人參與林蛙油配伍的保健食品體外致突變試驗研究

張晶瑩 宋昕恬 張琨 隋自潔 高峰

人參與林蛙油配伍的保健食品體外致突變試驗研究

張晶瑩 宋昕恬 張琨 隋自潔 高峰

目的 體外觀察人參與林蛙油配伍的保健食品能否誘發(fā)鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株的回復突變。方法 Ames試驗用TA97、TA98、TA100、TA102菌株并分加與不加肝微粒體酶活化系統(tǒng)(+/-S9)試驗。結果 人參與林蛙油配伍的保健食品對4個菌株各劑量組的回復菌落數(shù)都未超過自然回復菌落數(shù), Ames試驗結果為陰性。結論 在5000-8 μg/皿劑量下未見人參與林蛙油配伍的保健食品致突變性。

人參；林蛙油；配伍；保健食品；Ames試驗；致突變性

人參作為著名的中草藥, 在我國已經(jīng)使用了幾千年之久, 據(jù)《神農本草經(jīng)》記載：“人參主補五臟, 安精神, 定魂魄, 止驚悸, 除邪氣, 明目開心益智, 久服輕身延年”［1］。 林蛙油又稱蛤蟆油、田雞油、哈什螞油, 為雌性林蛙干燥的輸卵管制品, 具有補腎益精、潤肺養(yǎng)陰之功效, 其主要分布東北長白山區(qū)。林蛙油中含有多種生理活性物質, 具有明顯的生理保健作用［2］。因此, 本文采用Ames 試驗平皿摻入法對人參與林蛙油配伍的保健食品進行了體外致突變效應初步探討, 為其保健食品開發(fā)利用提出科學理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 人參與林蛙油配伍的保健食品, 由本實驗室自制；敵克松、疊氮鈉、二氨基芴、1, 8-二羥基蒽醌均購

自Sigma公司；D-生物素、L-鹽酸組氨酸購自Fluka公司；鼠傷寒沙門氏菌突變型菌株TA97、TA98、TA100、TA102和S9均購自上海啟發(fā)實驗有限公司。

1.1.2 儀器 電熱恒溫培養(yǎng)箱、電熱恒溫水浴箱, 均由上海基瑋試驗儀器設備有限公司產；立式壓力蒸汽滅菌儀(YXQ-LS-50G型), 上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠產；METTLER TOLEDO-AB204-N分析天平, 上海產。

1.2 方法

1.2.1 試驗方法 依據(jù)《保健食品安全性毒理學評價程序和檢驗方法規(guī)范》中介紹的平板摻入法進行試驗［3］。試驗設5000、1000、200、40、8 μg/皿5個劑量。取2.5 g受試物加二甲基亞砜至50 ml混均即為5000 μg/皿劑量, 其余各受試物劑量1/5倍比遞減稀釋；上述受試液經(jīng)滅菌(時間：20 min,溫度：121℃, 壓力：0.103 MPa)后使用；另設未處理對照、溶劑對照、陽性對照。在頂層瓊脂中加入0.1 ml試驗菌株增菌液、0.1 ml受試物溶液, 代謝活化時加入0.5 ml S9混合液,混勻后倒入底層培養(yǎng)基平板上。37℃, 培養(yǎng)48 h, 計數(shù)每皿回變菌落數(shù)。如果受試物的回變菌落數(shù)是自發(fā)回變菌落數(shù)2倍以上, 并具有劑量-反應關系者則定為陽性。每個劑量做3個平行。整套試驗在相同條件下重復做2次并分別統(tǒng)計。

1.2.2 陽性對照 活化系統(tǒng)TA97、TA98、TA100采用二氨基芴10.0 μg/皿, TA102為1, 8-二羥基蒽醌50.0 μg/皿。非活化系統(tǒng)TA97、TA98、TA102為敵克松50.0 μg/皿, TA100為疊氮鈉1.5 μg/皿。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

結果顯示, 將人參與林蛙油配伍的保健食品在鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變株TA97、TA98、TA100、TA102進行平板摻入試驗, 無論在加和不加S9混合液時, 8～5000 μg/皿各劑量組均未引起試驗菌株的回復突變菌落數(shù)顯著增加, 與陰性對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；溶劑對照組的菌落回變數(shù)與陰性對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；陽性誘變劑誘發(fā)回變菌落數(shù)均明顯增加, 與陰性對照比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。

3 討論

Ames試驗是國際上通用的遺傳毒理學鑒定致突變的必檢項目之一。采用鼠傷寒沙門氏菌的組氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株作為微生物, 檢測化學物的致突變性。人工誘變的鼠傷寒沙門氏菌的組氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株在其組氨酸操縱子中有一個突變, 突變菌株必需以來外源性組氨酸才能生長, 在無組氨酸的選擇性培養(yǎng)基上不能存活, 誘變劑可使其基因發(fā)生回復突變, 使它在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上也能生長［4］。另外, Ames試驗在安全性評價方面具有舉足輕重的作用, 應在生物安全柜中操作及觀察結果, 注意嚴格無菌操作, 以保證本次試驗結果的可靠性［5］。

本試驗將人參與林蛙油配伍的保健食品與各標準菌液混合后在最低營養(yǎng)板上培養(yǎng), 依據(jù)出現(xiàn)的回變菌落數(shù)及致突變比值來判斷其是否存在誘變物質。結果顯示, 在有無S9的作用下, 人參與林蛙油配伍的保健食品各劑量組均未發(fā)現(xiàn)測試菌株回變菌落數(shù)超過陰性對照組回變菌落數(shù)的2倍, 且無劑量-反應關系, 而陽性對照組各測試菌株的回變菌落數(shù)均明顯增加, 并超過陰性對照組回變菌落數(shù)的2倍以上, 證實本實驗條件下, 鼠傷寒沙門氏菌的組氨酸營養(yǎng)缺陷型突變菌株對人參與林蛙油配伍的保健食品檢測結果為陰性, 試驗結果表明, 人參與林蛙油配伍的保健食品在5000-8μg/皿的劑量內無致突變性, 為其進行功能學評價提供了科學依據(jù)。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部) .北京: 化學工業(yè)出版社, 2005: 261.

［2］ Hwang J, Kleinhenz DJ, RUpnow HL, et al.The PPAR gamma ligand, rosiglitazone, reduces vascular oxidative stress and NADPH oxidaseexpression in diabetic mice.Vascul Pharmacol, 2007, 46(6): 456-462.

［3］ 中華人民共和國衛(wèi)生部, 國家標準化管理委員會.保健食品安全性毒理學評級程序和檢驗方法規(guī)范(2003版) .北京:中國標準出版社, 2004:24-35.

［4］ Li J, Kong X, Li X, et al.Genotoxic evaluation of aspirin eugenol ester using the Ames test and the mouse bone marrow micronucleus assay.Food Chem Toxicol, 2013, 62(12):805-809.

［5］ Anjum R, Krakat N, Toufiq Reza M, et al.Assessment of mutagenic potential of pyrolysis biochars by Ames Salmonella/mammalianmicrosomal mutagenicity test.Ecotoxicol Environ Saf, 2014, 107(19):306-312.

2014-08-28］

吉林省醫(yī)藥產業(yè)發(fā)展專項資金項目(項目編號：20130727075YY)

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