膠乳增強(qiáng)免疫比濁法試劑盒測(cè)定胰島素的性能評(píng)價(jià)

安徽省涇縣人民醫(yī)院（242500）郭喜

胰島素是由胰島β細(xì)胞所分泌的蛋白質(zhì)類激素，是人體內(nèi)唯一降低血糖的激素，同時(shí)促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成。胰島素測(cè)定可以反映胰島素細(xì)胞的貯存和分泌情況，臨床常用于作為診斷糖尿病和區(qū)分糖尿病類型的最可靠方法[1][2][3]。

目前臨床實(shí)驗(yàn)室常用的胰島素測(cè)定方法主要是化學(xué)發(fā)光法、ELISA法?；瘜W(xué)發(fā)光法由于設(shè)備和試劑成本較高，臨床常作為最后確認(rèn)使用，而ELISA法由于過(guò)程繁瑣，結(jié)果一般為定性，臨床使用有限。膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定胰島素是將抗體標(biāo)記在納米級(jí)膠乳的表面，血清中的胰島素與試劑中的抗體在液相中相遇，即結(jié)合成抗原-抗體復(fù)合物，產(chǎn)生一定濁度，膠乳顆粒可以相應(yīng)的增大該濁度變化。通過(guò)與相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線做對(duì)照，可以由濁度變化計(jì)算得出血清中胰島素的濃度。筆者從準(zhǔn)確度、精密度、線性、穩(wěn)定性、抗干擾能力和相關(guān)性對(duì)美迪生物的膠乳增強(qiáng)免疫比濁法胰島素測(cè)定試劑盒【注冊(cè)號(hào)：浙食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2012第2400072號(hào)，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：YZB/浙3033-2012】進(jìn)行了評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

附表1 批內(nèi)胰島素測(cè)定結(jié)果（n＝36）

附表2 批間胰島素測(cè)定結(jié)果（n＝108）

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來(lái)源 收集本院內(nèi)分泌科住院病人EDTA抗凝血，共30份，標(biāo)本在采集后2h內(nèi)檢測(cè)完畢。標(biāo)本于-80℃保存待用。

1.1.2 儀器、試劑和應(yīng)用參數(shù) ①檢測(cè)系統(tǒng)一：AXSYM雅培全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀及其胰島素配套試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品；②檢測(cè)系統(tǒng)二：BS400邁瑞全自動(dòng)生化分析儀，胰島素測(cè)定試劑（膠乳增強(qiáng)免疫比濁法，美迪生物）、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品；應(yīng)用參數(shù)：試劑一（200μl）、試劑二（40μl）、樣本量（8μl）、主波長(zhǎng)（600nm）、測(cè)定方法（速率法）、孵育時(shí)間（300s）、延遲時(shí)間（60s）、反應(yīng)時(shí)間（120s）、反應(yīng)方向（正反應(yīng)）、定標(biāo)方式（兩點(diǎn)線性）。

1.2 方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用Microsoft Excel2007，SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件?；貧w分析采用Passing-Bablok回歸，回歸線性檢測(cè)采用Cusum方法檢測(cè)，P＜0.05表示線性回歸偏倚有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)，P＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)與結(jié)果

附圖1 胰島素線性試驗(yàn)圖

附圖2 美迪生物和雅培化學(xué)發(fā)光的結(jié)果比較

2.1 準(zhǔn)確度 采用中國(guó)藥品生物制品檢定所人單峰胰島素對(duì)照品（批號(hào)：0526-9501）配置成四個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)（S12.5μIU/ml、S210μIU/ml、S350μIU/ml、S4100μIU/ml），采用胰島素膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定試劑盒在BS400全自動(dòng)生化分析儀上測(cè)定三次，結(jié)果均在標(biāo)示值的±10%內(nèi)，符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.2 精密度 隨機(jī)選取胰島素水平為≤3μIU/ml（A1）、3～23μIU/ml（A2）、23～50μIU/ml（A3）、≥100μIU/ml（A4）的4個(gè)樣本，分別混勻后分裝于子彈頭，于-80℃保存。測(cè)定時(shí)重新溶解測(cè)定，上、下午各檢驗(yàn)3次，三批不同試劑連續(xù)檢測(cè)6d。批內(nèi)結(jié)果見(jiàn)附表1，批間結(jié)果見(jiàn)附表2。

2.3 線性 選取兩份足量的濃度分別為0.31、108.62μIU/ml血清樣本，按以下表格比例混合后用以上試劑盒重復(fù)測(cè)定三次，取平均值為實(shí)測(cè)值為Y，理論值為X，用SPSS13.0軟件擬合方程，結(jié)果Y＝0.9771X-0.2012，R2＝0.9993。見(jiàn)附圖1。

2.4 干擾試驗(yàn) 取一份胰島素濃度11.2μIU/ml的血清樣本，分別加入高濃度的膽紅素、血紅蛋白脂濁、類風(fēng)濕因子以獲得干擾樣本，用同樣的方法加入0.9%生理鹽水為對(duì)照樣品，每個(gè)樣品按照隨機(jī)次序測(cè)定10次，得出干擾樣品和對(duì)照樣品各自的X并計(jì)算干擾率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在膽紅素≤20mg/dl、血紅蛋白≤450mg/dl、脂濁≤1550、類風(fēng)濕因子≤450IU/ml時(shí)，測(cè)定偏差控制在5%，對(duì)本檢測(cè)方法無(wú)明顯干擾。

2.5 回收試驗(yàn) 在胰島素濃度為11.2μIU/ml和58.6uIU/ml的2份血清樣本中，分別加入47.4μIU/ml的標(biāo)準(zhǔn)品，其回收率為96.6%～98.4%，平均為97.5%。

2.6 方法學(xué)比較 隨機(jī)取本院內(nèi)分泌科住院病人20例血清，分別用美迪生物和雅培化學(xué)發(fā)光axsym的胰島素測(cè)定試劑盒同時(shí)測(cè)定，測(cè)定順序1-10，10-1，數(shù)據(jù)見(jiàn)附圖2。相關(guān)方程為Y＝0.982X＋3.2655，相關(guān)系數(shù)（R2）＝0.991，表明美迪生物和雅培化學(xué)發(fā)光的結(jié)果之間有較高的相關(guān)性。

2.7 參考范圍 體檢無(wú)肝、膽、胰、腎、肺和心腦血管疾病，血清血糖功能試驗(yàn)正常的健康成人，空腹采血，置不含添加劑的潔凈玻管內(nèi)，待血液凝固分離血清，剔除溶血和脂濁血清，2h內(nèi)完成測(cè)定。共獲得血清200份，每份血清測(cè)定一次，剔除離群值1份，剩余199份（男101、女98）測(cè)定結(jié)果用百分位數(shù)法求得P2.5～P97.5參考范圍為：血清3.0～23.0μIU/mL。

3 討論

血清胰島素測(cè)定方法可以分為兩類：非免疫分析法和免疫分析法。非免疫分析法包括同位素稀釋法、高效液相色譜法等；免疫分析法包括放射免疫法、酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光免疫法和膠乳增強(qiáng)免疫比濁法。特別是放射免疫法和化學(xué)發(fā)光免疫法已經(jīng)應(yīng)用較為成熟，但都需要較為昂貴的放射免疫和化學(xué)發(fā)光設(shè)備。

美迪生物科技有限公司開(kāi)發(fā)的膠乳增強(qiáng)免疫比濁法血清胰島素測(cè)定試劑盒，由于采用高純單克隆抗體作為標(biāo)記原料，與胰島素原幾乎沒(méi)有交叉反應(yīng)，測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確，且還適合醫(yī)院現(xiàn)有各種全自動(dòng)生化分析儀，測(cè)定過(guò)程簡(jiǎn)單快捷，只需要10min，重復(fù)性好，值得在基層醫(yī)院推廣使用。