豫南地區(qū)規(guī)模化豬場豬圓環(huán)病毒抗體水平的監(jiān)測與分析

王 瑞，劉 濤，馮艷麗，曲哲會，趙 瑜，酒雅麗

（1.信陽農林學院動科系，河南 信陽 464000；2.駐馬店正大動保中心，河南 駐馬店 463000；3.信陽市畜產品質量檢測中心，河南 信陽 464000）

自2010年以后，豫南地區(qū)養(yǎng)殖場使用的圓環(huán)疫苗既有國產亦有進口產品，為分析掌握豬圓環(huán)疫苗的免疫狀況,我們與駐馬店正大公司合作，自2011年10月-2012年12月利用武漢科前動物生物制品有限責任公司的豬圓環(huán)病毒抗體酶聯(lián)免疫試驗檢測試劑盒,對位于河南南部的信陽與駐馬店地區(qū)的規(guī)?；B(yǎng)殖場送檢的血樣進行豬圓環(huán)病毒抗體水平的檢測,并按被檢豬場免疫狀況進行分類和比較。

1 材料與方法

1.1 試劑及設備 豬圓環(huán)抗體ELISA檢測試劑盒,購自武漢科前動物生物制品有限責任公司。試劑盒內含有預包被板、酶結合物、洗滌液、樣本稀釋液、底物、顯色劑、終止液、陰性對照品、陽性對照品。

DHG-9241A型電熱恒溫干燥箱：成都普龍科學儀器有限公司。

LDZX-50KBS型不銹鋼全自動數顯立式高壓蒸汽滅菌器：上海申安醫(yī)療器械廠。

DG5031酶標儀：南京華東電子集團醫(yī)療裝備有限責任公司。

Eppendorf單道可調移液器(10μL ，200μL)購自德國Eppendorf公司。

1.2 被檢血清 來自信陽市浉河區(qū)、平橋區(qū)、羅山縣、潢川縣、息縣和駐馬店市驛城區(qū)、確山縣、平輿縣、正陽縣、上蔡縣、遂平縣、西平縣、汝南縣、泌陽縣、新蔡縣。從2011年10月-2012年12月，其中信陽地區(qū)檢測母豬73份，仔豬91份。駐馬店地區(qū)母豬509份，仔豬229份，共計902份。

1.3 ELISA檢測方法

1.3.1 操作步驟 用稀釋好的洗滌液洗板2次（200 μL/孔）每次靜置2 min后倒掉，再在干凈吸水紙上拍干；取稀釋好的待檢樣品100 μL加入到檢測板中；陰性對照和陽性對照各設2孔，每孔100 μL；輕輕振勻孔中樣品，置37℃溫育30 min；甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板3次，200 μL/孔，每次靜置3 min倒掉，再在干凈吸水紙上拍干；每孔加羊抗豬酶標二抗100 μL，置37℃溫育30 min；洗滌5次，方法同3。切記每次在干凈吸水紙上拍干;每孔先加底物液A 1滴（50 μL）、再加底物液B 1滴（50 μL），混勻，室溫（18℃～25℃）避光顯色10 min。每孔加終止液1滴（50 μL），10 min內測定結果。

1.3.2 結果判定 在酶標儀上測各孔OD630值。試驗成立的條件是陽性對照孔平均OD630值大于或等于1.0，陰性對照孔平均OD630值必須小于0.3。樣品OD630值大于0.42，判為陽性；樣品OD630值在0.38到0.42之間，判為可疑；樣品OD630值小于0.38，判為陰性。

2 結果

見表1～4。

表1 免疫豬場陽性率

表2 未免疫豬場感染率

表3 免疫豬場抗體檢測值分布

表4 未免疫豬場抗體檢測值分布

3 分析與討論

3.1 應用ELISA檢測方法對河南省南部地區(qū)部分規(guī)?；i場進行了流行病學調查，檢測結果表明,在免疫過PCVⅡ疫苗的豬場：母豬陽性率為82.01%，保育仔豬陽性率為71.08%，總陽性率為78.74%。

3.2 未免疫過PCVⅡ疫苗的豬場：母豬感染率為83.65%，保育仔豬陽性率為81.90%，總感染率為82.73%。

3.3 從抗體檢測值看，免疫過PCVⅡ疫苗的豬場內：后備母豬在中等抗體水平（0.42＜OD值＜1）占40%，在較高保護水平（OD值＞1）占27.5%；經產母豬在中等抗體水平者（0.42＜OD值＜1）占14.61%，在較高保護水平者（OD值＞1）占74.54%。保育仔豬在中等抗體水平者（0.42＜OD值＜1）占22.06%，在較高保護水平者（OD值＞1）占29.41%。

3.4 從抗體檢測值看，未免疫過PCVⅡ疫苗的豬場內：后備母豬中等程度感染（0.42＜OD值＜1）占46.15%，嚴重感染者（OD值＞1）占23.07%；經產母豬中等程度感染（0.42＜OD值＜1）占27.47%，嚴重感染者（OD值＞1）占58.24%；保育仔豬中等程度感染（0.42＜OD值＜1）占24.14%，嚴重感染者（OD值＞1）占57.76%.

從檢測結果可知，當前在豫南地區(qū)規(guī)?；i場如接種過PCVⅡ疫苗，經產母豬的抗體水平及保護率要明顯高于后備母豬，這可能是市場上該疫苗品種主要是亞單位和滅活苗的原因，需要多次免疫，才能誘導產生高抗體水平。由于后備母豬的圓環(huán)病毒疫苗抗體水平較低，一胎仔豬圓環(huán)病毒感染風險較高。保育仔豬從此次調查結果看，免疫合格率較低，只有51.47%。

在未免疫圓環(huán)疫苗的豬場內，后備母豬和經產母豬的感染率均較高，尤其是經產母豬達到58.24%，說明在豬場內多胎母豬隨著飼養(yǎng)時間延長，感染的機率也隨之升高，應適時淘汰。保育仔豬的感染率高達81.9%。

總體來看，作為河南省重要的生豬養(yǎng)殖地區(qū)，駐馬店和信陽兩地規(guī)?；i場圓環(huán)疫苗免疫場經產母豬抗體合格率較高，但在后備母豬和保育豬階段豬群抗體合格率偏低。而不免疫圓環(huán)疫苗的豬場各階段圓環(huán)病毒感染率較高。

現在市面上的所有PCVⅡ疫苗都能有效的降低PCVⅡ感染豬場中臨床疾病的發(fā)生，提高豬群生產指數。雖然疫苗免疫接種并不能夠完全防PCVⅡ的感染和傳播，但是能夠極大的降低毒血癥、系統(tǒng)水平的病毒含量和病毒的外排，從而降低環(huán)境中的病毒含量。

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