酸漿水提物對高脂模型大鼠血脂水平的影響

劉敏等

摘要：為研究酸漿水提物對高脂模型大鼠血脂水平的影響，將48只大鼠隨機分為6組，包括正常組、模型組、酸漿低劑量組、酸漿中劑量組、酸漿高劑量組和藥物對照組。除正常組外，各組以高脂飼料喂養1個月，建立高脂血癥大鼠模型，之后正常組和模型組以蒸餾水灌胃，酸漿低、中、高劑量組分別以1.5、7.5、37.5 g/kg酸漿溶液灌胃，藥物對照組以辛伐他汀15 mg/kg灌胃。30 d后，測定大鼠血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）濃度指標并制作肝組織切片。結果顯示，與正常組相比，模型組大鼠血清TC濃度升高，具有統計學差異（P<0.01），TG和LDL-C濃度升高，但無統計學差異（P>0.05），高脂模型大鼠建立成功；與模型組比較，酸漿中劑量組和藥物對照組大鼠血清TC、TG和LDL-C濃度降低，具有統計學差異；酸漿高劑量組和酸漿低劑量組大鼠血清TG濃度降低，具有統計學差異（P<0.01），TC和LDL-C濃度降低，但無統計學差異（P>0.05）。肝組織形態學觀察結果表明，酸漿對肝臟有保護作用。說明酸漿對高脂模型大鼠脂質代謝異常具有良好的調節作用，其中對TG的調節效果較突出。

關鍵詞：酸漿水提物；大鼠；甘油三酯；總膽固醇；高密度脂蛋白膽固醇；低密度脂蛋白膽固醇；組織形態學

中圖分類號： S858.91；R284.1文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）10-0310-04

收稿日期：2013-12-09

基金項目：吉林省教育廳“十二五”科學技術研究項目（編號：吉教科合字[2013]第360號）。

作者簡介：劉敏（1984—），女，吉林農安人，碩士，助理實驗師，從事細胞生物學研究。

通信作者：馬洪波，碩士，副教授，主要從事慢性病的營養防治研究。E-mail：13504315943@163.com。近年來，隨著物質生活來的逐步提高，人們對高質量生活的追求越來越強烈。保健養生、合理膳食、營養搭配、食藥兩用的研究逐漸嶄露頭角，成為醫學領域中的一支新秀。同時，隨著人們生活方式和飲食結構的改變、飲食中脂肪攝入的增多及運動量的減少，慢性營養性疾病的發病率不斷提高[1]。我國疾病譜也在由具有發展中國家特點向兼具發展中國家和發達國家的特點轉變，從1990—2005年我國部分城鄉主要疾病死亡率和死因構成監測資料來看，心血管疾病的死因順序排位，無論是在城市還是在農村，均居首位[2]。2005年衛生部公布的“中國居民健康與營養狀況調查”結果首次得到了中國人群的血脂流行病學數據，其中中國的高血脂人群已達1.6億人。專家指出，血脂異常是冠心病、心梗和缺血性腦卒中等心腦血管病的重要危險因素之一[3]。高脂血癥正成為潛藏在國民體內、時刻威脅著人們血管健康的“殺手”。因此探討治療、控制、預防高脂膳食引起的血脂水平紊亂的方法，有著十分重要的意義。

酸漿為茄科酸漿屬多年生草本植物，果實為圓球形漿果，成熟時呈橙紅色，外有膨大的花萼如燈籠狀包圍在漿果之外，故又有紅姑娘、掛金燈、錦燈籠等美稱，我國許多地區都有分布，主要生長在吉林、河北、新疆、山東等地[4]。酸漿含有豐富的營養素，包括17種氨基酸、21種微量元素和礦物質、8種維生素以及多種植物化學物，具有降血糖、降血脂、抗病毒、抗癌、抗炎、抗氧化、強心等作用[5-7]，是食藥兩用價值很高的天然食品。近些年，我國學者對酸漿化學成分的分析以及生理功效的研究逐漸增多，周靜等對酸漿進行營養成分分析，結果顯示酸漿果具有豐富的營養成分，其中蛋白質、脂肪、纖維素含量均較高，尤其胡蘿卜素含量高于許多水果和蔬菜[8]。酸漿果中還含有多種礦質元素，其中鎂的含量最高，鎂對很多酶系統生物活性極為重要，素有活細胞“萬能控制器”之稱。酸漿果含17種氨基酸（其中色氨酸在酸水解中被破壞），種類齊全，比例合理，必需氨基酸含量較高。然而目前就酸漿對血脂水平影響的研究較少。本試驗探討酸漿對高脂血癥大鼠血脂水平的影響作用，為降血脂藥物的開發及血脂代謝紊亂的治療、控制及預防提供科學依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

酸漿水提物：酸漿生藥（購于藥材市場，由吉林醫藥學院雷鈞濤教授鑒定為酸漿正品），以水浸提，提取條件為提取水量6倍、提取溫度110 ℃、提取時間2 h、提取次數3次。高脂飼料由1%膽固醇、10%豬油、10%蛋黃粉、79%基礎飼料組成。

1.2主要儀器

全自動生化分析儀（SYSMEX-180，日本）；光學顯微鏡（LEICA DM1000，德國）；CCD（Olympus DP71，日本）；電子天平（JD400-38型，遼寧沈陽龍騰電子有限公司）。

1.3實驗動物分組及建立高脂血癥大鼠模型

成年Wistar大鼠48只（購于吉林大學白求恩醫學部實驗動物中心），隨機分為6組，即正常組、模型組、酸漿低劑量組、酸漿中劑量組、酸漿高劑量組、藥物對照組，每組8只，雌雄各半。試驗開始后正常組以正常飼料喂養，其余各組以高脂飼料喂養1個月，誘導建立高脂血癥大鼠模型。

1.4實驗動物給藥及血脂指標的檢測

實驗動物給藥方法及劑量為正常組（蒸餾水）、模型組（蒸餾水）、酸漿低劑量組（酸漿溶液1.5 g/kg）、酸漿中劑量組（酸漿溶液7.5 g/kg）、酸漿高劑量組（酸漿溶液37.5 g/kg）、藥物對照組（辛伐他汀15 mg/kg），連續灌胃 30 d。試驗結束時用水合氯醛（0.03 mL/kg）麻醉大鼠后，從腹主動脈取血分離血清（2 000 r/min離心20 min），取血清 2 mL 檢測各項血脂指標。血脂測定指標包括大鼠血清甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的濃度，血脂相關指標的測定采用全自動生化分析儀。

1.5實驗動物體質量及實質性臟器質量的檢測

對試驗前后不同組的大鼠進行體質量測量，同時分離出實質性臟器，稱重，記錄各組數據進行統計分析。

1.6HE染色

各組大鼠采血后，取肝臟浸入4%甲醛溶液，固定后制作成切片，HE染色后在光學顯微鏡下觀察肝組織形態變化。

1.7統計方法

采用SPSS 11.0軟件對各組大鼠體質量及血清血脂指標的平均數進行方差齊性檢驗和多重比較。P<0.05表示具有統計學差異。

2結果與分析

2.1酸漿對大鼠體質量的影響

由表1可以看出，酸漿低劑量組、酸漿中劑量組、酸漿高劑量組和藥物對照組大鼠體質量與模型組大鼠體質量無統計學差異（P>0.05）。

2.2酸漿對大鼠實質性臟器系數的影響

2.4大鼠肝臟組織形態學改變

由圖1可見，正常組肝細胞索排列整齊規則，細胞中央有大而圓的核，細胞質均勻，肝細胞無變形；模型組肝細胞內可見大小不等、數量不一的脂滴空泡，肝細胞腫脹，體積變大，說明高脂模型大鼠建立成功。酸漿低、中、高劑量組肝細胞內也可見脂肪滴，但體積較小，數量較少，其中酸漿中、高劑量組肝細胞內脂肪滴體積明顯變小，密集排列；酸漿高劑量組脂肪滴密集地分布在肝細胞內，肝細胞排列緊密均勻，與藥物對照組相近。

3討論

現代醫學研究表明，脂類代謝異常與心腦血管疾病密切相關，是冠心病、心梗和缺血性腦卒中等心腦血管疾病的重要危險因素之一[3]。血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽

固醇和低密度脂蛋白膽固醇水平是反映機體脂質代謝的主要指標。其中，TC以脂蛋白的形式絕大部分存在于LDL-C中，LDL-C水平增高是致動脈粥樣硬化的危險指標，而 HDL-C 具有調節體內組織膽固醇的作用，它能將周圍組織和動脈壁上的膽固醇吸收下來，逆轉運至肝臟中代謝，從膽汁排出，因此HDL-C水平與動脈粥樣硬化呈負相關[9-10]。本試驗選取以上指標觀察酸漿對高脂模型大鼠血脂水平的影響。

酸漿中含有較為豐富的黃酮類化合物，具有保護心血管的作用，可減少體內膽固醇的合成、降低血清膽固醇濃度，主要是通過抑制參與動脈粥樣斑塊生成的生長因子，從而減少血管壁上膽固醇的沉積、降低膽固醇水平以及減少與動脈粥樣硬化有關的血栓形成。同時，有關試驗研究了黃酮類化合物的抗氧化性質，認為黃酮是作為一級抗氧化劑而起作用的，具有顯著的抗氧化性能[11]，可阻斷類脂氧化和LDL-C的氧化修飾途徑來降低血清中LDL-C濃度[12]。酸漿中微量營養素的含量也較豐富，其中維生素以維生素C、維生素E、維生素B2含量最高[13]。維生素C在體內參與多種生物活性物質的羥化反應，包括參與肝臟膽固醇代謝成膽酸的羥化反應，促進膽固醇轉變為膽汁酸而降低血中膽固醇的含量。動物試驗干預研究證實，維生素E有預防動脈粥樣硬化和冠心病的作用，其機制可能與其抗氧化作用有關，即減少脂質過氧化物質的形成；此外，維生素E還可能通過抑制炎癥因子的形成和分泌以及抑制血小板凝集而發揮抗動脈粥樣硬化的作用[14]。酸漿所含礦物質中鈣、磷、鉀、鈉、鎂5種常量元素和鐵、鋅、銅等10余種微量元素較多[13]，機體內補充鎂、鈣、鉻、碘、硒等礦物質均可調節脂質代謝，降低膽固醇水平，減少其在血管壁上的沉積，防止粥樣硬化斑塊的形成。此外，酸漿鮮果中的植物甾醇可能降低血液中TC和LDL-C的含量，但不降低HDL-C和TG的含量，現在研究普遍認為攝入和補充足量的植物甾醇有助于降低人群冠心病的發病率[15]。

本試驗研究結果表明，與正常組相比，模型組TC濃度升高，且有統計學差異（P<0.01），TG和LDL-C濃度升高，但無統計學差異（P>0.05），TG及LDL-C指標不理想可能與造模時間不夠有關。劉小美等采用雄性青年大鼠給予高脂飼料（組成與本試驗相同）喂養42 d，雖膽固醇濃度均有所升高，但升高幅度不大，甘油三酯濃度反倒有下降趨勢，認為此次造模時間尚不夠長，以高脂飼料喂飼形成高脂血癥需要一個較長的過程[16]。林衛華等也在大鼠試驗性高脂血癥模型分析中提到高脂飼料喂養法建立的大鼠高脂血癥模型表現為血清TC明顯升高，HDL-C明顯降低，重現性好，而TG受影響因素多，波動大，重現性差[17]，因此，結合肝組織形態學變化，即正常組肝細胞索排列整齊規則，細胞中央有大而圓的核，細胞質均勻，肝細胞無變形，模型組肝細胞內可見大小不等、數量不一的脂滴空泡，肝細胞腫脹，體積變大，可認為本試驗高脂模型建立成功。與模型組相比，酸漿中劑量組大鼠血清TC、TG（P<0.01）和LDL-C（P<0.05）濃度均下降，且與辛伐他汀藥物對照組對大鼠血脂水平調節的效果相近；而低劑量組和高劑量組TG濃度降低且有統計學差異（P<0.01），TC和LDL-C濃度降低，但無統計學差異（P>0.05），可能是因為中劑量組所選用的劑量為人體劑量換算而成，劑量較為合適，所以效果明顯；也可能因為高劑量組大鼠在試驗過程中死亡較多，影響了試驗結果。在HDL-C濃度調節方面，本試驗未表現出相關性。李方蓮等對中藥掛金燈降血脂作用的研究結果顯示，HDL-C水平含量雖提高不明顯，但有上升趨勢[18]。張娜等在酸漿鮮果對試驗性高脂血癥大鼠的保護作用研究中認為，低劑量組大鼠血清HDL-C水平略有升高，但無統計學差異；而中、高劑量組升高明顯，且有統計學意義（P<0.05） [19]，其劑量已達到20 g/kg以上，超過本試驗的中劑量，這可能與劑量有關，也可能由在進行酸漿提取過程中使膳食纖維及一些營養成分損失而引起，但尹黎明等在大蒜燕麥及其復合物對高脂大鼠血脂水平和血液流變特性的影響的研究中提出，多數可降低TC、LDL濃度的膳食纖維對HDL沒有影響[20]。譚亮等在旱芹膳食纖維對高脂血癥大鼠血脂的影響的研究中提到，HDL-C濃度升高是因為高脂飼料使得血液中的TC和TG濃度升高，而促使體內生成更多 HDL-C 來轉運周圍組織中過多的膽固醇，防止高脂血癥的發生[21]。因此，酸漿對HDL-C水平的影響以及機理有待于進一步研究。

各組大鼠實質性臟器系數數據顯示，與模型組相比，酸漿低、中、高劑量組及藥物對照組大鼠的心臟、肝臟、腎臟和脾臟的臟器系數均有下降，但不完全有統計學差異；與正常組相比，模型組大鼠各實質性臟器系數均增高，但無統計學差異（P>0.05），說明酸漿可能通過調節機體內血脂水平來保護各實質性臟器，但由于臟器的病變及恢復是個較緩慢的過程，需要時間較長以及個體之間差異性等原因，本試驗中數據并未全部顯示有統計學差異。

從肝組織形態學變化中可以看出，正常組肝細胞索排列整齊規則，細胞中央有大而圓的核，細胞質均勻，肝細胞無變形；模型組肝細胞內可見大小不等、數量不一的脂滴空泡，肝細胞腫脹，體積變大，說明高脂模型大鼠建立成功。酸漿低、中、高劑量組肝細胞內也可見脂肪滴，但體積較小，數量較少，其中酸漿中、高劑量組肝細胞內脂肪滴體積明顯變小，密集排列；酸漿高劑量組脂肪滴密集地分布在肝細胞內，肝細胞排列緊密均勻，與辛伐他汀藥物對照組大鼠的相似，這與血脂水平指標效果略有不同，可能與血脂水平的測定影響因素較多，且易受影響，而組織形態學的變化較穩定有關，也可能是因為血脂水平的變動較敏感而組織的變化較緩慢。在試驗過程中，還對各組大鼠的體質量進行了監測，結果表明其他組大鼠體質量與模型組大鼠的體質量無統計學差異，說明酸漿不是通過降低體質量來調節血脂水平，即不具有減輕體質量的作用。

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各組大鼠實質性臟器系數數據顯示，與模型組相比，酸漿低、中、高劑量組及藥物對照組大鼠的心臟、肝臟、腎臟和脾臟的臟器系數均有下降，但不完全有統計學差異；與正常組相比，模型組大鼠各實質性臟器系數均增高，但無統計學差異（P>0.05），說明酸漿可能通過調節機體內血脂水平來保護各實質性臟器，但由于臟器的病變及恢復是個較緩慢的過程，需要時間較長以及個體之間差異性等原因，本試驗中數據并未全部顯示有統計學差異。

從肝組織形態學變化中可以看出，正常組肝細胞索排列整齊規則，細胞中央有大而圓的核，細胞質均勻，肝細胞無變形；模型組肝細胞內可見大小不等、數量不一的脂滴空泡，肝細胞腫脹，體積變大，說明高脂模型大鼠建立成功。酸漿低、中、高劑量組肝細胞內也可見脂肪滴，但體積較小，數量較少，其中酸漿中、高劑量組肝細胞內脂肪滴體積明顯變小，密集排列；酸漿高劑量組脂肪滴密集地分布在肝細胞內，肝細胞排列緊密均勻，與辛伐他汀藥物對照組大鼠的相似，這與血脂水平指標效果略有不同，可能與血脂水平的測定影響因素較多，且易受影響，而組織形態學的變化較穩定有關，也可能是因為血脂水平的變動較敏感而組織的變化較緩慢。在試驗過程中，還對各組大鼠的體質量進行了監測，結果表明其他組大鼠體質量與模型組大鼠的體質量無統計學差異，說明酸漿不是通過降低體質量來調節血脂水平，即不具有減輕體質量的作用。

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各組大鼠實質性臟器系數數據顯示，與模型組相比，酸漿低、中、高劑量組及藥物對照組大鼠的心臟、肝臟、腎臟和脾臟的臟器系數均有下降，但不完全有統計學差異；與正常組相比，模型組大鼠各實質性臟器系數均增高，但無統計學差異（P>0.05），說明酸漿可能通過調節機體內血脂水平來保護各實質性臟器，但由于臟器的病變及恢復是個較緩慢的過程，需要時間較長以及個體之間差異性等原因，本試驗中數據并未全部顯示有統計學差異。

從肝組織形態學變化中可以看出，正常組肝細胞索排列整齊規則，細胞中央有大而圓的核，細胞質均勻，肝細胞無變形；模型組肝細胞內可見大小不等、數量不一的脂滴空泡，肝細胞腫脹，體積變大，說明高脂模型大鼠建立成功。酸漿低、中、高劑量組肝細胞內也可見脂肪滴，但體積較小，數量較少，其中酸漿中、高劑量組肝細胞內脂肪滴體積明顯變小，密集排列；酸漿高劑量組脂肪滴密集地分布在肝細胞內，肝細胞排列緊密均勻，與辛伐他汀藥物對照組大鼠的相似，這與血脂水平指標效果略有不同，可能與血脂水平的測定影響因素較多，且易受影響，而組織形態學的變化較穩定有關，也可能是因為血脂水平的變動較敏感而組織的變化較緩慢。在試驗過程中，還對各組大鼠的體質量進行了監測，結果表明其他組大鼠體質量與模型組大鼠的體質量無統計學差異，說明酸漿不是通過降低體質量來調節血脂水平，即不具有減輕體質量的作用。

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