湖北部分地區(qū)紅斑丹毒絲菌分離株耐藥性分析

李敬濤 吳 超 王 雅 黃開松 金梅林

農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室/華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，武漢 430070

湖北部分地區(qū)紅斑丹毒絲菌分離株耐藥性分析

李敬濤 吳 超 王 雅 黃開松 金梅林*

農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室/華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，武漢 430070

采用藥敏紙片擴(kuò)散法對31株湖北部分地區(qū)分離株進(jìn)行19種臨床常用抗生素耐藥性試驗分析，結(jié)果表明：臨床分離株對卡那霉素、鏈霉素、阿米卡星、多粘菌素B、萬古霉素和磺胺異惡唑的耐藥率為100%，慶大霉素、復(fù)方新諾明、氧氟沙星、壯觀霉素、林可霉素和四環(huán)素的耐藥率分別為96.8%、83.9%、32.3%，25.8%，22.6%和9.67%，對頭孢拉定、阿莫西林和阿奇霉素高度敏感。

紅斑丹毒絲菌；耐藥性；藥敏試驗

紅斑丹毒絲菌是一種革蘭氏陽性小桿菌，是豬丹毒的主要病原菌[1]。近些年來，中國南方部分地區(qū)暴發(fā)大規(guī)模的豬紅斑丹毒絲菌感染疫情，主要表現(xiàn)為急性敗血癥和疹塊型，以3～6月齡架子豬發(fā)病率最高，可引起母豬的急性死亡，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，同時給人類健康造成了潛在威脅。本實驗室對湖北省8個不同地區(qū)豬場臨床分離株進(jìn)行了藥物敏感性測定，為臨床用藥提供理論依據(jù)，避免濫用抗生素，減緩紅斑丹毒絲菌產(chǎn)生耐藥性的速度。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株

紅斑丹毒絲菌（31株）。本實驗室于2012-2013 年10月從湖北省8個不同地區(qū)（武漢市15株、荊州市7株、沙洋3株，松滋、鐘祥、隨州各2株）的豬場發(fā)生豬丹毒的病死豬中分離、純化和鑒定。

1.2 培養(yǎng)基和藥敏紙片

TSA（胰蛋白胨大豆瓊脂）和TSB（胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基）購自美國BD公司；新生牛血清購自杭州四季青生物公司；強力霉素、卡那霉素、氧氟沙星、鏈霉素、阿莫西林、慶大霉素、阿米卡星、多粘菌素B、萬古霉素、復(fù)方新諾明、壯觀霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、林可霉素、四環(huán)素、青霉素、磺胺異惡唑、頭孢拉定、阿其霉素、克林霉素，購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.3 藥敏試驗

取凍干保存的待測菌株，于TSA平板劃線，37℃復(fù)蘇。挑取培養(yǎng)的紅斑丹毒絲菌單菌落于添加10%血清的TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h。按1∶500轉(zhuǎn)接添加10%血清的TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)中期。用無菌棉拭子蘸取菌液均勻涂于TSA培養(yǎng)基表面。平板于室溫下干燥后將抗生素紙片緊貼于瓊脂表面。37℃恒溫培養(yǎng)18 h，觀察結(jié)果。參考美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）藥敏紙片擴(kuò)散法，以抗生素的抑菌環(huán)和敏感標(biāo)準(zhǔn)作為判定依據(jù)。

1.4 耐藥率和耐藥譜的分析

耐藥率的測定。對某種抗生素的耐藥菌株數(shù)占分離株的豬鏈球菌總數(shù)的百分比。

耐藥譜的測定。統(tǒng)計同一菌株對不同抗生素的耐藥率。

2 結(jié) 果

2.1 藥敏試驗結(jié)果

選擇19種較常見的抗生素藥敏紙片對31株分離株進(jìn)行藥敏試驗。結(jié)果顯示，這3株豬紅斑丹毒絲菌均對氨芐青霉素、青霉素、阿莫西林、復(fù)方新諾明、頭孢噻肟、頭孢曲松耐藥；對氟哌酸、替考拉寧、恩諾沙星敏感，其中對恩諾沙星的抑菌圈最大，最為敏感，對其他5種抗生素敏感性不一。見表1、表2。

表1 31株紅斑丹毒絲菌的藥敏試驗結(jié)果

2.2 紅斑丹毒絲菌的耐藥性

31株紅斑丹毒絲菌分離株對19種抗生素有不同的耐藥性，所有菌株均對卡那霉素、鏈霉素、阿米卡星、多粘菌素B、萬古霉素和磺胺異惡唑耐藥，慶大霉素和復(fù)方新諾明的耐藥率分別為96.8%和83.9%，氧氟沙星、壯觀霉素、林可霉素和四環(huán)素的耐藥率分別為32.3%、25.8%、22.6%和9.67%。其他藥物未發(fā)現(xiàn)耐藥性。見圖1。

2.3 紅斑丹毒絲菌分離株耐藥譜分析

31株紅斑丹毒絲菌對19種抗生素耐藥譜分析結(jié)果見表3，所有分離株均對多種抗生素有不同程度的耐藥性，有30株對8種及以上的抗生素耐藥，占分離株的96.8%，只有一株菌耐7種抗生素，可見臨床分離株的多重耐藥比較嚴(yán)重。

3 討 論

從31株紅斑丹毒絲菌對19種抗生素耐藥性分析結(jié)果顯示，所有菌株對不同抗生素具有多重耐藥性，可見湖北省的一些豬場耐藥性很普遍，而且耐藥譜廣，究其原因可能是：紅斑丹毒絲菌在健康豬的扁桃體和淋巴組織中的分離率高達(dá)30%～50%[2]，養(yǎng)殖戶在養(yǎng)殖和疾病防控時大量使用抗生素加速了多重耐藥的產(chǎn)生；紅斑丹毒絲菌可能和其他種類的細(xì)菌發(fā)生基因組交流。因此，在臨床選擇治療豬丹毒時應(yīng)高度重視，合理用藥。

圖1 紅斑丹毒絲菌對20種抗生素的耐藥率

表2 31株紅斑丹毒絲菌的藥敏試驗結(jié)果

表3 不同紅斑丹毒絲菌分離株對20種抗生素耐藥譜測定結(jié)果

本研究選取常見的19種抗生素對臨床分離株進(jìn)行藥敏試驗，結(jié)果表明31株分離菌對青霉素、頭孢他啶、阿奇霉素敏感性最強，對喹諾酮類藥物如恩諾沙星和環(huán)丙沙星的敏感性降低，對卡那霉素、鏈霉素、磺胺異惡唑、阿莫西林、萬古霉素完全耐藥，未發(fā)現(xiàn)耐青霉素菌株。在這次中國豬丹毒疫情暴發(fā)之前，紅斑丹毒絲菌對青霉素高度敏感，一直是發(fā)生豬丹毒疫情的首選藥[3-6]，何世成等報道湖南紅斑丹毒絲菌臨床分離株HR-6、ZY-8、XY-9對氨芐青霉素、青霉素、阿莫西林、頭孢噻肟和頭孢曲松均產(chǎn)生耐藥性[7]，但是這次安徽和廣州的分離株還是對青霉素高度敏感[8-9]。中國的這次豬丹毒疫情暴發(fā)，湖南省產(chǎn)生了耐青霉素菌株，因此其他省份在治療豬丹毒時，選擇青霉素時應(yīng)謹(jǐn)慎。此外，這次豬丹毒疫情暴發(fā)的臨床分離株對磺胺類藥物產(chǎn)生了耐藥性，對喹諾酮類藥物的敏感性在降低，紅斑丹毒絲菌的耐藥性越趨嚴(yán)重。

張樂宜等[8]報道，此次廣州豬丹毒疫情，在臨床治療過程中采用飼料添加阿莫西林、頭孢類藥物同時肌注兩類藥物的方法，短期內(nèi)不能控制疫情的持續(xù)發(fā)生，須持續(xù)用藥10～14 d。在臨床使用頭孢類和青霉素類藥物，應(yīng)注意使用的劑量、次數(shù)、時間和反復(fù)用藥，否則會導(dǎo)致部分紅斑丹毒絲菌不被抑殺，從而產(chǎn)生耐藥性。

[1] WANG Q， CHANG B J， RILEY T V.Erysipelothrix rhusiopathiae[J].Vet Microbiol，2010，140（3/4）：405-417.

[2] EAMENS，G J，F(xiàn)ORBES W A，et al.Characterisation of Erysipelothrix rhusiopathiaeisolates from pigs associated with vaccine breakdowns[J].Vet Microbiol，2006，115（4）：329-338.

[3] Venditti，M，et al.Antimicrobial susceptibilities ofErysipelothrix rhusiopathiae[J].Antimicrob Agents Chemother，1990，34（10）：2038-2040.

[4]萬培偉，熊莉娟，褚玉雙，等.豬丹毒桿菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，35（6）：160-163.

[5]覃松桂.亞急性豬丹毒的診斷與治療方法分析[J].農(nóng)民致富之友，2014（16）：275.

[6]王千菊，陳堅，巫月生，等.一株豬丹毒桿菌的分離鑒定及其對活疫苗免疫豬的攻毒試驗 [J].廣東畜牧獸醫(yī)科技，2014，39（2）：29-33.

[7]何世成，談志祥，劉道新，等.3株豬紅斑丹毒絲菌湖南株的分離與鑒定[J].中國畜牧獸醫(yī)，2011，38（5）：155-157.

[8]張樂宜，李艷，蔡汝健，等.豬紅斑丹毒絲菌GZ株的分離鑒定及序列分析[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報，2014，23（7）：31-38.

[9]陸萍，黃曉慧，李春芬，等.安徽部分地區(qū)豬丹毒桿菌的分離鑒定及生物學(xué)特性研究[J].微生物學(xué)通報，2014，41（9）：1822-1828.

[10]段小衛(wèi)，王娜.亞急性豬丹毒的診斷與治療[J].畜牧與飼料科學(xué)，2010，31（1）：183-184.

[11]李黎，李光沐，俞寧，等.豬丹毒的診斷與防治措施[J].畜牧與飼料科學(xué)，2009，30（7）：118-123.

2015-01-04

李敬濤，男，1988年生，在讀碩士生，研究方向：動物傳染病學(xué)。