注射用丹參多酚酸鹽對(duì)兔主動(dòng)脈粥樣硬化程度的影響

西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院老年心血管科干二病區(qū)（西安710004）

高 潔 盛 嬰△ 金愛(ài)萍 葉 莎

目前動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）相關(guān)疾病是人群死亡的首位原因，在我國(guó)發(fā)病率、致殘率和病死率呈逐年上升趨勢(shì)。藥理研究證實(shí)：丹參多酚酸鹽具有改善內(nèi)皮功能、促進(jìn)血管生成、抑制低密度脂蛋白的氧化修飾、抗炎、抑制金屬蛋白酶的表達(dá)等作用［1］。本研究以AS易感動(dòng)物，遺傳性高脂血癥兔（Watanabe heritable hyperlipidemic rabbit，WHHL兔）為研究對(duì)象，給予高膽固醇飲食建立動(dòng)脈粥樣硬化模型后觀察丹參多酚酸鹽對(duì)兔主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化程度的影響，為此類藥物用于人類動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防和治療提供研究基礎(chǔ)。

材料與方法

1 動(dòng)物與藥品 選擇新西蘭兔24只，雄性，1月齡，體重1．2～1．6kg，購(gòu)自西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)普通飼料1周后，稱重，隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組8只，飼喂正常飼料120g／d；高膽固醇飲食組8只，飼喂高膽固醇飼料120g／d；高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組8只，高膽固醇飼料120g／d＋丹參多酚酸鹽120mg／kg·d腹腔內(nèi)注射（由上海綠谷制藥有限公司），喂養(yǎng)8周后處死每組動(dòng)物。高膽固醇飼料按照西方飲食飼料配方：膽固醇2%，蛋黃粉5%，豬油8%，基礎(chǔ)飼料85%。

2 試劑及儀器 二甲苯溶液，100%乙醇，95%乙醇，80%乙醇，70%乙醇，50%乙醇，蒸餾水，蘇木素，鹽酸酒精，1%氨水，1%伊紅，中性樹膠由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院病理科提供；Masson復(fù)合染色液，1%亮綠SF，1%磷鉬酸，0．2%醋酸購(gòu)自北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司；光學(xué)顯微鏡（BX-51型）購(gòu)于日本Olympus公司；病理圖文分析系統(tǒng)PIPS2000購(gòu)于重慶天海醫(yī)療設(shè)備有限公司；酒精燈，試管，試劑杯，量筒，鑷子，量杯，毛筆，金屬架，防脫載玻片，蓋玻片，操作臺(tái)均由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院病理科提供。

3 標(biāo)本取材及留取 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別在預(yù)定實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)給予耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉30mg／kg全身麻醉后左心室取血5ml并注入空氣20ml空氣栓塞處死動(dòng)物。立即開胸并剪開右心房，自左心室灌注福爾馬林固定主動(dòng)脈；分離主動(dòng)脈，取出從近主動(dòng)脈弓部到髂動(dòng)脈分叉處全部主動(dòng)脈，清除血管外組織，生理鹽水沖洗，置于中性甲醛緩沖液中固定。

4 HE染色及Masson染色鏡下觀察 HE染色鏡下觀察病理切片形態(tài)，泡沫細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)，纖維帽形成，膠原纖維增殖及融合，病灶深部可見(jiàn)壞死崩潰物等情況，從HE染色片上隨機(jī)選取5個(gè)視野，利用朗珈PAS9000病理分析系統(tǒng)對(duì)主動(dòng)脈內(nèi)膜，中膜厚度及內(nèi)膜／中膜（IMT）進(jìn)行測(cè)量。通過(guò) Masson染色觀察動(dòng)脈硬化分級(jí)：0級(jí)：正常血管；1級(jí)：少于50%的外膜受累，內(nèi)膜增生占管腔不超過(guò)20%；2級(jí)：50%～100%的外膜受累輕度纖維化，內(nèi)膜增生不超過(guò)管腔的20%；3級(jí)：100%外膜受累，中度纖維化，內(nèi)膜增生占管腔的20%～50%；4級(jí)：100%外膜受累，重度纖維化，內(nèi)膜增生達(dá)管腔的50%～80%；5級(jí)：全部管腔閉鎖。

5 圖像采集及統(tǒng)計(jì)分析 采用德國(guó)Leica公司QWin550CW圖像系統(tǒng)進(jìn)行采集與分析。本組數(shù)據(jù)采用SPSS17．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)正態(tài)分布且方差齊同資料采用單因素方差分析檢驗(yàn)，各組之間兩兩比較用LSD-T法。以P＜0．05為有顯著性差異，P＜0．01為有極顯著性差異。

結(jié) 果

1 動(dòng)脈壁及AS斑塊肉眼觀察 見(jiàn)圖1。正常對(duì)照組WHHL兔主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，未見(jiàn)明顯異常；高膽固醇飲食組WHHL兔主動(dòng)脈內(nèi)膜形成明顯粥樣斑塊，融合成片，呈瓷白色，斑塊布滿主動(dòng)脈全程，胸主動(dòng)脈及腹主動(dòng)脈的各動(dòng)脈分支入口處可見(jiàn)明顯斑塊形成；高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組WHHL兔主動(dòng)脈內(nèi)膜不光滑，內(nèi)膜散在不規(guī)則隆起的斑塊，顏色為淺黃色，由主動(dòng)脈弓至腹主動(dòng)脈斑塊逐漸減少，各動(dòng)脈分支入口處可見(jiàn)少量斑塊形成。

圖1 各組動(dòng)物胸主動(dòng)脈內(nèi)膜肉眼觀

2 AS斑塊HE染色 見(jiàn)圖2。正常對(duì)照組WHHL兔動(dòng)脈內(nèi)膜結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮下無(wú)脂質(zhì)沉積或斑塊形成。高膽固醇飲食組WHHL兔主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞明顯減少，內(nèi)膜顯著增厚，內(nèi)膜下的脂質(zhì)沉積明顯，脂質(zhì)斑塊及纖維帽形成，纖維帽下可見(jiàn)大量壞死崩解物質(zhì)，斑塊底部少量肉芽組織，少量淋巴細(xì)胞及泡沫細(xì)胞，血管平滑肌排列紊亂，中膜因斑塊壓迫、平滑肌細(xì)胞萎縮，彈力纖維破壞變薄。高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組WHHL兔主動(dòng)脈板塊表面大量平滑肌細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成的纖維帽，其下可見(jiàn)數(shù)量不等的泡沫細(xì)胞及炎細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞輕度減少．內(nèi)膜增厚，內(nèi)膜下有脂質(zhì)沉積，可見(jiàn)血管平滑肌細(xì)胞增生，排列較規(guī)整，核略腫脹，彈力纖維、膠原纖維輕度增生。

圖2 各組動(dòng)物動(dòng)脈壁及AS斑塊HE染色（×100）

3 AS斑塊Masson染色 見(jiàn)圖3。正常對(duì)照組WHHL兔主動(dòng)脈硬化為0級(jí)，高膽固醇飲食組WHHL兔主動(dòng)脈硬化4級(jí)以上，高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組WHHL兔主動(dòng)脈硬化3～4級(jí)。

圖3 動(dòng)脈壁及AS斑塊Masson染色（×100）

4 各組內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜／中膜厚度比比較 見(jiàn)附表。高膽固醇飲食組、高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組WHHL兔內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜／中膜厚度比均高于正常對(duì)照組（P＜0．01）；高膽固醇飲食組 WHHL兔內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜／中膜厚度比高于高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組 WHHL兔（P＜0．01）。

附表 各組內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜／中膜厚度比比較（±s）

附表 各組內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜／中膜厚度比比較（±s）

注：★與正常對(duì)照組比較，P＜0．05；☆與高膽固醇飲食＋丹參多酚酸鹽組比較，P＜0．05

丹參多酚酸鹽組內(nèi)膜厚度（μm） 0．00±0．00 76．83±11．42★☆ 59．20±11．28項(xiàng) 目 正常對(duì)照組 高脂飲食組 高膽固醇飲食＋★內(nèi)膜／中膜厚度比（%）0．00±0．00 116．28±12．54★☆ 53．35±4．83★

討 論

動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展屬于多重危險(xiǎn)因素導(dǎo)致的綜合臨床表現(xiàn)，疾病發(fā)生過(guò)程即是血管結(jié)構(gòu)和功能的損傷與修復(fù)的過(guò)程。最早表現(xiàn)為內(nèi)皮功能障礙以及由內(nèi)皮功能障礙所導(dǎo)致的一系列所謂的生物炎癥性瀑布反應(yīng)，最終導(dǎo)致斑塊的形成、破裂、鈣化、出血及血栓形成等。丹參多酚酸鹽是用中藥丹參提取的有效活性成分制成的一種凍干粉針劑，主要成分為丹參乙酸鎂。隨著對(duì)其化學(xué)成分及作用機(jī)制的深入研究，發(fā)現(xiàn)注射用丹參多酚酸鹽是通過(guò)多個(gè)機(jī)制、多種途徑來(lái)產(chǎn)生對(duì)抗冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的。相關(guān)研究提示：丹參多酚酸鹽具有改善血液循環(huán)、抗菌、抗炎、抗凝血、抗血栓形成、抗氧化、調(diào)血脂等作用［2，3］。鄭建文等研究發(fā)現(xiàn)：丹參多酚酸鹽具有較強(qiáng)的清除自由基的作用及抑制血小板聚集具和抑制血栓烷A2合成的作用，從而對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展具有抑制作用［4］。此外，丹參多酚酸鹽可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移，促進(jìn)血管生成，具有活血化瘀通脈的作用，對(duì)心血管系統(tǒng)有良好的保護(hù)作用［5］。

本研究以遺傳性高脂血癥兔為研究對(duì)象，建立動(dòng)脈粥樣硬化模型后給予丹參多酚酸鹽干預(yù)治療，研究顯示：丹參多酚酸鹽可在一定程度上減輕主動(dòng)脈硬化程度，這為中藥用于動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的治療提供了新的思路，有望成為治療心血管疾病的新一代藥物。

［1］ Ho JH，Hong CY．Salvianolic acids：small compounds with multiple mechanisms for cardiovascular protection［J］．J Bio med Sci，2011，18（1）：30-34．

［2］ 葉 勇．丹參有效成分分離的研究進(jìn)展［J］．藥品評(píng)價(jià)，2005，2（2）：146-149．

［3］ 談世進(jìn)，郭慧峰，陸 燕．丹參多酚酸鹽對(duì)老年不穩(wěn)定型心絞痛患者內(nèi)皮功能的影響［J］．實(shí)用老年醫(yī)學(xué)，2009，23（2）：87-89．

［4］ 鄭建文．注射用丹參多酚酸鹽治療冠心病45例［J］．中西醫(yī)結(jié)合心腦血管雜志，2006，8（4）：1039-1040．

［5］ 吳燕燕，孫 煜，王 易．丹參多酚酸鹽活血化瘀作用的多元化藥理作用［J］．中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2010，27（11）：975-979．