CD147分子表達與前列腺癌惡性程度相關性研究＊

西安醫學院機能實驗中心（西安710021） 周 芳 譚逸然

前列腺癌（Prostate cancer，PCa）的發病率在不同種族和地區有著極大的差異，在西方國家，PCa是男性最常見的惡性腫瘤，約占男性惡性腫瘤的1／3，死亡人數居第2位，僅次于肺癌。我國是PCa的低發區，但隨著人群壽命的延長，飲食結構及生活習慣的改變，疾病檢測手段的提高，前列腺癌的發病率逐年上升，并成為威脅我國老年男性生命的重要疾病［1，2］。

CD147分子是最近腫瘤研究的一個新興熱點。研究發現CD147在正常細胞中不表達或僅有極低的表達，但在乳腺癌、肝癌、喉鱗癌等多種惡性腫瘤中高度表達，且腫瘤惡性程度越高，CD147蛋白表達越高［3，4］。證明其表達與腫瘤的發生相關性很強。但CD147在前列腺癌中表達如何改變以及與前列腺癌惡性程度的關系未見報道。

材料與方法

1 組織來源 本實驗選取2004～2007年間，西安醫學院第一附屬醫院97例前列腺癌患者組織和45例正常前列腺組織進行對比，組織標本由西安交通大學第一附屬醫院病理科提供。97例前列腺癌患者平均年齡68．6歲，均有臨床及病理診斷。按TNM分期I期15例，II期26例，III期29例，IV期27例。全部標本均經10%多聚甲醛處理，石蠟包埋，4μm連續切片。

2 實驗試劑 CD147單克隆抗體、S-P（Streptavidin／Peroxidase）免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒均來自美國Sigma公司。

3 石蠟切片免疫組化染色 采用S-P免疫組化染色法檢測CD147，用已知CD147陽性肝癌標本做陽性對照，PBS取代一抗作陰性對照。免疫組織化學操作按說明書進行，步驟如下：①切片脫蠟水化，二甲苯20min×2，無水酒精5min×2，95%酒精2min×2，90%酒精2min，80%酒精2min，70%酒精2min，PBS3min×3；②滅活內源性過氧化物，3%雙氧水10min，PBS5min×3；③封閉非特異結合，去背景，5%正常羊血清20min；④抗原抗體結合，一抗室溫80min或4℃過夜，PBS5min×3，二抗室溫20min，PBS 5min×3，三抗室溫20min，PBS 5min×3；⑤DAB顯色；⑥復染，蘇木精復染7min，1%鹽酸酒精分化30s；⑦透明和封片。

4 評價方法 CD147染色陽性表現棕黃色或棕褐色，主要定位于胞膜和胞漿。每張切片均由三位病理科醫生分別隨機觀察具有代表性的10個高倍視野，根據胞膜和胞漿的染色程度及染色細胞百分率進行評分：基本不著色者為0分，著色淡者為1分，著色適中者為2分，著色深者為3分；著色細胞占計數細胞百分率＜5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，＞51%為3分。將每張切片著色程度得分與著色細胞百分率得分相乘為其最后得分，0～1分為陰性，2～3分為弱陽性（＋），＞4分為強陽性（?）。

5 統計學處理 本組對所有資料采用SPSS10．0軟件進行處理，正常組標本與PCa組標本中CD147表達區別采用卡方（χ2）檢驗，PCa組標本中各期CD147表達區別用秩和檢驗，以P＜0．05為有顯著性差異，P＜0．01為有極顯著性差異。

結 果

1 CD147在前列腺正常組織和癌組織中的表達見表1及附圖。45例正常前列腺組織中40例表達為陰性，5例表達為弱陽性；97例前列腺癌組織中38例表達為弱陽性，59例表達為強陽性。CD147在陽性表達在前列腺癌組織中明顯升高（P＜0．01）。

2 CD147在前列腺癌各期中的表達 見表2。將前列腺癌按TNM分期分為I，II，III和IV期，各期CD147陽性表達率分別為0．1%、34．3%、56．1%和84．8%。各期分別和其前一期比較（即I和II期比較，II和III期比較，III和IV期比較），CD147陽性表達率均升高（P＜0．01），各期陽性表達率具有極顯著性差異（P＜0．01）。

附圖 前列腺組織免疫組化染色圖 A示正常組織；B示弱陽性；C示強陽性 （×200）

表1 正常組和PCa組標本中CD147陽性表達

表2 PCa組標本TNM分期之間CD147表達陽性率比較

討 論

本實驗結果提示：CD147在前列腺癌組織中也有高表達，而且隨著TNM分期的升高，CD147在前列腺癌組織表達陽性率及強陽性也升高。說明前列腺癌的發生與CD147的表達有關，并且與TNM分期呈正相關。

正常組織的上皮細胞由一層基底膜與軀體其它部位隔離開來，正常細胞是不能突破這一基底膜屏障的。但是腫瘤細胞通過刺激基質細胞釋放基質金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinase，MMPs），破壞基底膜屏障。隨著前列腺癌的分級增加（即惡性程度增加），其基底膜的缺失也增大。另外，腫瘤若增大到一定的體積時，就需要新生毛細血管來提供其生長所需的養份，獲得生成血管能力是前列腺上皮肉瘤發展為浸潤性腫瘤的重要步驟。

CDl47分子是一個新的細胞表面粘附分子，又叫細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子（Extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN），研究發現：CD147在正常細胞中不表達或僅有極低的表達，但是在腫瘤組織中，尤其是惡性腫瘤組織中表達常較高，其在腫瘤的浸潤和轉移、腫瘤的惡性轉化及血管形成中發揮重要作用［5，6］。目前已證實了CDl47分子在乳腺癌、肝癌、喉鱗癌、骨肉瘤等多種惡性腫瘤中高度表達［7］。CDl47分子可刺激腫瘤周圍間質細胞產生MMPs，從而降解細胞外基底膜和間質成分，與腫瘤侵襲和轉移密切相關［8，9］。而且，腫瘤細胞表達的CDl47分子也可作用于鄰近的癌細胞，相互誘導促進MMPs釋放降解基質，并水解腫瘤細胞表面的粘附成分而有助于癌細胞的遷移［7，8］。另外，它還可以通過在RNA和蛋白水平影響血管內皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達，促進腫瘤血管的生成［10，11］。另外，CD147分子的表達還和自噬有很強的相關性，也可以通過自噬來調控腫瘤的發生與發展，而在前列腺癌中的其他機制還需要進一步研究。

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