GRIM-19蛋白在乳腺癌組織中的表達

翟娜娜，黃器偉，陳奎生，劉軍偉，李喜強

(1.黃河科技學院醫學院，河南 鄭州450063;2.鄭州大學第一附屬醫院，河南 鄭州450052)

干擾素/維甲酸聯合應用誘導的細胞凋亡相關基因19(gene associated with retinoid-interferon-induced mortality-19，GRIM-19)是GRIMs 家族重要成員之一，是一種由干擾素聯合全反式維甲酸誘導表達的新的細胞凋亡調節基因［1］。GRIM-19 的正常表達可以維持細胞的正常生活周期，使細胞從衰老進入凋亡，低表達則使某些細胞不能正常地進入細胞生活周期而凋亡，進而引發腫瘤。本文采用免疫組化S-P 法檢測GRIM-19 蛋白在乳腺癌組織中的表達，并探討GRIM-19 蛋白與乳腺癌臨床病理特征的關系。

1 材料與方法

1.1 標本來源 選擇2012年1月至2013年1月鄭州大學第一附屬醫院乳腺外科手術切除乳腺癌標本50 例及其腫瘤邊緣5 cm 以上的正常乳腺組織50 例。患者年齡在23 ～82 歲，其中＜50 歲23 例，≥50 歲27例;無淋巴結轉移29 例，有淋巴結轉移21 例;高分化11 例，中分化22 例，低分化17 例;TNM 分期:I、Ⅱ期30 例，Ⅲ、Ⅳ期共20 例。

1.2 試劑 鼠抗人GRIM-19 多克隆抗體、DAB 顯色試劑盒、S-P 試劑盒購自北京中杉金橋生物技術公司。

1.3 檢驗方法 蛋白檢測采用免疫組化S-P 法進行染色，按試劑盒說明書進行。用PBS 代替一抗作為陰性對照，用已知的乳腺癌陽性組織切片作為陽性對照。

1.4 結果判斷 GRIM-19 蛋白在細胞質或細胞核著色。參考文獻［2］的免疫組化結果判斷標準:在顯微鏡高倍視野下，隨機觀察5 個視野，記錄染色陽性的細胞在腫瘤細胞中的百分率:＞50%，3 分;＞25% ～50%，2 分;5% ～25%，1 分;＜5%，0 分。同時觀察顯色程度:棕褐色，3 分;棕黃色，2 分;淺黃色，l 分;無顯色，0 分。2 項評分相乘，＞6 分為強陽性(+++)，4 ～6分為陽性(++)，2 ～3 分為弱陽性(+)，三者均記為陽性;兩者乘積≤1 分為免疫組化反應陰性。

1.5 統計學處理 采用SPSS 19.0 進行統計學分析，率的比較用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 GRIM-19 蛋白在不同乳腺組織中的表達GRIM-19 蛋白在乳腺癌組織中的陽性表達率為26.00%(13/50)，低于正常乳腺組織中的84. 00%(42/50)，差異有統計學意義(P ＜0.05)。

2.2 GRIM-19 蛋白在乳腺癌組織中的表達與臨床病理特征的關系 見表1。

表1 GRIM-19 蛋白的表達與乳腺癌臨床病理特征的關系n(%)

3 討論

GRIM-19 是通過反義基因敲除的方法發現的一種細胞凋亡調節因子，由干擾素聯合維甲酸誘導表達。Huang 等［3］研究發現GRIM-19 主要定位于線粒體，可能在細胞核中微量表達。本課題發現GRIM-19 在細胞核和細胞漿中均有表達，但以細胞漿表達為主。在人體多種正常組織中都可以檢測到GRIM-19 蛋白的表達，并且存在顯著的組織差異性［1-4］。GRIM-19 是細胞凋亡通路上的一個環節，可能在細胞信號轉導途徑上發揮致凋亡效應，其正常表達能夠維持細胞正常的生活周期，而突變或低表達則導致細胞的變異及惡化。Gong 等［5］研究發現，直腸癌組織中GRIM-19 蛋白低表達，并與結腸癌臨床分期、分化程度相關，說明GRIM-19 與直腸癌的發生發展有關。在肺癌［6］、甲狀腺癌［7］、前列腺癌［8］、宮頸癌［9］等腫瘤相關研究也得到相似結果。

本文結果顯示，GRIM-19 蛋白在乳腺癌組織中的表達水平明顯低于正常乳腺組織，低分化乳腺癌組織中GRIM-19 蛋白表達明顯低于高分化組織，晚期乳腺癌患者明顯低于早期患者。提示GRIM-19 表達降低可能與乳癌的發生發展及惡性程度有關，GRIM-19 蛋白的低表達或缺失是導致乳腺癌發生的重要原因。

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［4］Chidambaram NV，Angell JE，Ling W，et al.Chromosomal localization of human GRIM-19，a novel IFN-beta and retinoic acid-activated regulator of cell death［J］.J Interferon Cytokine Res，2000，20(7):661 -665.

［5］Gong LB，Luo XL，Liu SY，et al. Correlations of GRIM-19 and its target gene product STAT3 to malignancy of human colorectal carcinoma［J］.Ai Zheng，2007，26(7):683 -687.

［6］周愛民，趙繼京，葉靜，等.GRIM-19 蛋白在非小細胞肺癌組織中的表達及其臨床意義［J］.癌癥，2009，28(4):431 -435.

［7］Kimura ET，Nikiforova MN，Zhu Z，et al.High prevalence of BRAF mutations in thyroid cancer:genetic evidence for constitutive activation of the RET/PTC-RAS-BRAF signaling pathway in papillary thyroid carcinoma［J］.Cancer Res，2003，63(7):1454 -1457.

［8］Gao AC，Lou W，Ichikawa T，et al.Suppression of the tumorigenicity of prostatic cancer cells by gene(s)located on human chromosome 19p13.1-13.2［J］.Prostate，1999，38(1):46 -54.

［9］Zhou Y，Li M，Wei Y，et al. Down-regulation of GRIM-19 expression is associated with hyperactivation of STAT3-induced gene expression and tumor growth in human cervical cancers［J］. J Interferon Cytokine Res，2009，29(10):695 -703.