三種不同來源精子行卵胞漿內單精子注射臨床結局的比較

張丹+譚麗+趙冬梅

【摘要】 目的：比較三種方法獲得的精子行卵胞漿內單精子注射的臨床結局。方法：回顧性分析筆者所在醫(yī)院2011年1月-2012年12月374個卵胞漿內單精子顯微注射（ICSI）治療周期的妊娠結局，依據精子來源不同分為三組：射出精液組（A組），經皮附睪穿刺和經皮睪丸穿刺取精子組（B組），供精組（C組），比較三組的受精率、卵裂率、優(yōu)質胚胎率和臨床妊娠率。結果：A組的優(yōu)胚率高于C組（P<0.017），三組患者的受精率、卵裂率、臨床妊娠率比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論：精液、附睪或睪丸精子、供精行ICSI助孕的結局相近。精子的成熟度、精子的冷凍可能并不影響最終的妊娠率。

【關鍵詞】 卵胞漿內單精子注射； 射出精液； 附睪睪丸精子； 供精； 臨床妊娠率

Comparison of Clinical Outcomes of Intracytoplasmic Sperm Injection Using Three Different Sources of Sperm/ZHANG Dan，TAN Li，ZHAO Dong-mei.//Medical Innovation of China，2014，11（32）：011-013

【Abstract】 Objective：To compare the clinical outcomes of intracytoplasmic sperm injection （ICSI） using the three different sources of sperm.Method：374 intracytoplasmic sperm injection （ICSI） treatment cycles were analyzed retrospectively in our center from January 2011 to December 2012.They were divided into three groups according to the sperm from different sources： ejaculate group （A group）， percutaneous puncture epididymis and testicular sperm group （group B）， donor sperm group （group C）.Fertilization rate，cleavage rate， excellent embryo rate and clinical pregnancy rate of the three groups were compared.Result： The excellent embryo rate of patients in group A was higher than group C（P<0.017）， difference of patients fertilization rate， cleavage rate， clinical pregnancy rate in the three groups was not statistically significant （P>0.05）.Conclusion：Semen， epididymal or testicular sperm，donor sperm for ICSI outcome is similar to assisted reproductive.Maturity sperm and frozen sperm may not affect the final pregnancy rate.

【Key words】 Intracytoplasmic sperm injection； Ejaculate； Epididymal testicular sperm； Donor sperm； Clinical pregnancy rate

First-authors address：The Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450014，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.32.004

不孕癥夫婦中大約30%是男方因素導致不育而就診的，而其中無精子癥的發(fā)病率高達10%～15%[1]。卵胞漿內單精子注射（ICSI）技術是治療男性不育的有效方法[2]，經皮附睪穿刺和經皮睪丸穿刺取精子及供精為無精子癥患者獲得后代提供了可能。本文對比射出精液、經皮附睪穿刺和經皮睪丸穿刺取精子、供精行ICSI助孕的結局，分析不同來源的精子對最終妊娠結局的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 對筆者所在醫(yī)院2011年1月-2012年12月374個卵胞漿內單精子顯微注射（ICSI）治療周期的妊娠結局進行分析，不育原因是嚴重少弱畸精子癥、無精子癥。依據精子來源不同分為三組：射出精液組（A組），308個周期；經皮附睪穿刺和經皮睪丸穿刺取精子組（B組），41個周期；供精組（C組），25個周期。所有無精子癥患者進入治療周期前進行附睪穿刺或睪丸活檢，以明確附睪或睪丸內有無活動精子。若有活動精子則用附睪或睪丸穿刺所獲精子，若無活動精子及不動精子則采用精子庫中精子，入組的供精組患者當天解凍處理后的精子活率密度均符合ICSI標準。擬定ICSI標準為：男方3次精液常規(guī)檢查至少有2次以上符合以下任一標準：（1）嚴重少精癥：一次射精的活精子密度≤2×106/mL；（2）少弱畸精癥：精子密度>2×106/mL，但是<20×106/mL，其活動率<40%，同時a+b級運動精子<20%，或形態(tài)正常精子<15%；（3）弱畸精癥：精子密度≥20×106/mL，按嚴格標準進行精子形態(tài)檢查，形態(tài)正常精子<10%，或a+b級運動精子<5%；（4）精液處理后活動精子密度<5×106/mL。endprint

1.2 方法

1.2.1 常規(guī)超排卵 采用促性腺激素激動劑（GnRHa）進行降調節(jié)，用FSH或HMG促超排卵，至2個以上卵泡直徑≥18 mm，肌注hCG10 000單位或艾澤250 μg，36～38 h行陰超介導下經陰道取卵術。

1.2.2 精液精子獲取 射出精液放入37 ℃、5% CO2 培養(yǎng)箱中待用，液化后，采用梯度離心法進行處理。

1.2.3 PESA或TESA獲取精子 患者取仰臥位， 常規(guī)消毒鋪巾后， 以1%鹽酸利多卡因行局部麻醉。用7號輸液針頭連接10 mL注射器吸取培養(yǎng)液約1 mL，左手固定一側附睪、睪丸， 右手持輸液針經皮穿刺附睪， 持續(xù)施加負壓抽吸， 同時緩慢后退，直至有淡黃渾濁附睪液體抽出，將抽出的附睪液放入培養(yǎng)皿中，在倒置顯微鏡下尋找活動的精子。如未抽出液體或未找到活動精子，則穿刺對側附睪。如仍未找到活動精子，則行TESE。TESE獲取精子時麻醉方法同上，固定一側睪丸后用注射器經皮穿刺睪丸抽吸，將抽吸出的曲細精管置于培養(yǎng)皿中，用注射器針頭撕碎曲細精管，倒置顯微鏡下尋找活動的精子。PESA或TESA獲取精子的處理采用直接離心法，獲得的沉淀備用。

1.2.4 供精 PESA或TESA未獲取精子及有供精指征的患者，取卵當天將供精進行37 ℃水浴復溫后采用梯度離心法處理。

1.2.5 受精、移植及臨床妊娠情況的判定 取卵后3～4 h行ICSI，受精后16～18 h觀察雙原核以確定是否正常受精。取卵后第3天根據患者的年齡和治療周期數(shù)選擇評分最高的1～3個胚胎進行移植。移植后14 d測血β–hCG 陽性，移植后30 d腹部B超顯示可見孕囊確定臨床妊娠。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料采用（x±s）表示，比較應用方差分析，計數(shù)資料的比較采用 字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 三組臨床資料的比較 三組患者的年齡、不孕年限、Gn用量、Gn天數(shù)、移植胚胎數(shù)比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.2 三組受精率、卵裂率、優(yōu)胚率及妊娠率的比較 三組患者的受精率、卵裂率比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），臨床妊娠率從數(shù)據上看B組和C組略高于A組，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。A組、B組的優(yōu)胚率要高于C組，經過多行多列卡方檢驗顯示三組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），進一步進行兩兩組之間的比較，發(fā)現(xiàn)A組與C組比較差異有統(tǒng)計學意義（P=0.017）。

3 討論

隨著輔助生殖技術的不斷發(fā)展，1992年卵胞漿內單精子注射（ICSI）技術誕生，該技術為治療男性因素導致的不育癥提供了有效的方法[2]。根據患者的病情，對于梗阻性無精子癥的男性可從附睪或睪丸獲取精子行ICSI助孕，獲得自己的血親后代[3]。若無法從附睪或睪丸獲得精子者則需采用供精試管嬰兒術助孕。但精液精子、附睪或睪丸精子、供精精子行ICSI治療的臨床結局如何，是目前普遍關注的問題。

Bukulmez等[4]比較射出精子組、附睪精子組、睪丸精子組的ICSI結局，結果各組間無顯著性差異。研究者認為梗阻性無精子癥患者應優(yōu)先使用附睪精子行ICSI，并提出男性的配子可能會影響胚胎的發(fā)育潛能。Dozortsev等[5]則認為附睪精子組的受精率比睪丸精子組高，睪丸精子比附睪精子形成的胚胎有更好的發(fā)育潛能。有文獻報道冷凍精子復蘇后會增加精子的DNA損傷[6-7]，影響精子的DNA完整性[8-9]。Bungum等[10]研究認為ICSI可繞過精子DNA損傷給精子和卵母細胞受精時帶來的損害。國內有文獻報道不同來源的精子對結局沒有明顯影響[11-12]。本研究與其結局一致。

本研究顯示三組患者的受精率、卵裂率差異無統(tǒng)計學意義，不同的精子來源對ICSI操作后卵子的受精及卵裂無影響。可能由于ICSI技術直接將精子注入到卵母細胞內，形成受精卵，對于精子的受精能力要求較低。即使是冷凍復蘇后的精子，通過ICSI技術也不會影響精卵的結合。Bukulmez等[4]認為一旦受精完成后，胚胎的發(fā)育與精子的來源無關。本研究也顯示出三組患者的卵裂率沒有差異。但射出精子組的優(yōu)胚率從數(shù)據上看高于附睪或睪丸組和供精組，附睪或睪丸組高于供精組，三組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。進一步作兩兩比較時，顯示射出精子組與供精組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），雖然附睪或睪丸組的優(yōu)胚率從數(shù)據上看高于供精組，但進一步比較后顯示差異無統(tǒng)計學意義。射出精子組的優(yōu)胚率從數(shù)據上看高于附睪或睪丸組，可能由于附睪或睪丸組的精子來源和分離較之射出的精子困難，且ICSI操作過程中要盡量尋找較好的精子進行注射導致操作時間相對較長，致使卵子在外暴露的時間延長，故其優(yōu)胚率低于射出精子組。有文獻報道供精的精子行ICSI后優(yōu)胚率低于新鮮精子組[13]。本研究也顯示出供精組的優(yōu)胚率低于射出精子組。可能在精子的冷凍過程中損傷了精子的核染色質，中心體，影響了胚胎的正常分裂。但仍需要大樣本的研究進行進一步證實。

本研究臨床妊娠率從數(shù)據上看B組和C組略高于A組，但差異無統(tǒng)計學意義，與國內的部分研究相一致。附睪或睪丸組和供精組的妊娠率在數(shù)據上高于射出精子組，可能是由于這兩組患者的女方通常都具有正常的生育能力，其內膜擁有正常的允許胚胎著床的能力，但差異無統(tǒng)計學意義。說明只要能獲得一定數(shù)量的可移植胚胎，不同來源的精子對ICSI結局無明顯影響。綜上所述，本研究認為只要能夠獲得足夠數(shù)量質量較好的胚胎，無論是射出的精子、還是附睪或睪丸精子、供精的精子，對ICSI助孕結局均無明顯影響。

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（收稿日期：2014-05-08） （本文編輯：石亞飛）endprint