基于殼聚寡糖的黃芩苷固體分散體的研究

翟文婷，史紅軍

(南京市高淳人民醫(yī)院，江蘇 南京211300)

黃芩苷(baicalin)是從中藥黃芩中提取的一種黃酮類化合物，具有清熱、消炎、抗氧化和清除自由基、抗腫瘤等作用［1，2］，在臨床上具有廣闊應(yīng)用前景。然而黃芩苷溶解性能差，口服制劑體內(nèi)吸收緩慢、生物利用度低，從而影響了在臨床上的應(yīng)用［3］，因此必須通過有效的方法提高其溶出速率。應(yīng)用固體分散體技術(shù)可改善難溶性藥物的溶解性能，提高溶出速率，從而提高生物利用度［4，5］。

殼聚寡糖(chitooligosaccharide)，又名葡萄糖胺寡糖，是殼聚糖降解后聚合度為2～10的產(chǎn)物［6］。作為自然界中唯一大量存在的堿性氨基多糖，具有分子量小、水溶性好、易吸收等特性［7］，殼聚寡糖在醫(yī)藥、保健品、化妝品、農(nóng)藥、飼料添加劑等方面具有廣闊的應(yīng)用前景［8，9］。殼聚寡糖的制劑應(yīng)用較少，本實驗嘗試以殼聚寡糖為載體制備黃芩苷固體分散體，并進行物相鑒別，以期能有效提高藥物的溶出度。

1 材料與儀器

1.1 材料 黃芩苷(西安小草植物科技有限公司，含量為98%，批號:xc121225);黃芩苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:110715－200815);殼聚寡糖(浙江金殼藥業(yè)有限公司，平均分子量1 000 Da，批號:D130227020);甲醇、磷酸為色譜純，水為高純水，其余試劑均為分析純。

1.2 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀;B－295小型噴霧干燥儀(瑞士BUCHI公司);DSC 60差示掃描量熱儀(日本島津);S－4700掃描電子顯微鏡(日本電子公司);X Pert Pro型X射線衍射儀(荷蘭Philips公司);Nicoiet 8700紅外光譜儀(美國熱電公司);FA－2004型電子天平(上海精密儀器廠);KQ－100E超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司);Mastersizer激光粒度儀(英國馬爾文儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的制備

2.1.1 黃芩苷－殼聚寡糖固體分散體的制備 按照藥物與載體質(zhì)量比 1∶4、1∶6、1∶8 的比例，分別稱取黃芩苷與殼聚寡糖，溶解于適量50%乙醇，進行噴霧干燥(進風溫度120℃，進料速度10 mL·min－1)，干燥粉過80目篩，即得黃芩苷－殼聚寡糖固體分散體，置干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 物理混合物的制備 按1∶6質(zhì)量比例稱取黃芩苷和殼聚寡糖，混合均勻，制得物理混合物，置干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 體外溶出試驗

2.2.1 色譜條件 Zorbax SB－C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);柱溫為30℃;流動相為甲醇 －水 － 磷酸(47∶53∶0.2);流速為 1 mL· min－1;檢測波長為 280 nm;進樣量:10 μL。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品8.11 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得 162.20 μg·mL－1黃芩苷對照品溶液。

2.2.3 線性關(guān)系考察 分別精密吸取黃芩苷對照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL 各置 10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別量取10 μL注入高效液相色譜儀，測定峰面積(A)，將質(zhì)量濃度(C)與A值進行線性回歸，按外標法計算得標準曲線方程 A=48.757C+21.852，r=0.999 6;線性范圍1.622 ～81.10 μg·mL－1。

2.2.4 精密度試驗 取同一濃度黃芩苷對照品溶液，連續(xù)進樣5次，測得黃芩苷峰面積的RSD分別為 0.89%。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗 取黃芩苷對照品溶液，于配制后0、2、4、8、12、24 h 進樣，黃芩苷峰面積 RSD 為1.45%，表明黃芩苷溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 加樣回收率試驗 精密稱取已知黃芩苷含量的固體分散體各約8 mg，平行9份，分別置25 mL量瓶中，分別精密加入黃芩苷對照品適量，甲醇稀釋至刻度，濾過，制成低、中、高質(zhì)量濃度的供試品溶液，按上述色譜條件測定含量，計算回收率，結(jié)果見表1。黃芩苷平均回收率為 100.27%，RSD為1.25%，表明此測定方法回收率良好。

表1 黃芩苷加樣回收率試驗

2.2.7 藥物的溶出度測定 溶出度測定方法為《中國藥典》2010年版(二部)附錄Ⅹ C籃法，轉(zhuǎn)速50 rpm，溫度(37±0.5)℃，溶出介質(zhì)為900 mL蒸餾水。精密稱取黃芩苷、物理混合物和不同比例的固體分散體適量(含黃芩苷10 mg)，分別裝于膠囊中，置于轉(zhuǎn)籃中，在上述溶出條件下，分別于5、10、15、30、45、60、90、120 min 取樣 5 mL(同時補加同溫同體積的溶出介質(zhì))，以0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液10 μL注入液相色譜儀進行測定，測定結(jié)果代入標準曲線計算濃度，并換算成累積溶出百分率，結(jié)果見圖1。

圖1 不同比例殼聚寡糖對黃芩苷溶出度的影響(n=6)

由圖1的溶出曲線可以看出殼聚寡糖作為固體分散體的載體材料，可明顯提高黃芩苷的溶出速率和程度。且殼聚寡糖所占比例越大，黃芩苷溶出度越好，當黃芩苷與殼聚寡糖比例為1∶6、1∶8時，在30 min時藥物溶出度分別為94.25%和96.77%，顯著性高于其物理混合物和原料藥。從載藥量方面考慮，載藥量高相應(yīng)地可以減少給藥劑量，故選擇藥物與載體比例為1∶6制備黃芩苷固體分散體。

2.3 粒徑分布 采用Mastersizer激光粒度儀對黃芩苷原料藥和黃芩苷－殼聚寡糖固體分散體(1∶6)的粒度進行分析，結(jié)果見表2。

表2 粉末的粒徑分布(n=3)

表2結(jié)果表明，黃芩苷原料藥粒徑大，分布范圍比較廣，經(jīng)噴霧干燥制備的固體分散體粒徑減小，且粒度分布均勻。

2.4 固體分散體物相表征

2.4.1 差示量熱掃描分析(DSC) 測試條件為鋁坩堝;氣氛:氮氣;升溫速率:10.00℃· min－1;升溫范圍:0～400℃。分別對黃芩苷原料藥、殼聚寡糖、黃芩苷/殼聚寡糖(1∶6)物理混合物(以下簡稱物理混合物)和黃芩苷/殼聚寡糖(1∶6)固體分散體(以下簡稱固體分散體)進行DSC分析，結(jié)果見圖2。

圖2 差示量熱掃描圖

DSC曲線圖顯示:黃芩苷原料藥在227℃處出現(xiàn)一個明顯吸熱峰;殼聚寡糖在201℃、208℃處各有一明顯放熱峰和吸熱峰;在物理混合物中，黃芩苷在227℃吸熱峰存在，說明藥物晶型未改變;而在固體分散體中原料藥的特征峰消失，提示黃芩苷可能以非晶體形式存在。

2.4.2 掃描電鏡法分析(SEM) 測試條件為真空鍍金70 s，用掃描電鏡分別觀察黃芩苷原料藥和固體分散體的表面結(jié)構(gòu)特征，結(jié)果見圖3。

圖3 掃描電鏡圖

從圖3可知黃芩苷原料是一種細長晶體，晶體形態(tài)清晰。固體分散體為球狀或類球狀的顆粒，黃芩苷結(jié)晶消失，提示固體分散體中黃芩苷以非晶形態(tài)高度分散。

2.4.3 X－射線粉末衍射法分析 (XRD) 測試條件為 Cu 靶(40 kV，40 mV);步進掃描:0.01°/步;掃描范圍:10 ～90°;掃描速度:4°·min－1，分別對黃芩苷原料藥、殼聚寡糖、物理混合物和固體分散體進行分析，結(jié)果見圖4。

圖4 X－射線衍射圖

X－射線衍射譜圖顯示:黃芩苷在10～60°范圍內(nèi)有多個強的結(jié)晶峰;殼寡糖是一種無定形粉末，其衍射圖譜沒有明顯的特征衍射峰;物理混合物中保留了黃芩苷原料藥的晶體特征衍射峰，而在固體分散體中黃芩苷的晶體特征峰均消失，提示藥物以非晶形態(tài)存在。

2.4.4 傅里葉變換紅外光譜(FTIR) 采用KBr壓片法測定紅外光譜，將樣品與KBr在干燥環(huán)境下混合制片后，分辨率為 4 cm－1，4 000 ～500 cm－1全譜掃描，結(jié)果見圖5。

圖5 紅外光譜圖

物理混合物圖譜主要是殼寡糖與黃芩苷主要吸收峰的疊加。而在固體分散體中，黃芩苷在3 300～3 600 cm－1區(qū)域的羥基伸縮振動峰及1 729.46 cm－1處的－COOH中羰基特征吸收峰消失;殼寡糖在1 636.86 cm－1處的酰胺Ⅰ特征吸收峰消失，及在1 523.32 cm－1處的酰胺Ⅱ的特征吸收峰減弱，提示黃芩苷的羧基和殼寡糖的氨基可能存在相互作用。

4 討論

噴霧干燥因瞬間蒸發(fā)、干燥過程迅速，避免了傳統(tǒng)蒸發(fā)干燥工藝耗時長、溫度高等缺點，提高了生產(chǎn)效率;其產(chǎn)品為形狀均勻、膨松的粉末狀物質(zhì)，可以直接供片劑、顆粒劑、膠囊劑的成型。因此，在制藥行業(yè)噴霧干燥技術(shù)已得到廣泛應(yīng)用。本實驗選擇殼聚寡糖作為載體材料，采用噴霧干燥技術(shù)制備殼寡糖－黃芩苷固體分散體，顯著增加了黃芩苷的溶出度。粒徑分布測定結(jié)果表明，與黃芩苷原料藥相比，固體分散體粉末粒徑顯著減小，促進了藥物的體外溶出。同時DSC、XRD結(jié)果表明黃芩苷以非晶形態(tài)分布于固體分散體中，進一步增加了藥物的體外溶出度。本實驗的研究結(jié)果證實以殼聚寡糖為載體制備固體分散體能提高藥物的溶出度，為難溶性藥物的制劑前處理提供了新的途徑。

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