野菊花總黃酮清除自由基的活性研究

曹小燕++楊海濤

摘要：采用鄰二氮菲-Fe2+氧化法、鄰苯三酚自氧化和ABTS法，分別測定野菊花總黃酮對羥自由基

關鍵詞：野菊花；總黃酮；自由基；清除率；維生素C；檸檬酸

中圖分類號： R284.1文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）10-0307-03

收稿日期：2014-01-02

基金項目：陜西省教育廳專項科研計劃（編號：2013JK0680）；陜西理工學院校級人才啟動項目（編號：SLGQD13-1）。

作者簡介：曹小燕（1982—），女，河南開封人，博士，講師，主要從事有機化學研究。E-mail：ruoshuizhihan@163.com。野菊花（Chrysanthermum indicum L.）為菊科多年生草本植物菊花的頭狀花序，民間在秋季開花時采后涼干或曬干泡茶飲用，但更多的是藥用。野菊花富含酚酸、黃酮、萜類及揮發油等有效成分，具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等活性[1]。經調研發現，野菊花的主要活性成分為黃酮類化合物和綠原酸，黃酮類化合物具有抗癌、抑菌、抗氧化、抗衰老等作用[2]。野菊花黃酮的主要成分是蒙花苷和木犀草素，其中蒙花苷別稱野菊花黃酮苷，能有效抑制金黃色葡萄球菌和乙型溶血鏈球菌，并具有抑制磷酸二酯酶、醛糖還原酶和保肝的作用，對慢性氣管炎也有一定療效[3-4]；木犀草素具有抑菌活性，對黃嘌呤氧化酶具有較強的抑制活性，對cAMP-磷酸二酯酶的IC50值為79 μmol/L[5]。野菊花多糖具有清除活性氧自由基的作用[6]；其水提取物能夠有效地抑制紅細胞溶血，還可以提高體內抗氧化酶的活性[7]；其揮發油還能夠有效地清除DPPH·自由基[8-9]。

近年來，世界上掀起了植物藥開發的熱潮，植物藥以其天然、低毒的特點備受青睞，其中黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目。本試驗以乙醇為溶劑，研究野菊花總黃酮含量及自由基清除活性，為野菊花的生物活性研究及其開發利用提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料與儀器

野菊花采于陜西省漢中市褒河鎮；蕓香苷標準品（自制）；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、水楊酸、過氧化氫、硫酸亞鐵、無水乙醇、檸檬酸、維生素C 、碘化鉀、冰醋酸、三氯甲烷、淀粉、鐵氰化鉀、三氯化鐵、三氯乙酸、三羥甲基氨基甲烷、鄰苯三酚，均為市售分析純。

AL204-IC型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；722E分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；HHS-1數顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市金祥龍電子有限公司）；101A-1電熱鼓風干燥箱（中國重慶銀河試驗儀器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循環水式真空泵（河南省鞏義市英峪予華儀器廠）；CL-2型加熱磁力攪拌器（河南省鞏義市英峪予華儀器廠）；TGL-16C型臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）。

1.2試驗方法

1.2.1野菊花中總黃酮的提取取新鮮野菊花，烘干，粉碎。稱取野菊花粉末約5 g，加80 mL 95%乙醇回流提取2 h，抽濾。濾渣再加80 mL 95%乙醇，回流提取2 h，抽濾，合并2次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩25 mL左右為止，放置于 250 mL 容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液[10-11]。

1.2.2標準曲線的繪制精確稱取干燥至恒重的蕓香苷標準品20.0 mg，加乙醇溶解并定容至50 mL，配成0.4 mg/mL蕓香苷標準溶液。準確吸取標準品溶液0.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00、9.00 mL，分別加乙醇補至 10.00 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1.5 mL，搖勻，靜置6 min，加10%硝酸鋁溶液1.5 mL，搖勻，靜置6 min，加4%氫氧化鈉溶液 15 mL，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，在波長 510 nm 處測定吸光度，以蕓香苷濃度（mg/mL）為橫坐標，吸光度（D）為縱坐標，繪制標準曲線[12]。

1.2.3野菊花總黃酮含量的測定精確吸取樣品液 0.50 mL，置于10 mL容量瓶中，根據標準曲線的制備方法測定吸光度D，線性回歸計算野菊花中總黃酮的含量C[13]。

2.6野菊花總黃酮還原能力的測定結果

測定野菊花的還原力，實質上是檢驗野菊花是否為良好的電子供應者，進一步證實野菊花為良好的自由基清除劑。抗氧化劑是通過自身的還原作用給出電子，從而清除自由基，還原力越強，自由基清除活性越強，抗氧化性越強，因此可通過測定還原力來說明其抗氧化活性的強弱。本試驗中利用野菊花總黃酮被鐵氰化鉀氧化來表征還原力，700 nm處的吸光度越大，還原力越強。由圖4可知，隨著樣品濃度升高，野菊花和維生素C于700 nm處的吸光度逐漸增大，并且存在良好的線性關系，表明其還原能力逐漸增強；野菊花總體還原能力優越于常規抗氧化劑維生素C，進一步解釋了野菊花為什么具有較強的自由基清除活性，也進一步證實了野菊花是良好的自由基清除劑；檸檬酸總體還原能力幾乎為0，證實其為什么具有較弱的自由基清除活性。

3結論

本研究通過乙醇提取、蕓香苷標定，確定野菊花提取液的總黃酮含量為0.25 mg/mL。野菊花具有較強的還原能力，對·OH、O-2· 和ABTS+·都具有良好的清除活性，清除效率優于常規抗氧化劑維生素C和檸檬酸，清除·OH、O-2· 和ABTS+·的EC50值分別為0.016、0.012 mg/mL和 6.95 μg/mL。野菊花資源豐富，分布廣泛，本研究證實其為良好的自由基清除劑，為野菊花的生物活性研究和資源開發提供了理論依據。

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