姬松茸多糖對輻射損傷大鼠的抗氧化作用研究

王俊婷劉劍英藍蕾胡曉文

(1.青島大學醫學院中西醫結合中心，266011；2.濟南軍區青島第一療養院，266071)

隨著工業技術的發展，人們接觸輻射的機會越來越多，如電視、電腦的廣泛應用，從事輻照相關職業者，癌癥放射患者，醫學B超、CT等相關檢查都會受到輻射損害[1]，長期接觸會對人們的身體產生一定的損害作用。因此，關于輻射損傷的防護日益受到人們的重視，這就使得輻射危害以及輻射防護成為了近年來研究的一個熱點問題。

姬松茸又名巴西蘑菇，是一種珍貴的食藥用菌。其子實體深層發酵菌絲體及發酵液中含有多種生物活性物質，如多糖。國外報道姬松茸多糖具有很強的清除自由基、抗腫瘤、抗氧化、增強自身免疫力等多種生物學效應[2]。但迄今為止，尚缺乏對其抗輻射損傷的氧化損傷保護作用療效及研究報告。

1 材料與方法

1.1 原料及試劑

1.1.1 姬松茸多糖 西安森冉生物工程有限公司提供，多糖濃度為50%(批號：SR20140416)。

1.1.2 主要試劑 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)測定試劑盒，丙二醛(MDA)測定試劑盒，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)測定試劑盒，白細胞介素-2(IL-2)測定試劑盒，購買自青島渝邑祥科貿有限公司。

1.1.3 實驗動物 清潔級SD健康雄性大鼠40只，周齡6周，體質量(140±20)g，于實驗室適應性喂養一周。

1.1.4 主要儀器 紫外線分光光度儀、電子天平、TDL-40B高速離心機等。

1.2 輻射損傷大鼠模型的建立

1.2.1 實驗動物與分組 采用完全隨機分組的方法隨機分為正常對照組、模型對照組、姬松茸多糖高劑量組[200 mg/(kg·d)]、姬松茸多糖低劑量組[100 mg/(kg·d)]共4組，每組10只，分籠飼養，自然晝夜，節律光照，溫度(20±5)℃，相對濕度為40%～60%。

1.2.2 建立動物模型 所有大鼠適應性喂養一周后開始造模，給予直線加速器(美國瓦里安Warian-21EX)X射線輻射損傷，皮源距100 cm，劑量率100 cGy/min，全身輻射劑量為5.0 Gy(表1)。

表1 動物模型具體分組

1.3 樣品采集 輻射后灌胃飼養14 d后，末次給藥后24 h稱重，給予10%水合氯醛麻醉(0.3 mL/100 g)，待麻醉完全后腹主動脈取血2 mL，靜置20 min后離心血清(20 min 2 000～3 000 r/min)，仔細收集上清液，－20℃保存待測，測定指標為谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-2(IL-2)，具體操作方法見試劑盒說明書。

1.4 實驗數據處理 用SPSS 17.0軟件處理數據，對結果進行檢驗。

2 結果

2.1 姬松茸多糖對輻射損傷后大鼠GSH-PX和MDA的影響 與正常對照組相比，模型對照組GSH-PX含量下降，MDA含量升高，差異有統計學意義(P＜0.05)，而多糖對照組GSH-PX含量升高，MDA含量降低，差異有統計學意義(P＜0.05)；與模型對照組相比，多糖對照組GSH-PX含量升高，MDA含量降低，差異有統計學意義(P＜0.05)；當多糖劑量達到200 mg/(kg·d)時，血清中GSH-PX含量升高，MDA含量降低，差異有統計學意義(P＜0.05，表2)。

2.2 姬松茸多糖對輻射損傷模型TNF-α和IL-2的影響與正常對照組相比，模型對照組TNF-α、IL-2含量下降，差異有統計學意義(P＜0.05)，而多糖對照組TNF-α、IL-2含量升高，差異有統計學意義(P＜0.05)；與模型對照組相比，多糖對照組TNF-α、IL-2含量升高，差異有統計學意義(P＜0.05)；當多糖劑量達到200 mg/(kg·d)時，血清中TNF-α、IL-2含量升高，差異有統計學意義(P＜0.05，表3)。

表2 姬松茸多糖對輻射損傷后大鼠GSH-PX和MDA的影響

表3 姬松茸多糖對輻射損傷后大鼠TNF-α和IL-2的影響

3 討論

輻射作用于機體會產生大量的自由基，這些自由基成為傳遞輻射能的主要媒介，從而引發一系列的放射生物效應[3]。輻射不僅可以引起各種組織器官的氧化損傷，甚至誘發細胞癌變、突變的嚴重后果，還會對機體免疫系統造成損傷以及產生過量的自由基，使體內防御系統造成嚴重的破壞[4]。因此，研究利用天然植物中具有的天然活性成分，以提高機體抗輻射能力，預防和減輕輻射對人體的損害，具有重要而實用的價值。

正常組織受到射線照射后，由于射線與組織的相互作用，產生大量自由基，后者作用于生物膜引起膜的脂質過氧化，造成生物膜功能和代謝的改變，從而使輻射損傷進一步加重[5]。GSH-PX作為機體組織主要清除自由基的抗氧化酶，其活力的高低可間接反映機體清除自由基的能力。MDA是脂質過氧化的主要產物，是反映機體自由基水平和氧化應激水平的一項指標。兩組指標反映機體的抗氧化狀態，觀察這兩項指標，可反映機體脂質過氧化的程度及清除自由基而防御過氧化毒性的能力[6]。

腫瘤壞死因子(TNF-α)是細胞因子網絡中一個重要的多功能成員，其對多種組織器官產生生物學效應，使機體維持內部自穩，抵御各種致病因子必不可少的免疫調節因子，是由巨噬細胞產生的參與免疫和炎癥反應的主要調節因子[7]。IL-2又名T細胞生長因子，是由活化的CD4＋T細胞和CD8+T細胞產生的具有廣泛生物活性的細胞因子。IL-2是T細胞亞群的生長因子，其主要功能是促進T細胞的增殖，可以誘導細胞毒性T淋巴細胞產生和增殖，促進免疫球蛋白的產生和B細胞的生長，增強巨噬細胞抗原提呈、殺菌能力和細胞毒性等[8]。所以TNF-α和IL-2是調控免疫應答的重要因子，參與抗體反應、造血和腫瘤監視，在氧化損傷和抗腫瘤功能上有重要作用。

本實驗中給予大鼠輻射損傷后，與正常對照組相比，模型對照組GSH-PX含量降低，MDA含量增加，TNF-α、IL-2含量降低(P＜0.05)；與模型對照組相比，服用姬松茸多糖的大鼠GSH-PX含量升高，MDA含量降低，，TNF-α、IL-2含量升高(P＜0.05)；當多糖劑量達到200 mg/(kg·d)時，GSH-PX含量升高，MDA含量降低，TNF-α、IL-2含量升高，差異有統計學意義(P＜0.05)，表明姬松茸多糖對輻射損傷后大鼠的抗氧化能力具有明顯的保護作用。

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