文冠木中楊梅素的含量測定＊

楊巧荷，李樹明，董 玉

(內蒙古醫科大學藥學院，內蒙古 呼和浩特 010059)

文冠木 Xanthoceras sorbifolia Bunge為無患子科文冠果屬文冠果的干燥莖枝，分布于東北、華北、西北等地，主產于內蒙古，蒙藥名稱西拉·森登，能祛風濕、消腫止痛、斂干黃水，臨床用于治療風濕性關節炎、風濕內熱、皮膚風濕等癥[1]。文冠木中含有黃酮、香豆素及其苷類化合物[2]。楊梅素為其主要成分，楊梅素大劑量給藥時具有祛風除濕、溫經止痛、活血通絡等功效。楊梅素外用可明顯抑制大鼠佐劑性關節炎致炎局部的早期炎性反應，可明顯抑制角叉菜膠所致大鼠足趾的炎性反應，減輕大鼠尿酸鈉關節炎的致痛程度，并可抑制慢性肉芽腫的形成[3]。楊梅素在體內具有抗菌和抗炎活性，對金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、A型溶血性鏈球菌的感染受試小鼠有不同程度保護作用;對二甲苯致小鼠耳腫脹及瓊脂致大鼠肉芽腫形成均有一定抑制作用[4]。為此，筆者確定以主要有效成分楊梅素的含量來控制文冠木的內在質量。

1 儀器與試藥

Hitachi L2000型高效液相色譜儀，Ezchrom EliteTMClient/Server for Hitachi軟件系統;Sartorius－BS224S型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統公司);KQ－250DE型數控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。楊梅素對照品(自制，采用峰面積歸一化法測定，其含量為99．36%);文冠木藥材飲片(內蒙古天力藥業有限責任公司，產地為內蒙古，批號分別為20060915，20070803，20071012，經內蒙古醫學院藥學院喬俊纏教授鑒定為文冠木 Xanthoceras sorbifolia Bunge的干燥莖);甲醇(Sigma－Aldrich)為色譜純;蒸餾水(屈臣氏)。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱:Kromasil ODS C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:甲醇 － 水 － 冰醋酸(65 ∶35 ∶0．1);流速:1．0 mL/min;檢測波長:300 nm;柱溫:30℃。在此色譜條件下，蘆丁和楊梅素分離度良好，并與其他成分能達到基線分離。

2．2 溶液制備

稱取文冠木藥材6 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，乙醇回流提取2次，每次趁熱用棉花粗濾，合并2次的提取液，回收溶劑定容至10 mL，得供試品貯備溶液。精密量取文冠木提取液1．0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0．45 μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。精密稱取以五氧化二磷干燥至恒重的楊梅素對照品4．6 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質量濃度為0．184 mg/L的楊梅素貯備液;精密吸取楊梅素貯備液2．0 mL置10 mL容量瓶，用甲醇稀釋至刻度，即得每1 mL中含楊梅素0．0 368 mg的對照品溶液。

2．3 方法學考察

線性關系考察:分別精密吸取對照品溶液 5，10，15，20，25 μL，按擬訂色譜條件進樣測定峰面積。以色譜峰面積(Y)為縱坐標、對照品進樣量(X)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=183 303．804 3 X －505．100 0，r=0．999 9(n=5)。結果表明，楊梅素進樣量在0．184～0．920 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:精密吸取同一供試品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，連續測定5次，記錄其峰面積。結果的 RSD為1．44%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:精密吸取供試品溶液20 μL，分別在制備后0，1，2，3，5，6，7 h 時進樣，測定峰面積。結果的 RSD 為 2．87%(n=7)，表明供試品溶液在7 h內穩定。

重復性試驗:分別取同一批供試品，按擬訂方法重復制備樣品5次，進樣測定。結果楊梅素含量平均值為0．083 2%，RSD為2．30%，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:取文冠木約3 g(楊梅素的含量為0．083 2%)共6份，精密稱定，分別精密加入含楊梅素為0．282 g/L的對照品溶液1．0 mL，置10 mL容量瓶中，按擬訂方法制備供試品溶液，在擬訂色譜條件下測定，計算回收率。結果見表1。

表1 楊梅素加樣回收試驗結果(n=6)

2．4 樣品含量測定

按照樣品制備方法，分別用文冠木藥材制備3批樣品溶液，每個提取物分別精密稱取5份樣品，依法制備，按擬訂色譜條件進樣測定。結果批號分別為401005732，401005311，601000186的3批樣品中，楊梅素平均含量分別為0．067 2%，0．085 7%，0．084 0%。

3 討論

本課題組前期對文冠木化學成分[5]進行初步研究，并制訂其中總黃酮含量的測定方法[6]。本試驗建立其中活性指標性成分楊梅素的含量測定方法，以更好地控制文冠木的質量。

楊梅素為自制，采用反復硅膠加壓柱色譜法、Sephadex LH－20色譜法及重結晶方法進行分離，可有效地與其他成分分開，得到楊梅素對照品。本研究首次采用高效液相色譜法測定文冠木提取物中楊梅素的含量，選擇流動相為甲醇－水－冰醋酸(65∶35∶0．1)，結果楊梅素在10～30 min之間出峰，能與其他成分達到基線分離，并分別對精密度、穩定性、重現性和回收率進行了考察。該方法準確可靠，操作簡單，回收率合格，可作為文冠木質量控制的方法。

[1]衛生部生物制品檢定所，云南省藥品檢驗所．中國民族藥志(第一卷)[M]．北京:人民衛生出版社，1984:130．

[2]張文霞，包文芳．文冠木化學成分的研究[J]．藥學學報，2000，35(2):124－127．

[3]李小萬，司學玲，于占華，等．楊梅素抗類風濕性關節炎作用研究[J]．中國醫藥指南，2011，9(25):212 －214．

[4]張莉靜，王明謙．楊梅素體內抗菌抗炎藥效學研究[J]．時珍國醫國藥，2010，21(12):3 221 －3 222．

[5]董 玉，王宏偉，陳朝軍，等．文冠木化學成分的研究[J]．北京中醫藥大學學報，2008，31(12):844－846．

[6]董 玉，王愛民，陳朝軍，等．文冠木中總黃酮的含量測定方法研究[J]．內蒙古醫學院學報，2008，30(5):364 －366．