FU微乳原位凝膠的制備 5-FU微乳制備：將大豆油、司盤80，聚山梨酯80 和1，2-丙二醇按(22：5：1：6)的比例混合，在45 ℃，2 000 r·min-1的條件下持續(xù)攪拌，逐滴加入1.5% 5-FU溶液33 mL，繼續(xù)攪拌10 min，得到白色微乳。5-FU微乳原位凝膠制備：取含有一定量泊洛沙姆407和黏附劑卡波姆的溶液，冰箱中放置過(guò)夜，得到澄清溶液，4 ℃，700 r·min-1持續(xù)攪拌，與一定量第一步制得的5-FU微乳混合，繼續(xù)攪拌10 min，緩慢升溫至室溫，得到白色凝膠。

2.2 分析方法的驗(yàn)證

2.2.1 各組分吸收光譜 5-FU原料：以人工腸液(見(jiàn)《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版，二部附錄，pH7.2)為溶劑，所配濃度15 μg·mL-1。

空白微乳原位凝膠：制備不含藥物的微乳原位凝膠，方法同5-FU微乳原位凝膠，10 ℃放置成液體，以人工腸液稀釋至適宜濃度，取續(xù)濾液。將二者同時(shí)在波長(zhǎng)200～500 nm范圍進(jìn)行掃描。結(jié)果表明，微乳原位凝膠輔料在265 nm處吸光度與藥物比較可略去不計(jì)。

2.2.2 線性回歸實(shí)驗(yàn) 精密稱取5-FU標(biāo)準(zhǔn)品適量，用人工腸液(pH7.2)配成0.5，1.0，4.0，8.0，12.0，16.0 μg·mL-1的濃度系列，于265 nm處測(cè)定吸光度(A)以濃度(C，μg·mL-1)對(duì)吸收度(A)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為A=0.051 3C+0.130 8(r=0.999 6，n=5)。結(jié)果表明，5-FU在0.5～16.0 μg·mL-1范圍內(nèi)，濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.2.3 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 按處方比例稱取輔料，分別加入該處方量對(duì)應(yīng)的80%，100%，120%5-FU對(duì)照品，加溶出介質(zhì)溶解并分別稀釋。結(jié)果見(jiàn)表1，表明該方法準(zhǔn)確性良好。

2.2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品，照“2.2.1”項(xiàng)方法配制對(duì)照品溶液，在265 nm波長(zhǎng)下測(cè)定A，分別連續(xù)測(cè)定6次，連續(xù)測(cè)定3 d，按吸光度計(jì)算RSD為0.57%，日間精密度RSD為0.71%，結(jié)果表明該方法精密度較好。

表1 5-FU加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，分別于0，2，4，8和16 h在265 nm波長(zhǎng)下測(cè)定A值，按5-FU吸光度計(jì)算得RSD為0.84%。結(jié)果表明，5-FU溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3 5-FU微乳原位凝膠溶出度測(cè)定

2.3.1 測(cè)定裝置 采用德國(guó)DIBBERN等[6]提出的橫置旋轉(zhuǎn)滲透池系統(tǒng)，整個(gè)運(yùn)動(dòng)過(guò)程相對(duì)比較平穩(wěn)、緩慢，可產(chǎn)生類似于腸蠕動(dòng)的效果。在滲透池兩側(cè)均有一片槳葉與滲透池同步運(yùn)轉(zhuǎn)，可滿足釋放出的活性成分能迅速地?cái)U(kuò)散到整個(gè)吸收液中，并使其均勻。

2.3.2 測(cè)定方法 采用橫置旋轉(zhuǎn)滲透池系統(tǒng)，將滲透池浸入900 mL恒溫至(37.0±0.5)℃的人工腸液中(pH7.2)。分別于10，30 min，1，2，4，6，8，12 h精密量取釋放液10 mL置試管中(后立即補(bǔ)充同溫人工腸液10 mL)，再于試管內(nèi)精密量取釋放液2 mL，置25 mL量瓶，加人工腸液稀釋至刻度，于265 nm處測(cè)定吸光度(A)，由標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線方程中求出5-FU濃度，再計(jì)算出各個(gè)不同時(shí)間的累積溶出率(%)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，累積溶出率為縱坐標(biāo)，繪制體外釋放曲線[7]。結(jié)果見(jiàn)圖1，表明5-FU微乳凝膠具有良好的緩釋效果，可延緩釋放至10 h，經(jīng)DD Solver(1.0版)軟件擬合，藥物釋放符合 Madoid-Banakar 緩釋模型。

3 討論

本研究將脂溶性差的5-FU制成油包水(W/O)型微乳并進(jìn)一步將其制成溫度敏感原位凝膠，此制劑在室溫狀態(tài)下為固態(tài)，穩(wěn)定性好，使用前10 ℃短時(shí)間冷藏可恢復(fù)成自由流動(dòng)的液體狀態(tài)，使用后，在體溫條件下轉(zhuǎn)變成具有一定凝膠強(qiáng)度和生物粘附力的固體凝膠，其中攜帶的藥物微乳增加了藥物跨生物膜吸收效率、延緩藥物的釋放、減少藥物對(duì)直腸黏膜的刺激性，因此可以提高藥物的生物利用度，降低不良反應(yīng)，提高患者使用的依從性。

圖1 5-FU微乳原位凝膠體外溶出曲線

根據(jù)《中華人民共國(guó)國(guó)藥典》2010年版二部中5-FU含量測(cè)定項(xiàng)目中規(guī)定5-FU測(cè)定濃度為10 μg·mL-1，故標(biāo)準(zhǔn)曲線制定中5-FU標(biāo)準(zhǔn)品的濃度配制在0.5～16.0 μg·mL-1范圍。

本實(shí)驗(yàn)中，隨著滲透池的轉(zhuǎn)動(dòng)凝膠幾乎平鋪在半透膜上，與緩沖液有良好的交換，與直腸給藥藥物釋放狀態(tài)相似，適合于直腸給藥劑型溶出度的測(cè)定。

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2014-03-27

2014-07-27

王璐璐(1973-)，女，上海人，副研究員，碩士，從事新劑型及制劑新技術(shù)研究。電話：(0)13621284066，E-mail：wanglulu@imm.ac.cn。

R979.1；R944

B

1004-0781(2015)09-1213-02

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.09.026