慢性乙型肝炎患者細胞免疫功能對抗病毒療效的影響

西安交通大學第一附屬醫院傳染科 （西安710061） 沙小瑩 趙英仁

為了觀察HBeAg陽性慢性乙型肝炎（CHB）患者細胞免疫功能對抗病毒療效的影響，我們自2010年2月至2012年2月從我院門診及住院患者中選擇60例HBeAg陽性的男性慢性乙型肝炎患者，按HBeAg水平高低分為兩組，分別檢測兩組患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋調節性T細胞（Treg細胞）表達率及外周血T淋巴細胞亞群并對兩組患者同時應用阿德福韋酯聯合苦參素膠囊治療，現將觀察結果報告如下

對象與方法

1 研究對象 根據2010年版的《慢性乙型肝炎防治指南》中慢性乙型肝炎的診斷標準，選擇HBeAg陽性的男性慢性乙型肝炎患者，入選患者年齡18－60歲，（平均年齡38．8歲）入選患者血清 HBsAg、HBeAg、抗－HBC持續陽性6個月以上，HBeAg測定值1300－50S／CO，HBV DNA≥1×105拷貝／ml，丙氨酸轉氨酶（ALT）≥2ULN，血清總膽紅素＜34umol／L，排除肝硬化或重疊其它肝炎病毒感染者及伴有其它嚴重軀體疾病者。入選患者按HBeAg測定值分為A、B兩組，A組30例 HBeAg測定值600－50S／CO （均值323±186），B組30例 HBeAg測定值1300－600S／CO（均值896±258），兩組均值比較P＜0．01。A、B兩組患者平均年齡，平均病程，均值比較均無統計學差異，兩組患者均經過短期住院治療之后出院門診治療。

2 方 法 A、B兩組病人均口服阿德福韋酯膠囊10mg／次，每日1次（正大天晴公司生產），口服苦參素膠囊200mg／次，1日3次（正大天晴公司生產）。療程均為24個月。治療開始后兩組患者均每3個月檢測1次乙肝五項定量、HBV DNA、肝功能、腎功能，比較兩組患者治療24個月時HBeAg轉陰率、HBeAg血清轉換率、HBV DNA轉陰率。肝功能、腎功能檢測用日本產全自動生化分析儀、乙肝五項定量檢測用電化學發光法，試劑由雅培公司提供），HBVDNA（實時熒光PCR法，試劑由上海復星醫學科技發展有限公司提供）

流式細胞儀檢測：入組患者治療前均檢測外周血T淋巴細胞亞群 CD3＋CD4＋數量、CD3＋CD8＋數量、CD4＋／CD8＋、CD4＋CD 25＋Foxp3＋調節性 T細胞表達率。T淋巴細胞亞群CD4、CD8、CD3標記按常規方法進行，CD4＋CD25＋Foxp3＋調節性T細胞標記按試劑盒說明書進行操作，上機前將樣本充分混勻。檢測儀器及試劑：FACSCCalibur流式細胞儀為美國BD公司產品；CD4、CD8、CD3熒光標記單克隆抗體為美國BD公司產品。余試劑均購自美國eBioscience公司。

3 統計學處理 采用SPSS18．0軟件，計量資料采用均數±標準差進行統計描述。符合方差齊性的兩樣本均數比較采用獨立樣本t檢驗；計數資料采用χ2檢驗；P＜0．05表示差異有統計學意義。

結 果

1 治療前兩組患者外周血T淋巴細胞亞群檢測結果 見表1。

2 治療24個月時兩組患者血清乙肝病毒標記物指標變化結果 見表2。

表1 治療前兩組患者外周血T淋巴細胞亞群檢測結果

表2 兩組患者血清乙肝病毒標記物指標變化

討 論

慢性乙型肝炎患者機體存在不同程度的細胞免疫缺陷［1］，固有免疫的NK細胞、NKT細胞、抗原提呈細胞及獲得性免疫的乙肝病毒（HBV）特異輔助性T細胞、特異殺傷性T細胞數量嚴重不足，調節性T細胞數量異常增高，致使患者機體清除HBV的免疫反應受到明顯抑制。目前研究認為HBeAg在誘導CHB患者機體產生免疫耐受、形成HBV持續感染中發揮重要作用［2］。研究顯示HBeAg陽性的慢性乙型肝炎患者的外周血中調節性T細胞（Treg細胞）的比例明顯高于HBeAg陰性的患者，體外實驗的證據表明慢性HBV感染者外周血Treg細胞可以抑制CD4＋T細胞和CD8＋T細胞的活化，抑制HBV特異性細胞免疫應答［3，4］。研究還顯示Treg細胞可以直接抑制NKT細胞的功能，也可通過轉化生長因子（TGF）被他等細胞因子抑制NKT和NK細胞的功能［5］。Sakaguchi已證明CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg細胞是一類在抑制自身免疫反應中起主要作用的Treg細胞，被認為是誘導自身耐受的關鍵，而且這種抑制作用有劑量依賴性。HBeAg可直接通過干擾抗原提呈細胞分泌炎癥因子白細胞介子－12（IL－12）和IL－6，干擾抗原識別誘導調節性T細胞的分化，而調節性T細胞可以通過細胞－細胞直接接觸及釋放LI－10和TGFβ等抑制因子抑制HBV抗原特異殺傷性T淋巴細胞的增殖和活化，HBeAg陽性的CHB患者外周血中幾乎檢測不到HBV特異性殺傷性T細胞。HBV特異性T淋巴細胞的功能低下是造成HBV感染慢性化的主要原因。HBeAg導致Th1／Th2失衡，HBeAg刺激Th2細胞因子分泌增加，以及通過Fas－FasL介導的機制清除Th1細胞，引起Th1／Th2失衡，表現為CD4＋／CD8＋細胞比例下降，HBV特異殺傷性T淋巴細胞／抑制性T細胞比例明顯下降，明顯降低了清除HBV的細胞免疫反應，形成持續的HBV攜帶或慢性乙型肝炎狀態。Milich等分別用HBeAg和HBcAg免疫小鼠發現HBcAg免疫后的小鼠表現為Th1反應類型，HBeAg免疫后的小鼠表現為Th2反應類型，研究證實HBeAg血清濃度在10ng／ml時即可引發T淋巴細胞耐受。故患者血清HBeAg水平的高低與患者機體清除HBV的細胞免疫功能高低有關。對各種抗乙肝病毒治療藥物的病毒學應答和e抗原血清學轉換有良好的預測價值。

本組臨床觀察結果：治療24個月時，A組HBeAg血清轉陰率50．00%，B組20．00%，兩組比較P＜0．01；A組 HBeAg血清轉換率43．33%，B組16．66%，兩組比較P＜0．01；A組 HBV DNA轉陰率93．33%，B組HBV DNA轉陰率73．33%，兩組轉陰率比較P＜0．05；HBeAg測定值較低的A組患者的CD4＋／CD8＋比值1．32±0．51，明顯高于 HBeAg測定值較高的B組0．91±0．36，兩組比值比較P＜0．05；A 組CHB患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋調節性T細胞表達率4．21±1．26%，B組6．78±1．83%，A、B兩組Treg細胞表達率比較，P＜0．05。進一步證實患者血清HBeAg水平的較低組患者機體清除HBV的細胞免疫功能好于HBeAg水平的較高組患者。更易取的抗病毒治療的滿意效果。

［1］ 張定風．乙型肝炎的免疫發病機制及治療靶位的探討［J］．中華肝臟病雜志．2012，20（1）：71－74．

［2］ Ferrari C，Missale G，Boni C，et al．Immunopathogenesis of hepatitis B．［J］．Hepatology，2003，39（1）：36－42．

［3］ Stoop JN，Van－DerMolen RG，Baan CCet al．Regulatory T cells contribute to the impaired immune response in patients with chronic hepatitis B virus infection ［J］．Hepatology，2005，41：771－778．

［4］ Xu D P，Fu J L，Jin L et al．Circulating and liver resident CD4＋CD25＋regulatory T cells actively influence the antiviral immune response and disease progression in patients with hepatitis B ［J］．J Immunol，2006，177（1）：739－747．

［5］ 劉 新，婁金麗，陳 煜，等．肝纖維化小鼠調節性T淋巴細胞的變化及意義 ［J］．中華肝臟病雜志，2014，22（4）：277－280．