胃癌組織中PIM—3的異常表達及臨床意義

劉彩霞++康世榮

[摘要] 目的 研究并分析胃癌組織中PIM-3的異常表達及其臨床意義。 方法 選擇2013年6月～2014年2月于內蒙古醫科大學附屬醫院行胃癌組織根治性切除的患者50例為研究對象，采用免疫組織化學法（SP法）分別測定PIM-3在50例胃癌組織和及其中25例患者的癌旁組織中的表達，分析PIM-3與性別、年齡、腫瘤大小等有關參數的相關性。 結果 癌旁組織中PIM-3的表達陽性率（16%）顯著低于胃癌組織（90%）；PIM-3的表達與胃癌組織中分化程度、浸潤程度、淋巴轉移和靜脈轉移密切相關（P < 0.05），而與性別、年齡、腫瘤直徑關系不大（P > 0.05）。 結論 PIM-3參與胃癌組織細胞的分化、浸潤和轉移，促進腫瘤惡化和癌癥發展。

[關鍵詞] 胃癌組織；PIM-3；異常表達

[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）11（c）-0025-04

The abnormal expression and clinical significance of PIM-3 in gastric cancer tissue

LIU Caixia1 KANG Shirong2

1.Department of Tumor， the Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University， Inner Mongolia Autonomous Region， Huhhot 010059， China； 2.Department of Chest， the Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University， Inner Mongolia Autonomous Region， Huhhot 010059， China

[Abstract] Objective To research research and analyze the abnormal expression and clinical significance of PIM-3 in gastric cancer tissue. Methods 50 cases of patients with gastric cancer from June 2013 to February 2014 in the Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University were selected as study objects. The expression of PIM-3 in the gastric cancer patients and 25 cases of normal tissues adjacent to the 50 cases of gastric cancer tissues pIM - 3 were detected by immunohistochemical method （SP method）， the correlation between PIM-3 and related parameters such as sex， age， tumor size were analyzed（SP）. Results The PIM-3 expression in normal tissue were 16%， which was significantly lower than that of gastric cancer tissues （90%）. The expression of PIM-3 in gastric cancer tissue was closely related to the differentiation degree， infiltration degree， lymph node metastasis and venous metastasis （P < 0.05）， and had no correlation with sex， age and diameter of tumor （P > 0.05）. Conclusion The PIM-3 plays a role in the tumor in differentiation， invasion and metastasis of gastric cancer tissues and cells， and promotes the development of tumor progression and cancer.

[Key words] Gastric cancer tissue； PIM-3； Abnormal expression

胃腸道癌是最常見和最主要的惡性腫瘤，嚴重威脅人類健康。而胃癌是世界范圍內最常見的惡性腫瘤之一，占我國消化道腫瘤的第1位，故研究胃癌的發病機制和解決辦法對世界而言有著舉足輕重的意義。由于胃癌發病因素多樣，且具有明顯的地域性，其預后與病理分期、部位、組織類型、生物學行為以及治療措施密切相關，為了提出針對全人類的胃癌治療方案，著重于基因的研究是最佳選擇。胃癌的發展是在多種因素的作用下發展而成的，正常情況下，胃黏膜細胞的增殖與凋亡保持動態平衡，該平衡是有賴于抑癌基因和癌基因的共同調節下的平衡，一旦平衡被打破，胃黏膜上皮細胞過度增殖，則可能逐漸發展為胃癌，尤其是近年來發現的幽門螺旋桿菌特別是高毒性的幽門螺旋桿菌導致的胃黏膜損傷，由慢性胃炎、腸上皮化生、不典型增生到典型胃癌。據研究，PIM激酶是一個與哺乳動物蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶密切相關的家族，其能使促凋亡分子Bad發生磷酸化而失活，同時使抗凋亡家族Bcl-XL、Bcl-2的表達增加，導致細胞惡性增殖[1-2]。PIM家族有3個成員，PIM-1、PIM-2和PIM-3，目前PIM-3在腫瘤發生中的研究主要集中在尤文肉瘤、肝癌、胰腺癌、結腸癌及胃癌等[3-5]。本研究通過免疫組織化學SP法，分別測定PIM-3在50例胃癌組織和25例癌旁組織標本中的表達，分析其與有關臨床病理參數的相關性。為今后胃癌的臨床治療開辟新思路?，F將分析方法和結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年6月～2014年2月于內蒙古醫科大學附屬醫院（以下簡稱“我院”）行胃癌組織根治性切除的手術患者50例為研究對象，其中低分化胃癌25例，年齡38～72歲，平均（54.2±14.1）歲，男16例，女9例；高-中分化患者25例，年齡42～70歲，平均（52.8±15.1）歲，男15例，女10例。排除曾經接受放療或者化療等方面治療的患者。隨機在50例胃癌組織周圍采集25例患者的癌旁組織，其中男15例，女10例。癌旁常組織取自患者癌組織范圍2.5 cm以外的區域，經切片病理染色分析證實均無癌變細胞，患者的個人基本資料和腫瘤相關參數來源于我院病案室。本研究經我院倫理委員會通過，患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

主要試劑為羊抗人PIM-3多克隆抗體（美國Santa Cruz公司）， 濃度為1∶200。①制作切片：包埋組織每份制作切片1和切片2，每片厚度約4 μm。②切片1處理：常規脫蠟至水后緩沖液沖洗3 min×2 次，Hydrogen Peroxide Block中孵育12 min，緩沖液洗5 min×2次，Ultra V Block背景染色，緩沖液洗5 min×2 次，滴加一抗工作液 37℃孵育1.5 h，緩沖液洗5 min×2次，Primary Antibody Enhancer室溫下孵育20 min，緩沖液洗5 min×2次，加辣根過氧化物酶聚合物室溫下孵育30 min，緩沖液洗5 min×2次，1 mL 二氨基聯苯胺（DAB）Plus Substrate中滴加 1～2滴DAB Plus Chromogen混勻后滴加到切片上，孵育10 min，自來水充分沖洗，復染，脫水，透明，封片。③切片2處理：石蠟切片脫蠟至水，3%H2O2室溫孵育5 min，蒸餾水沖洗，磷酸鹽緩沖液（PBS）浸泡5 min×2次，5%～10%正常山羊血清（PBS稀釋）封閉，室溫孵育10 min，傾去血清，滴加一抗工作液，4℃過夜；PBS沖洗，5 min×3 次；生物素標記二抗工作液，37℃孵育15 min；PBS 沖洗，5 min×3 次；滴加適量的辣根酶或堿性磷酸酶標記的鏈霉卵白素工作液，37 ℃孵育15 min；PBS沖洗，5 min ×3次；DAB顯色劑顯色3～15 min；自來水充分沖洗，復染，脫水，透明，封片。④鏡檢：每張切片選取具有代表性的5個高倍視野，計數1000個細胞中的陽性細胞數。所有標本的組織病理學診斷均由兩名病理學專家采用盲法獨立檢測取平均值，高倍鏡下隨機觀察至少4個視野復核證實。

1.3 鏡檢結果評定標準

陽性細胞判斷標準[6]：PIM-3陽性定位于細胞質，細胞質染成棕黃色為陽性細胞。依據《全國免疫組織化學技術及診斷標準化專題研討會》標準[7]，按陽性細胞所占比例進行分級：<25%為陰性（-），25%～50%為弱陽性（+），>50%～75%為陽性（++），>75%為強陽性（+++）。以弱陽性、陽性、強陽性來統計陰性率。

1.4 觀察指標

測定PIM-3在50例胃癌組織和及其中25例患者的癌旁組織中的表達，分析PIM-3與性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、浸潤程度、淋巴轉移、靜脈轉移的相關性。

1.5 統計學方法

采用SPSS 21.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用率表示，組間比較采用秩和檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌組織和癌旁組織標本中PIM-3的表達

根據鏡檢結果評定標準，兩組標本的鏡檢結果顯示：胃癌組織中PIM-3陽性率遠高于癌旁組織，差異有高度統計學意義（Z=5.847，P = 0.000）。見表1。

表1 胃癌組織和癌旁組織標本中PIM-3的表達（例）

3 討論

胃癌的發病率和病死率在世界范圍內居第2位，具有發病率高達30/10萬～70/10萬，復發轉移率高達50%，病死率高達30/10萬的特點，同時早診率低于10%，根治切除率低于50%，5年生存率≤50%[8]。所以，早發現、早診斷、早治療顯得尤為重要，但是目前還沒有發現胃癌的特異性標志物，這一難題的解決顯得十分迫切。隨著分子生物學進展，原癌基因的研究逐漸深入，原癌基因PIM-1、PIM-2均屬PIM家族的成員，PIM家族激酶能使在細胞生長通路中起關鍵作用的蛋白質分子殘基磷酸化，促進細胞增殖和生存，PIM-3引起惡性腫瘤發生的機制主要是使促凋亡分子Bad發生磷酸化而失活，同時使抗凋亡家族Bcl-2的表達增加，從而導致腫瘤細胞的失控生長，Bad的促凋亡活性由其蛋白質分子內的殘基磷酸化來調控的，非磷酸化的Bad可以結合Bcl-X也可以包括Bcl-2并使兩者失活，通過與14-3-3蛋白分離，從線粒體易位到胞漿，從而喪失了與Bcl-X、Bcl-2結合的能力，從Bad游離出來后的Bcl-X、Bcl-2則保持了線粒體膜的潛能，能阻止細胞凋亡[10-15]。PIM-3最初以大鼠細胞系PC12去極化誘導的基因首先報道，它在哺乳動物細胞中與PIM-1的序列具有同源性，在功能上與前二者相似，有學者發現PIM-3 mRNA在人的心臟、骨骼肌、大腦、脾臟、腎臟中存在，在心肌和骨骼肌中呈高表達，相反，在結腸、胸腺、肝臟等組織中不表達，還證實了PIM-3蛋白在人肝細胞的癌旁組織，一部分癌組織及再生的膽管細胞中表達，且在癌旁組織中的表達較癌組織中高[16-18]。從人類開始研究腫瘤開始，逐漸發現癌基因的異常激活和抑癌基因失活，以及環境、生活方式、情緒等多種因素都對癌癥的發生都有影響。從1997年人們發現PIM基因來，對該基因的研究逐漸深入。研究人員已發現PIM激酶家族能使促凋亡分子Bad發生磷酸化而失活，同時使抗凋亡家族Bcl-XL、Bcl-2的表達增加，從而導致腫瘤細胞的失控生長[19-21]。

本研究通過測定PIM-3在50例胃癌組織和25例胃癌癌旁組織標本中的表達，分析其與有關臨床病理參數的相關性發現：癌旁組織中PIM-3的表達陽性率為16%，顯著低于胃癌組織（90%），與Zheng等[22]的研究結果一致，表明PIM-3在胃癌發生機制中有著重要的決定性作用；PIM-3的表達與胃癌組織中分化程度、浸潤程度、淋巴轉移和靜脈轉移密切相關（P < 0.05），而與性別、年齡、腫瘤直徑關系不大（P > 0.05），這與胡志方等[6]的研究結果一致，說明PIM-3與胃癌的生物學行為有一定相關性，其參與胃癌組織細胞的分化、浸潤和轉移，促進腫瘤惡化和癌癥發展。

綜上所述，癌旁組織中不表達PIM-3，但在癌組織里的表達明顯增高。PIM-3在癌組織中的高表達可能是胃癌某一階段的標志物，也可能是胃癌啟動的一個環節，也可能是影響預后的重要因素。因此本研究認為，PIM-3是一種較為理想的胃癌標志物，而在分化較高的胃癌組織中，其表達明顯高于分化程度低的胃癌組織，從PIM-3蛋白和一些病理資料的相關性分析結果來看，PIM-3蛋白的表達與患者年齡、性別、腫瘤大小、浸潤程度無明顯相關性，而與腫瘤的淋巴結轉移、靜脈轉移有明顯相關性，說明PIM-3與胃癌的生物學行為有一定的相關性，其表達是反映胃癌生物學進展程度和腫瘤預后的標志。由于條件所限，未能與胃腺瘤等良性疾病進行對照研究，還需要進一步擴大樣本含量，并對胃黏膜異型增生、胃腺瘤進行對照研究，更需要長期隨訪結合分期來明確PIM-3基因與生存的關系，從而帶來更多的診治思路及思考。

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（收稿日期：2014-07-28 本文編輯：任 念）

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（收稿日期：2014-07-28 本文編輯：任 念）