郭氏接骨靈對橈骨不完全性骨折家兔血清堿性磷酸酶及骨痂中鈣、磷的調(diào)節(jié)

唐華羽

（佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003）

骨折是骨遭到外力破壞后其連續(xù)性和完整性中斷，是最常見的骨科疾病之一。郭氏家族是較著名的中醫(yī)世家，尤其在外傷有獨(dú)特的建樹。郭氏接骨靈是由郭氏祖?zhèn)鳎瑢Ψ鬯樾怨钦郏钦鄄挥系扔写龠M(jìn)作用。由于該方秘傳，故缺乏系統(tǒng)的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，物性及臨床研究資料，使該藥目前尚停留于經(jīng)驗(yàn)用藥階段。本研究旨在通過系統(tǒng)的臨床前研究和臨床試驗(yàn)，為該藥的開發(fā)推廣提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為爭取申請新藥奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動物來源與分組

采用貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供一級新西蘭家兔40只，體重1.2～2.05kg，雌雄各半，隨機(jī)分為正常對照組、陰性對照組、陽性對照組（傷科接骨片組）、接骨靈膠囊低劑量組、接骨靈膠囊高劑量組，每組8只。

1.2 藥物與試劑

1.2.1 藥物

慶大霉素：上海信宜制藥總廠。郭氏接骨膠囊：自制。傷科接骨片：上海信宜制藥總廠。

1.2.2 試劑

堿性磷酸酶試劑盒：美國貝克曼庫爾特公司。10%三氯乙酸溶液：安徽聯(lián)誼藥業(yè)股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 骨折家兔制備

取32只家兔用3%戊巴比妥1mL／kg靜脈麻醉，無菌條件下手術(shù)分離家兔雙前肢橈骨，以雙層鋼鋸造成雙側(cè)橈骨中下段不完全性骨折，骨折處寬約3mm，深度為橈骨直徑的1／2。縫合皮下組織及皮膚，肌注慶大霉素4萬U 抗感染。X線片證實(shí)造模成功，造模后分為陰性對照組、陽性對照組、接骨膠囊低劑量組、接骨膠囊高劑量組每組8只。

1.3.2 治療

術(shù)后一周后藥物治療。陰性對照組常規(guī)喂養(yǎng)；接骨靈膠囊低劑量、高劑量組分別按照0.45g／kg與0.90g／kg體重將藥物拌入飼料給藥；陽性對照組給傷科接骨片0.42g／kg體重拌入飼料喂養(yǎng)。于上午禁食4h后喂含藥飼料，家兔通常于2h內(nèi)吃完含藥飼料，再給予普通飼料。術(shù)后每周稱體重一次，并根據(jù)體重調(diào)整給藥量。

1.3.3 指標(biāo)檢測

于造模后第10天、20天及30天乙醚麻醉家兔后頸靜脈取血2mL，離心取血清置-70℃保存統(tǒng)一測定血清AKP。于第30天處死全部家兔，離斷腕關(guān)節(jié)取完整左側(cè)橈骨，剔除附著的軟組織低溫干燥至恒重，用10%三氯乙酸水解骨痂，每10mg干樣加3mL三氯乙酸，水解三次并合并水解液。用EDTA 絡(luò)合滴定法測定骨痂中Ca含量；用硫酸亞鐵磷鉬藍(lán)比色法測定P含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS17.0 統(tǒng)計軟件，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，統(tǒng)計結(jié)果顯著性以P＜0.05表示。

2 結(jié)果

2.1 血清堿性磷酸酶結(jié)果分析

接骨膠囊低劑量組和高劑量組均能提高血清堿性磷酸酶水平，且高劑量組作用優(yōu)于低劑量組。說明郭氏接骨靈能夠促進(jìn)血清中堿性磷酸酶的合成與釋放。見表1。

表1 接骨膠囊對骨折家兔血清堿性磷酸酶影響（±s，mmol／L）

表1 接骨膠囊對骨折家兔血清堿性磷酸酶影響（±s，mmol／L）

注：＊與正常對照組相比P＜0.05；＊ 與陽性對照組、低劑量及高劑量組相比P＜0.01；☆△ 與陽性對照組相比P＞0.05；☆ 與高劑量組相比P＜0.05。

2.2 骨痂中Ca及P的結(jié)果分析

陽性對照組、接骨靈低劑量組和高劑量組骨痂中的鈣磷含量與陰性對照組相比均增高（P＜0.01），說明傷科接骨片和接骨靈膠囊均有增加骨痂中鈣磷含量的作用。接骨靈低劑量組與高劑量組相比（P＜0.05），說明高劑量組的作用強(qiáng)于低劑量組。見表2。

表2 接骨膠囊對骨折家兔骨痂中Ca及P的影響（±s，mmol／L）

表2 接骨膠囊對骨折家兔骨痂中Ca及P的影響（±s，mmol／L）

注：＊與正常對照組相比P＜0.05；＊ 與陽性對照組、低劑量及高劑量組相比P＜0.01；☆△ 與陽性對照組相比P＞0.05；☆ 與高劑量組相比P＜0.05。

3 討論

骨折愈合及修復(fù)是一個極其復(fù)雜的生物學(xué)過程，受到許多因素的影響。在骨折的修復(fù)、愈合過程中骨基質(zhì)中的礦物質(zhì)成分起到了重要的用。研究證實(shí)，成骨細(xì)胞分泌的AKP可作為觀察骨折愈合的指標(biāo)，可代表骨重建和成骨細(xì)胞活動性增強(qiáng)的指標(biāo)［1］。本實(shí)驗(yàn)中，陰性對照組家兔血清AKP 的水平在第10天時結(jié)果明顯低于正常對照組，這是由于骨膜受損，成骨細(xì)胞分泌AKP能力下降而使其低于正常水平［2］。但是，由于機(jī)體有自我修復(fù)能力，雖未經(jīng)任何藥物治療，其水平在第20天、30天時也有一定的升高，說明成骨細(xì)胞分泌功能活躍，AKP水平升高。在低劑量組和高劑量組治療期間，第10天、20天及30天時兩組AKP含量就明顯升高，但是低劑量組升高沒有高劑量組明顯，說明高劑量組效果更好。這是由于接骨膠囊中的成分能活血化瘀、刺激成骨細(xì)胞分泌活動增強(qiáng)，使血清中AKP的濃度明顯升高，促進(jìn)骨折修復(fù)與愈合。同時觀察第30天時骨痂中Ca、P的變化發(fā)現(xiàn)，在接骨膠囊低劑量及高劑量組Ca、P明顯高于陰性對照組，說明藥物治療有效。Ca、P沉積形成的鈣鹽對骨痂的形成有益，不斷進(jìn)行鈣化沉積，不斷骨化，可以不斷編織骨的形式形成新骨，Ca、P升高能促進(jìn)骨折愈合［3］。本藥目前尚停留于經(jīng)驗(yàn)用藥階段，故缺乏系統(tǒng)的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，還需進(jìn)一步研究提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］Lian JB，Gunderg CM.Osterocalcin.Biochemical consideration and clinical applications［J］.Clin Orthop Rel Res，1987，226（2）：267-270

［2］Khandwala HM，Mumm S，Whyte MP.Low serum alkaline phosphatase activity and pathologic fracture：case report and brief review of hypophosphatasia diagnosed in adulthood［J］.Endocr Pract，2006，12（6）：676-681

［3］董華，胡乃武.骨痛仙膠囊對家兔骨折血清堿性磷酸酶、鈣、磷影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2003，31（2）：51-52