液體飼料防霉劑對飼料防霉效果的研究

文│王姣姣 赫彩霞 高文惠（河北科技大學生物科學與工程學院）

我國是一個飼料生產消耗大國，然而在飼料的生產、加工、運輸及貯存過程中，飼料霉變的現象屢見不鮮，霉菌毒素對飼料不同程度的污染，造成了巨大的經濟損失，已成為飼料業和畜牧業生產中不可忽視的問題。隨著飼料工業的快速發展，飼料防霉劑的應用日益廣泛，對飼料行業的貢獻越來越大，品種也日益增多，因此對飼料防霉劑防霉效果的檢驗成為關鍵。

飼料防霉劑防霉效果的檢測方法有杯碟法、最低抑菌濃度（MIC）法、飼料強化防霉（破壞性試驗）、飼料常規試驗、二氧化碳稀釋法、溫度測定法、平皿記數法等。本試驗將某公司生產的防霉劑添加到飼料中使用，通過破壞性實驗法和平皿計數法研究其對飼料的防霉效果。

一、材料與方法

培養基。硝酸鈉2克、磷酸二氫鉀1克、硫酸鎂0.5克、氯化鉀0.5克、硫酸亞鐵0.01克、氯化鈉60克、蔗糖30克、瓊脂20克、蒸餾水1000毫升。上述試劑中瓊脂為生化試劑，其余為分析純試劑。

（1）破壞性試驗。提高飼料含水量為12%、14%、16%，并將恒溫培養箱中的濕度調節為85%，溫度28℃的條件下儲存飼料。

（2）平皿計數法。將加入不同比例（0、0.3‰、0.5‰、0.7‰）防霉劑的飼料在一定條件下儲存，每隔7天進行取樣，用稀釋液稀釋、振蕩后將上層液吸取1毫升，與培養基混勻，培養后進行計數。

（3）試驗分組與編號。在飼料中添加不同量的防霉劑，同時按照試驗要求調節飼料中的水分含量，并對樣品進行編號，具體方案見表1。

表1 樣品編號

二、操作步驟

1.培養基與稀釋液的配制。用蒸餾水加溫溶解培養基成分，分裝后121℃高壓滅菌30分鐘。必要時，可酌量增加瓊脂。稱取分析純氯化鈉8.5克，用蒸餾水溶解，定容1000毫升，制成稀釋液。按需要量分裝在試管和三角瓶中，121℃高壓滅菌30分鐘。其他玻璃器具和槍頭在同樣條件下滅菌備用。

2.感官檢測。觀察飼料的色澤，聞飼料的香氣，并挑起少量飼料觀察形態。

3.取樣檢測。

（1）將飼料編號后在實驗條件下儲存，每隔7天進行取樣。以無菌操作稱取有霉菌的飼料25克，放入含有225毫升滅菌生理鹽水的250毫升三角瓶中，振蕩30分鐘，即為1∶10稀釋液。

（2）用移液槍取上述稀釋液1毫升，注入盛有9毫升稀釋液的試管中，充分振蕩，使霉菌孢子分散開，完成100倍稀釋。用相同的方法完成1000倍稀釋。

（3）將以上稀釋液用移液槍各取1毫升注入平皿中，倒入適量45℃以下的培養基，充分混勻，待其凝固后，倒置放入恒溫培養箱中進行培養，3天后開始觀察，培養觀察一周。

4.水分含量的測定。稱取2.000克的飼料放入稱量瓶，在103±2℃的干燥箱中烘干3小時，取出在干燥器中冷卻至室溫后稱量，再放入干燥箱中干燥30分鐘，取出后冷卻稱量，兩次稱量值相差小于0.002克視為恒重，計算水分含量。

5.數據分析和顯著性檢驗。記錄實驗過程中的數據，用OriginPro8軟件根據數據作圖，觀察儲存期內霉菌數的變化以及飼料水分含量的變化趨勢和規律。將實驗結果用SPSS Statistics軟件進行差異顯著性檢驗。

三、結果與分析

1.感官檢驗。記錄感官檢驗的結果如下。

（1）儲存7天后取出，1～12號樣品在色澤、氣味和組織方面無明顯變化。

（2）儲存14天后取出，1～2號及4～12號樣品色澤變淺，氣味減弱，組織方面無明顯變化，3號樣品色澤明顯變暗，少量結塊。

（3）儲存21天后，1～2號少量結塊，3號長出肉眼可見的少量霉菌，6～7號、9號以及12號微量結塊。其他樣品組織方面無明顯變化，色澤變暗，氣味減弱，無異味。

（4）儲存28天后，1～2號、5～6號結塊，3、6、9、12號大量結塊且3號長出大量霉菌，4號、7號、8號、10號無明顯變化。

（5）儲存35天后，1～9號變質且3號、6號長出大量霉菌，11-12號結塊。10號輕微結塊。

表2 各組樣品平均霉菌數

由以上結果可知，在高溫高濕的儲存環境中，飼料的色澤首先會發生變化，其次氣味減弱，隨著時間的推移會少量結塊，此時，飼料已經變質，商品及食用價值消失。繼續儲存，飼料表面會長出肉眼可見的霉菌，發生腐敗。

2.霉菌檢測數。儲存之前用平皿計數法測量飼料原樣品的霉菌數，之后每隔7天測量一次，隨著天數的增加，飼料中霉菌數逐漸增加。根據檢測結果可作圖，對水分含量相同，防霉劑添加量不同，以及防霉劑添加量相同，水分含量不同的飼料進行直觀的比較可以看出，加入防霉劑0～7天之間，霉菌數有所下降。由此可見，此種防霉劑具有一定的殺菌作用；3號和6號樣品在14到21天中霉菌數增長速度加快，其他樣品在21到35天時霉菌數增長速度也明顯加快，因此，在儲存期的后期，防霉劑的防霉作用不明顯；3號和6號樣品水分含量相同，防霉劑添加量不同，但最終霉菌數相似，因此，當飼料的水分含量在16%時，防霉劑作用不明顯，此時應提高防霉劑的添加量，以達到防霉效果。

◎圖1 飼料儲存試驗霉菌檢測數

3.水分含量。試驗中測量霉菌數的同時，對飼料的水分含量也進行了測量，并記錄結果。根據水分含量的測定結果可以作圖對不同的樣品作出直觀的分析。由圖2可知，飼料儲存過程中，水分含量一般先上升再下降然后第二次上升。綜合感官檢驗結果，在水分含量第二次上升時一般會飼料發生霉變；加入防霉劑的飼料水分含量下降較慢，可見，此種防霉劑具有一定的保水作用。

◎圖2 飼料儲存過程中水分含量的變化

4.防霉效果差異顯著性檢驗。根據試驗過程中記錄的數據，計算出未添加飼料防霉劑但水分含量不同的各組樣品在儲存期內的平均霉菌數，見表2，以此作為差異顯著性檢驗中與其水分含量相同，但添加了不同量防霉劑樣品的檢驗值。

將上表中的平均霉菌數作為與之相對應的樣品T檢驗的檢驗值，得出各樣品之間差異顯著性結果，見表3。

從上表可以看出，在和1號樣品比較的過程中，只有10號樣品得出的sig值小于0.05，具有顯著性差異；在和2號樣品的比較過程中，5號、8號、11號樣品的sig值均小于0.05，具有顯著性差異；在和3號樣品比較的過程中，只有12號樣品的sig值小于0.05，具有顯著性差異。由此可知，在飼料水分含量為12%和16%時，防霉劑的少量添加所起到的防霉作用不明顯，只有在加大添加量時才會有顯著地防霉作用；在飼料水分含量為14%時，即使少量添加防霉劑，防霉效果依然明顯。因此，飼料本身的水分含量對防霉劑的防霉效果有影響。

四、討論與結論

1.試驗方法的選擇。破壞性試驗旨在提高飼料水分含量，惡化環境（高溫、高濕）從而促使飼料盡快發霉。平皿記數法根據霉菌生理特性和防霉劑防霉機理，選擇適宜霉菌生長而不適宜細菌生長的培養基，采用平皿記數法，在一定菌液中加入一定量的防霉劑，培養后測定霉菌菌落總數、菌落總數越少，表明其防霉抑菌效果越佳。

本試驗綜合以上兩種試驗方法，將培養箱的溫度調為霉菌的最適生長溫度，即25～28℃，將濕度調為85%，在盡量縮短試驗時間的基礎上保證了試驗結果的準確性。

2.結論。飼料本身的水分含量對防霉劑的防霉效果有一定的影響，當水分含量較高時，防霉劑的防霉效果不明顯。試驗結果表明，此種防霉劑具有一定的殺菌作用，同時具有一定的保水作用。綜合感官檢驗結果，在水分含量第二次上升時飼料發生霉變，根據這個規律可以通過測量飼料的水分含量來預測飼料發霉變質的時間和階段。

表3 差異顯著性檢驗