地格達-4對酒精性脂肪肝模型大鼠氧化指標的影響*

烏日圖那順 包納日斯

（1.北京中醫藥大學基礎醫學院，北京 100029；2.內蒙古醫科大學，內蒙古 呼和浩特 010110）

依據酒精性脂肪肝發病過程中的臨床癥狀，從蒙醫學理論角度可將其分為3個階段，即初期、中期和晚期。初期屬蒙醫學“未消毒癥”范疇，是因為長期大量服用酒精而導致胃中毒，出現惡心、嘔吐、泛酸、食欲減退，胃部出現燒灼感等“希拉”增盛性癥狀。而中期和晚期屬“通拉嘎未消癥”范疇，主要出現非正常性脂肪過盛相關的癥狀和體征，如腹部肥胖、四肢消瘦、食欲減退、面色灰暗、乏力等。地格達-4是治療希拉增盛性疾病的代表性方藥［1］，有抑“希拉”之功效，主治“希拉”增盛所致的胃脘疼痛等癥。因此將其選定為自然科學基金課題 “蒙醫三根調節法及其代表性方劑對酒精性脂肪肝的作用機制研究”當中調節“三根”之一“希拉”的代表性方劑。本次試驗旨在觀察地格達-4影響酒精性脂肪肝相關指標而發揮調節“希拉”作用的機理，從而為系統闡明蒙醫三根法治療酒精性脂肪肝的作用機理奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 動物 雄性Wistar大鼠，80只，體質量150～170 g。動物合格證號：SCXK-（軍 2012-0004）。

1.2 試藥與儀器 地格達-4［主要成分為肋柱花、沙蓬、肉豆蔻、梔子，由國家蒙藥制劑中心內蒙古國際蒙醫醫院制劑室提供，批準號：呼衛注字（97）001-013］，硫普羅寧片（山西云中制藥有限責任公司生產，國藥準字 H20093445）， 超氧化物歧化酶 （SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-px）試劑盒（由上海滬尚生物科技有限公司提供），酶標儀。

1.3 分組與造模 大鼠隨機分為2組，空白組15只，以蒸餾水每日0.5 mL/100 g連續灌胃8周；造模組65只，以56°白酒逐步增加酒精量灌胃，前3 d稀釋為15%的酒精含量以0.5 mL/100 g灌胃，再稀釋為30%酒精含量灌胃3 d，其后增加到45%的酒精含量灌胃8周［2-3］。8周后空白和造模組每組隨機選取3只鼠處死后取肝臟，制成肝組織病理切片，顯微鏡下觀察，判定是否造模成功。然后將成模大鼠隨機分為模型對照組、硫普羅寧組和地格達-4高、中、低劑量組。

1.4 給藥方法 空白組和模型對照組以1%羧甲基纖維素鈉溶液每日0.5 mL/100 g連續灌胃4周；地格達-4 高、中、低劑量組分別用 1400、700、350 mg/kg的地格達-4，以1%羧甲基纖維素鈉溶液配制成混懸溶液后每日0.5 mL/100 g連續灌胃4周；硫普羅寧組用40 mg/kg的硫普羅寧片研磨后以1%羧甲基纖維素鈉溶液配制成混懸溶液，每日0.5 mL/100 g連續灌胃4周；同時繼續造模。

1.5 標本采集與檢測 4周后各組同時禁食不禁水16 h，用20%烏拉坦0.5 mL/100 g腹腔注射麻醉，開腹，腹主動脈采血，3000 r/min離心，取血清，-20℃冷藏備用；取肝組織用錫紙包裹-80℃冷藏備用。肝組織制成勻漿，2000 r/min離心10min，取上清液；-20℃冰箱內取出血清，自然融化，然后用酶標儀檢測SOD、MDA、GSH-px等指標。

1.6 統計學處理 應用SPSS17.0統計軟件分析。計量資料以（）表示，各組間數據比較采用獨立樣本t檢驗。P＜0.01為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 地格達-4對各組大鼠肝組織SOD、MDA的影響見表1。除地格達-4低劑量組外，其余各組肝組織SOD、MDA水平與模型組比較，均有顯著差異 （P＜0.01）；地格達-4中劑量組和疏普羅寧組肝組織SOD、MDA與地格達-4高劑量組比較有顯著差異 （P＜0.01）。

表1 各組大鼠肝組織SOD、MDA水平比較（mmol/g，）

表1 各組大鼠肝組織SOD、MDA水平比較（mmol/g，）

與模型對照組比較，△P＜0.01；與地格達-4高劑量組比較，☆P＜0.01。下同。

2.2 地格達-4對各組大鼠肝組織和血清中GSH-px的影響 見表2。除地格達-4低劑量外組，其余各組肝組織和血清中GSH-px水平與模型對照組比較，均有顯著差異（P＜0.01）；而且地格達-4中劑量組與高劑量組比，肝組織和血清中GSH-px也有顯著差異（P＜0.01）。

表2 各組大鼠肝組織和血清中GSH-px水平比較（）

表2 各組大鼠肝組織和血清中GSH-px水平比較（）

2.3 地格達-4對各組大鼠血清SOD、MDA的影響見表3。空白組、硫普羅寧組、地格達-4高、中劑量組血清SOD、MDA水平與模型對照組比較，均有顯著差異（P＜0.01）；并且地格達-4中劑量組與高劑量組比兩項指標也有顯著差異（P＜0.01）；而地格達-4低劑量組與模型對照組比，只有血清MDA有顯著差異 （P＜0.01）。

表3 各組大鼠血清SOD、MDA水平比較（mmol/L，）

表3 各組大鼠血清SOD、MDA水平比較（mmol/L，）

3 討 論

SOD、CSH-px和MDA在酒精性脂肪肝的發生、發展和轉歸當中起著非常重要的作用。有研究表明［4］，自由基增加、肝細胞過度氧化是發生酒精性脂肪肝的關鍵所在。因為乙醛和自由脂肪酸濃度的增加可促進過氧化物酶體β的氧化，釋放大量的高活性自由基，這些使脂質過氧化，細胞膜過氧化，釋放4-羥基壬烯醛（NXN）和MDA。其中NXN趨化中性粒細胞產生炎癥，MDA則作用與核因子NF-κB，使致炎因子表達，釋放白介素-8、細胞間黏附分子-1和腫瘤壞死因子-α等。同時NXN和MDA均可與細胞內其他蛋白發生交聯，形成酒精性透明小體，二者又可激活貯脂細胞而形成脂肪肝，還能促進膠原纖維的合成，形成纖維化，甚至肝硬化。而SOD則能催化氧自由基歧化反應，清除自由基，使細胞免受損傷。SOD可催化O2-生成O2和H2O2，H2O2則由 CSH-px 進一步催化，變成 O2和 H2O2，從而防止體內自由基引起膜脂質過氧化［5］。而MDA則為脂質過氧化反應的終產物，它具有強毒力性，與枯否細胞及肝細胞釋放的細胞因子一起介導肝細胞死亡、Mallory小體形成、肝星狀細胞活化和肝纖維化形成等等，因此，升高SOD含量、降低和清除MDA對阻斷脂肪肝的形成與發展極其重要［6］。

而本研究結果表明地格達-4能顯著升高酒精性脂肪肝模型大鼠血清和肝組織當中的SOD和CSH-px，同時能顯著降低MDA的含量。這提示地格達-4具有抗氧化作用，它是通過增高SOD和CSH-px，降低MDA而起到保護肝細胞氧化損傷的。并且從研究結果可以得知對于血清SOD的作用，中劑量地格達-4優于高劑量地格達-4，而低劑量地格達-4則對各項指標幾乎無作用。對于肝組織中SOD的作用，高劑量地格達-4優于中劑量地格達-4，也優于硫普羅寧。而對于肝組織中CSH-px的作用，中劑量地格達-4則優于高劑量地格達-4，對MDA的作用兩者則相同。因此綜合考量上屬結果，中劑量地格達-4應作為首選治療劑量，也就是相當于人體的常規劑量。

綜上所述，地格達-4具有確切的抗肝細胞氧化損傷的作用。抗氧化、清除自由基是地格達-4治療酒精性脂肪肝的主要作用機理之一，并且從蒙醫學理論角度看，地格達-4是治療“希拉”增盛性疾病的代表性方藥。酒精性脂肪肝則是由辛辣、熱性物質酒精引發的，屬“齊素、希拉”增盛性、熱性疾病范疇。從而可以推斷出“希拉”增盛與體內自由基增多、發生氧化反應成正相關關系，有待進一步研究闡明。

［1］楊·阿敏.方劑學［M］.沈陽：遼寧民族出版社，1995：174.

［2］張偉.大 鼠酒精性脂肪肝模型的建立［J］.安徽醫藥，2012，16（7）：885.

［3］羅先欽，徐曉玉，黃崇剛，等.決明子總蒽醌對酒精性脂肪肝大鼠肝組織脂質過氧化與PPAR-γ表達的影響［J］.中國中藥雜志，2012，36（12）：1654-1659.

［4］瑪·安巴嘎，博·薩仁琪琪格.赫依-希拉-巴達干與細胞膜的關系（新蒙文版）［M］.烏蘭巴托：蒙古國烏蘭巴托出版社，2002：65-69.

［5］楊牧祥，張一昕，耿蘭書，等.脂肝泰膠囊對高脂血癥性脂肪肝患者和的影響［J］.河北中醫藥學報，2002，17（4）：1.

［6］梅全喜，孔祥廉，鐘希文，等.昆藻調脂膠囊對高脂血癥脂肪肝大鼠血清和肝組織及含量的影響［J］.中醫藥學刊，2006，24（11）：2031.