神經母細胞瘤組織中HOXC9蛋白的表達與腫瘤發展及預后的關系

朱永潔，陳 鑫，邴春梅，張 琳，董 蒨

(青島大學附屬醫院，山東青島266003)

同源盒基因(HOX)是一類在進化上高度保守的基因，對下游靶基因具有調節作用。HOX基因在中樞神經系統、中軸骨、胃腸道、尿殖管、外生殖器和肢體發育中發揮重要作用。有研究揭示HOX基因對一系列腫瘤蛋白的調控機制具有重要意義［1，2］。神經母細胞瘤是最常見的小兒惡性實體腫瘤，臨床表現多樣化，早期易轉移，確診時多為晚期，預后不佳［3，4］。本研究旨在探討小兒神經母細胞瘤組織中HOXC9蛋白的表達與腫瘤發展及預后的關系，為神經母細胞瘤的臨床治療和預后評估提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2005年1月～2012年1月青島大學附屬醫院收治的神經母細胞瘤患兒112例，男61例，女51例;年齡48 d～13歲。采用國際神經母細胞瘤分期系統(INSS)分期:Ⅰ期10例，Ⅱ期17例，Ⅲ期40例，Ⅳ期35例，Ⅳ-S期10例。按國際神經母細胞瘤協作組(INPC)制定的分類標準分類［5］:未分化型神經母細胞瘤38例，分化差型神經母細胞瘤59例，分化型神經母細胞瘤15例。其中66例出現腫瘤轉移:有局部和遠處淋巴結轉移者20例，有遠處器官或骨髓轉移者46例。本研究得到青島大學附屬醫院倫理委員會的批準。所有患兒接受手術治療，術中留取腫瘤組織。術后電話隨訪患兒生存情況，隨訪時間為10～97個月，隨訪到78例患兒，失訪34例。

1.2 腫瘤組織中HOXC9蛋白的檢測 腫瘤組織石蠟包埋，4 μm厚連續切片，采用免疫組化染色法(SP法)進行染色檢測。HOXC9兔多克隆抗體購自德國antibodies-online公司。按照常規SP法進行檢測，設空白對照。結果判定:采用雙盲法，由兩名有經驗的病理醫師共同進行。以胞核出現棕色顆粒為HOXC9蛋白陽性。在高倍鏡下(×200)對每張切片隨機選取5個視野，計數視野中陽性細胞數和腫瘤細胞的總數，陽性細胞＜10%為-、10%～50%為+、51%～75%為++、＞75%為 +++，+、++、+++視為陽性。

1.3 統計學方法 采用 MedCalc11.4統計軟件。計數資料比較用χ2檢驗;Kaplan-Merier法建立生存曲線，Log-rank檢驗比較生存率的差異。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HOXC9蛋白表達與神經母細胞瘤患兒臨床病理參數的關系 112例患兒瘤組織中HOXC9蛋白呈-、+、++、+++者分別為34、38、34、6例，陽性表達率為69.6%;HOXC9蛋白呈-、+、++、+++表達的鏡下表現見圖1。HOXC9蛋白表達與神經母細胞瘤患兒臨床病理特征的關系見表1。表1顯示，HOXC9蛋白的表達有一定的差異:年齡小的患兒HOXC9蛋白陽性表達率高于年齡大的患兒(P ＜0.05);Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ-S 期患兒HOXC9蛋白陽性表達率高于Ⅲ、Ⅳ期患兒(P均＜0.05);細胞分化程度越高，HOXC9蛋白陽性表達率越高(P＜0.01);腫瘤未轉移患兒HOXC9蛋白陽性表達率高于腫瘤轉移患兒(P＜0.01)。

圖1 神經母細胞瘤組織中HOXC9蛋白的表達(×200)

表1 HOXC9蛋白表達與神經母細胞瘤患兒臨床病理參數的關系

2.2 HOXC9蛋白表達與神經母細胞瘤患兒預后的關系 112例患兒中隨訪到78例，將隨訪到的患兒分為HOXC9陰性組和HOXC9陽性組，分別有19例和59例。Kaplan-Merier法建立生存曲線，見圖2。HOXC9陽性表達神經母細胞瘤患兒的生存率為63.7%，陰性表達患兒的生存率為15.8%，兩者相比，P＜0.01。

3 討論

圖2 患兒生存曲線

神經母細胞瘤腫瘤起病部位隱匿，病程發展迅速，65%的患兒初診時已有骨髓、骨骼、遠處淋巴結的結移，臨床治療效果較差。目前認為神經母細胞瘤的浸潤轉移是一個多種癌基因參與的復雜過程［6］。研究這些相關癌基因或其分子生物學標記物與神經母細胞瘤的生物學特性、發病機制之間的關系，有助于更好地判斷神經母細胞瘤的預后、尋找新的治療方法、提高患兒的生存率。

HOX基因對DNA合成的轉錄過程起調控作用［7］，與腫瘤的發生發展密切相關。在胚胎及正常成熟組織中應沉默的HOX基因表達于成熟組織，通常引起腫瘤的發生，而一部分在正常成熟組織表達的HOX基因在相應腫瘤中往往低表達或表達缺失［8］。已有研究［9～12］發現，HOX 基因與宮頸癌、子宮內膜癌及乳腺癌、胃腸道腫瘤、肺癌、肝癌、白血病的發生密切相關。HOXC9是HOX基因家族重要的一員，有研究［13］發現其在結直腸癌的不同時期都有過度表達，腹部腫瘤組織中HOXC9蛋白的表達水平明顯高于位于頸/胸部或腎上腺的神經母細胞瘤［14］。本研究發現，HOXC9蛋白在神經母細胞瘤中陽性表達率為69.6%，HOXC9蛋白表達與患兒年齡及神經母細胞瘤臨床病理分期、細胞分化程度、轉移情況密切相關，而與患兒的性別無顯著相關性。神經母細胞瘤的分化狀態影響臨床治療效果，誘導分化是本病的一個治療策略，而HOXC9蛋白是神經母細胞瘤分化的關鍵調節因子［15，16］。通過對78例神經母細胞瘤患兒的隨訪分析發現，HOXC9陽性表達患兒的生存率高于陰性表達患兒，表明瘤組織HOXC9蛋白表達與神經母細胞瘤患兒的生存密切相關，這與文獻［16］報道一致。

綜上所述，瘤組織HOXC9蛋白的表達與神經母細胞瘤患兒的年齡及神經母細胞瘤臨床病理分期、細胞分化程度、轉移情況有密切關系，與患兒的生存時間密切相關，HOXC9可能對神經母細胞瘤臨床的治療及其預后評價有一定的指導作用。

［1］Strathdee G，Sim A，Soutar R.HOXA5 is targeted by cell type specific CpG island methylation in normal cells and during the development of acute myeloid leukaemia［J］.Carcinogenesis，2007，28(2):299-309.

［2］孟子輝，李航，姜濤，等.同源盒基因在肝癌細胞和組織中表達特點的研究［J］.中國實驗診斷學，2009，13(7):916-918.

［3］Chen X，Bao BH，Lu HT，et al.MicroRNA-15a promotes neuroblastoma migration by targeting reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazal motifs(RECK)and regulating matrix metalloproteinase-9 expression［J］.FEBS J，2013，280(3):855-866.

［4］陳鑫，董蒨，于倩倩，等.同一來源神經母細胞瘤細胞系的不同侵襲能力細胞株的建立及其侵襲能力差異的研究［J］.中華小兒外科雜志，2013，32(2):6-9.

［5］Shimada H，Ambros IM，Dehner LP，et al.Terminology andmorphologic criteria of neuroblastic tumors［J］.Cancer，1999，86(2):349-363.

［6］楊光，唐鎖勤，王建文，等.腫瘤標志物聯合檢測在神經母細胞瘤診治中的應用［J］.實用兒科臨床雜志，2007，22(3):193-194.

［7］Zhou B，Chen L，Wu X，et al.MH1 domain of SMAD4 binds N-terminal residues of the homeodomain of HOXC9［J］.Biochim Biophys Acta，2008，1784(5):747-752.

［8］Shears L，Plowright L，Harrington K，et al.Disrupting the interaction between HOX and PBX causes necrotic and apoptotic cell death in the renal cancer lines CaKi-2 and 769-P［J］.J Urol，2008，180(5):2196-2201.

［9］Lopze R，Garrido E，Pina P，et al.HOX homeobox gene expression in cervical carcinoma［J］.Int J Gynecol Cancer，2006，16(1):329-335.

［10］顧振東，陳小妹，張蔚，等.HOX基因家族在食管癌細胞系中表達的研究［J］.中華胃腸外科雜志，2007，10(4):365-367.

［11］Daniels TR，Neacato II，Rodriguez JA，et al.Disruption of HOX activity leads to cell death that can be enhanced by the interference of iron uptake in malignant B cells［J］.Leukemia，2010，24(9):1555-1565.

［12］Plowright L，Harrington KJ，Pandha HS，et al.HOX transcription factors are potential therapeutic targets in non-small-cell lung cancer(targeting HOX genes in lung cancer)［J］.Br J Cancer，2009，100(3):470-475.

［13］Vider BZ，Zimber A，Hirsch D，et al.Human colorectal carcinogenesis is associated with deregulation of home box gene expression［J］.Biochem Biophys Res Commun，1997，232(3):742-748.

［14］Oberthuer A，Berthold F，Warnat P，et al.Customized oligonucleotide microarray gene expression-based classification of neuroblastoma patients outperforms current clinical risk stratification［J］.J Clin Oncol，2006，24(31):5070-5078.

［15］Kocak H，Ackermann S，Hero B，et al.HOXC9 activates the intrinsic pathway of apoptosis and is associated with spontaneous regression in neuroblastoma［J］.Cell Death and Disease，2013，(4):e586.

［16］Mao L，Ding J，Zha Y，et al.HOXC9 links cell-cycle exit andneuronal differentiation and is a prognostic marker in neuroblastoma［J］.Cancer Res，2011，71(12):4314-4324.