基層醫(yī)院TPPA與RPR聯合檢測對梅毒患者的診治價值

金淑芳

(薊縣人民醫(yī)院檢驗科,天津 薊縣301900)

梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的慢性全身性性傳播疾病。近年來，在全球范圍內發(fā)病率逐年提高，且有不斷蔓延的趨勢，尤其在東南亞等發(fā)展中國家發(fā)病率更高[1]。梅毒早期的臨床表現比較復雜，呈多樣性，再加上有些患者陳述的病史缺乏真實性及不正當的使用抗生素，給醫(yī)生的診斷造成困擾，容易造成漏診或誤診。因此，血清學檢查就成了梅毒診斷的重要依據。梅毒螺旋體感染人體后，體內能產生兩種類型的抗體，一類是針對梅毒螺旋體產生的特異性抗體-IgG和IgM；另一類是非特異性抗體-反應素，是梅毒螺旋體感染后宿主細胞釋放的類脂質和螺旋體表面脂質的抗體。本組對370例疑似梅毒患者的血清分別進行梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗 (treponema pallidum particle assay，TPPA)和快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗(rapid plasma reagin circle card test，RPR)， 以探討二者聯合檢測在梅毒的診斷、療效觀察和判斷預后方面的價值。

1 資料與方法

1.1 標本來源 370份血清標本采自2012年1月至2013年3月首次來本院皮膚性病科、泌尿外科和婦科門診就診的疑似梅毒患者。其中男179例，年齡 18～59歲，女 191例，年齡 17～60歲。

1.2 儀器與試劑 微量震蕩儀，RPR旋轉儀，TPPA試劑為日本富士瑞必歐株式會社生產，RPR試劑為上海科華生物技術有限公司產品，所有試劑均在有效期內使用。

1.3 方法 所有試驗均嚴格按照廠家試劑說明書進行操作，每次試驗均設陰陽性對照。

1.3.1 TPPA試驗 室溫條件下，在U形板上用稀釋液將每份血清樣本倍比稀釋，分別形成1:5、1:10、1:20、1:40共4種稀釋度，再將未致敏與致敏明膠顆粒試劑分別加入1:20和1:40的稀釋血清中，震蕩混勻30s，靜置2h后觀察結果，加致敏粒子孔凝集而加未致敏粒子孔不凝集判斷為陽性。

1.3.2 RPR試驗 RPR定性試驗：分別吸取50μl梅毒陽性對照和陰性對照均勻鋪加在紙卡的兩個圓圈中，另吸取50μl待檢血清均勻鋪加在紙卡的另一圓圈中，用試劑盒中的專用針頭、滴管吸取RPR試劑，分別垂直滴加1滴于上述血清和對照中，用RPR旋轉儀水平轉動紙卡8min，l00r／min，然后3min內在光線充足處判斷結果。RPR定量試驗：對檢測樣本進行倍比稀釋，然后按定性試驗方法進行檢測，以最大稀釋倍數凝集處作為最終滴度。

2 結果

370例疑似梅毒患者的血清標本中，TPPA陽性129例，陽性率為34.86%(129/370)；RPR陽性80例，陽性率為21.62%(80/370)。見表1。

表1 TPPA法與RPR法檢測結果比較

3 討論

梅毒螺旋體感染人體后，特異性抗體IgM產生最早，約在感染后2周即可出現，隨著疾病發(fā)展，lgG抗體才慢慢上升，經過有效治療后IgM抗體消失，而IgG抗體則持續(xù)存在，甚至終身不消失，血清反應持續(xù)陽性。而非特異性抗體的出現較特異性抗體約晚 2～3周[2]。TPPA用梅毒螺旋體Nichols株的精制菌體成分包被在明膠粒子上作抗原，能同時檢測IgG型和IgM型抗體，敏感度高，其發(fā)生的非特異性凝集可通過作吸收試驗后復檢排除，特異性好，感染早期(2～4周)即可檢出，是目前公認的梅毒血清確認試驗。RPR試驗操作簡單、快速，抗體效價隨著病情的變化而變化，與梅毒的活動性和患者的臨床癥狀密切相關，當梅毒患者接受治療或疾病處于非梅毒活動期時，RPR水平會迅速下降或消失，容易出現假陰性反應，造成漏檢。在某些自身免疫性疾病，如系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎等，RPR還容易出現假陽性反應[3]。因此，RPR不適合作為梅毒的篩選試驗。

本組資料中，TPPA陽性的129例患者經臨床綜合分析最后均診斷為梅毒現癥感染者或既往梅毒感染者。而RPR試驗的陽性率(21.62%)明顯低于TPPA(34.86%)。在TPPA陽性RPR陰性的49例患者中，有19例為梅毒感染的早期，在之后復診時RPR出現陽性，并且隨著病情發(fā)展，RPR的滴度呈現上升的趨勢；有24例為治療后轉陰；還有6例為以前感染過梅毒，近期又有不潔性接觸史而來復診。有1例29歲女性患者，在治療過程中，RPR 滴度依次出現 1:2，1:4，1:8，1:32，1:16，1:4，1:2這樣明顯的峰值變化，又過2個月后RPR滴度卻出現了1:16這樣的變化，臨床分析可能為再感染或復發(fā)。可見RPR及滴度的檢測適用于梅毒患者的療效觀察以及判斷是否復發(fā)或再感染。在檢測中未發(fā)現RPR陽性而TPPA陰性的患者，可能與本組選擇的患者人群有關。

文獻報道，用ELISA方法檢測梅毒患者血清中的特異性抗體與TPPA法結果有較好的一致性，且試劑成本較低、操作簡便，可使用全自動酶標儀實現自動化操作，適合大批量標本梅毒的篩查，但ELISA方法存在假陰性反應。TPPA法由于試劑成本高、操作煩瑣、耗時較長不適合大量標本的篩查，主要用于確診試驗[4]。正是由于TPPA的敏感度高，特異性好，試劑穩(wěn)定，不需要專門儀器，肉眼觀察判斷結果等特點，更適用于標本量較少的基層醫(yī)院對梅毒患者的直接篩選和確認。

RPR和TPPA同時檢出陽性的患者往往是梅毒現癥感染者，是臨床上可開展治療的指標之一，本組資料也證明了這一點。但還需要根據臨床癥狀、體征及不潔性行為史綜合確診。尤其是老年患者，由于可能存在基礎性疾病，誘導機體產生抗梅毒螺旋體的特異性或非特異性抗體，造成TPPA和RPR試驗出現假陽性反應。因此，在否認發(fā)病史和疾病接觸史的老年人中，梅毒抗體試驗陽性不能用正在或曾經感染梅毒解釋，陽性結果不能作為患者感染梅毒螺旋體的絕對依據，應結合臨床綜合分析。梅毒的治療需要患者的性伴侶同時檢測同時進行足劑量、足療程治療，才能達到真正的治愈。本組資料中1例29歲女性患者的治療過程就說明了這一點。

綜上所述，由于基層醫(yī)院門診患者數量相對較少，對疑似梅毒患者血清直接做TPPA和RPR試驗，減少了ELISA法的篩查步驟，可以縮短檢測時間方便患者就診。TPPA和RPR同時陽性有助于梅毒患者的診斷，RPR滴度測定有助于梅毒患者療效觀察和判斷預后。

[1]Srisupanant M，Wiwanitkit V.Screening for syphilis by serology of Thai workers going abroad[J].Travel Med Infect Dis,2009,7(3)：169-170．

[2]陳剛.梅毒血清學試驗中特異性抗體與非特異性抗體檢測的臨床應用[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志,2008,7(2):59.

[3]李愛民,劉斌,蔡峰.3種梅毒血清學檢測方法的應用評價[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2011,32(15):1718-1719.

[4]黎新桂,周紅翠,尹承祥.三種梅毒血清試驗方法的應用評估[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2012,30(3):276-277.