HPLC法測定珍龍醒腦膠囊中西紅花的含量

任松鵬 孫緒丁 趙延霞 魏永義

[摘要] 目的 建立藏藥珍龍醒腦膠囊中西紅花的西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的高效液相色譜法（HPLC）含量測定方法。方法 Waters C18色譜柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm），流動相為乙腈-體積分數比1%冰醋酸水溶液（25∶75）；流速為1.0 mL/min，檢測波長440 nm，柱溫為室溫。結果 西紅花苷Ⅰ在6.03～60.30 μg/mL，西紅花苷Ⅱ在3.01～30.10 μg/mL濃度范圍內均與色譜峰峰面積呈良好的線性關系，相關系數r分別為0.9997、0.9999；西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的平均回收率分別為97.80%、97.44%，RSD分別為0.66%（n=6）、1.71%（n=6）。結論 該方法可同時測定制劑中的西紅花苷Ⅰ、Ⅱ，可用于珍龍醒腦膠囊的質量控制。

[關鍵詞] 珍龍醒腦膠囊；西紅花苷Ⅰ；西紅花苷Ⅱ；HPLC；含量測定

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）02（b）-0020-02

珍龍醒腦膠囊由珍珠、天竺黃、西紅花、丁香、肉豆蔻等29味藏藥制成的藏藥成方制劑，具有開竅醒神、消熱通絡的作用，西紅花為該制劑處方中的君藥，具有很強的中樞降壓、抗炎和治療軟組織損傷的藥理活性[1-2]，其因此控制方中西紅花所含西紅花苷含量變得尤為重要。而現行標準[3]未對西紅花進行質量控制，也尚未發現關于珍龍醒腦膠囊中的西紅花測定的文獻報道。為了更加有效的控制該制劑的質量，該研究首次建立了珍龍醒腦膠囊中西紅花的兩種西紅花苷類成分西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的HPLC含量測定方法，經方法學考察，結果表明：該方法具有良好的分離效果、較高的靈敏度、方便快捷、準確可靠等優點，能夠更加有效的控制珍龍醒腦膠囊的質量。現報道如下。

1 儀器

高效液相色譜儀：日立L-2100型泵，日立L-2400紫外檢測器；電子天平：島津AUW220D型；紫外分光光度計：島津UV-2450型；超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司KQ-300B。

2 方法與結果

2.1 測定溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取西紅花苷Ⅰ、西紅花苷Ⅱ適量加稀乙醇制成，每1 mL中含西紅花苷Ⅰ30 μg、西紅花苷Ⅱ15 μg的對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 本品研細后，取粉末0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，避光，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，冰浴中超聲30 min，放至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。同法制得西紅花陰性對照溶液。

2.2 色譜條件及系統適應性試驗

色譜柱為Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈- 1%冰醋酸（25∶75），流速為1.0 mL/min，檢測波長440 nm；分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL，測定。結果表明：西紅花苷Ⅰ、Ⅱ與其它組分的分離度均>1.5；陰性對照不干擾樣品測定。

2.3 線性關系考察

精密量取不同濃度西紅花苷Ⅰ、Ⅱ混合溶液，依上述“2.2”項的色譜條件進行測定，以色譜峰峰面積（A）分別對西紅花苷Ⅰ、Ⅱ對照品濃度（C）進行線性回歸。結果表明：西紅花苷Ⅰ在6.03～60.30 μg/mL，西紅花苷Ⅱ在3.01～30.10 μg/mL濃度范圍內均與色譜峰峰面積呈良好的線性關系，相關系數r分別為0.999 7、0.999 9。

2.4 精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液，依上述“2.2”項的色譜條件進行測定，連續進樣測定6次，計算峰面積相對標準偏差RSD%=1.05%，結果表明：儀器精密度良好。

2.5 穩定性試驗

取“2.1.2”項的方法制備供試品溶液，依法測定，記錄峰面積，以后每隔2 h測定1次，考察8 h，結果表明：供試品溶液中的西紅花苷Ⅰ、Ⅱ在8 h內測定結果穩定。

2.6 重復性試驗

精密稱取同一批珍龍醒腦膠囊樣品6份，依上述“2.1.2”項的方法制備供試品溶液，依上述“2.2”項的色譜條件進行測定，結果表明：該分析方法重復性良好。

2.7 加樣回收率試驗

別精密稱取珍龍醒腦膠囊樣品6份，置具塞的錐形瓶中，各精密加入混合對照品溶液適量，按“2.1.2”項下的供試品制備方法制成供試品溶液，按照“2.2”項下的色譜條件進行測定，試驗結果：供試品中西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的平均回收率分別為97.80%、97.44%，RSD分別為0.66%、1.71%。

2.8 樣品含量測定

取珍龍醒腦膠囊3批樣品，依上述“2.1.2”項的方法制備供試品溶液，按照“2.2”項下的色譜條件進行測定，按外標法分別計算供試品中西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的含量，見表1。

3 討論

參考相關文獻[4-5]，對供試品溶液的制備方法進行了研究，結果表明：采用甲醇為提取溶劑提取西紅花苷Ⅰ、Ⅱ含量結果較高；常溫超聲比冰浴超聲西紅花苷Ⅰ、Ⅱ含量低，故未進行回流提取試驗；提取時間20 min、30 min、40 min西紅花苷Ⅰ、Ⅱ含量結果一致，為保證提取完全，選擇提取時間30 min。故最后確定的提取方法為甲醇冰浴超聲30 min提取。

參考相關文獻[4-5]，對色譜系統進行篩選，乙腈- 1%冰醋酸體系作為檢測珍龍醒腦膠囊中西紅花苷Ⅰ、Ⅱ的流動相，而且乙腈-冰醋酸 （15～30∶85～70）均能達到含量檢查要求，其中以乙腈- 1%冰醋酸 （25∶75）條件下效果最好，西紅花苷Ⅰ、Ⅱ保留時間分別約為5.3 min、9.9 min，峰形較好。

[參考文獻]

[1] 劉瑛，古天明，周紅.西紅花苷類成分藥理作用研究概況[J].成都大學學報：自然科學版，2008（1）：16-19 .

[2] 孫創斌，劉艷霞，劉國清，等.西紅花的藥理研究進展[J].西南國防醫藥，2011，21（8）：914-916.

[3] 國家食品藥品監督管理局.中華人民共和國藥品標準WS-10708（ZD-0708）-2002-2012Z[S].北京：國家食品藥品監督管理局.

[4] 梁華正，丁武輝，袁東香，等.梔子中西紅花苷Ⅰ和西紅花苷Ⅱ的高效液相色譜法測定[J].時珍國醫國藥，2012（10）：2386-2388.

[5] 何常明，謝曉梅，何美蓮，等.西紅花中西紅花苷-1和西紅花苷-2含量測定方法的建立[J].藥物分析雜志，2006（9）：1270-1273.

（收稿日期：2014-01-05）