腎葉打碗花總黃酮含量的分析

尚金燕，歷 娜，楊 雪

(山東藥品食品職業學院，山東威海264210)

腎葉打碗花 Calystegia soldanella(Linn.)R.Br.，別名:濱旋花、孝扇草、扶子苗、腎葉天劍等。是一種多年生匍匐性草本，生長于海灘沙地、海岸巖石縫中。廣泛分布于山東、江蘇、遼寧、河北、浙江、臺灣等沿海各地。該植物的藥用已有悠久的歷史，《全國中草藥匯編》記載該藥材具有祛風利濕，化痰止咳的功效［1］。《中國藥用植物圖鑒》記載其:治風濕性關節疼痛［2］。《中華本草》記載該植物具有清熱解毒，主治丹毒的功效［3］。有關打碗花化學成分的研究很少，《中藥辭?！酚涊d其化學成分為合紅古豆堿［4］，Tori M 等［5］研究發現該植物的莖中含有一種反式－4－羥基桂皮酸酯。我們初步研究了腎葉打碗花的化學成分，發現該藥材含有較高黃酮類物質，為進一步開發利用腎葉打碗花資源，本研究利用紫外－分光光度法測定了該藥材全草的總黃酮含量，為腎葉打碗花資源的開發利用提供理論依據。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 電子天平(梅特勒ME204E);搖擺式粉碎機(LK－1000A);紫外－分光光度計(TU－1810);循環水多用真空泵(SHB－Ⅲ);電熱鼓風干燥箱(FG－10)。

1.2 藥物和試劑 腎葉打碗花藥材采自山東省威海市前雙島海濱(采集時間為2013年8月份)，經山東藥品食品職業學院中藥教研室曲暢游教授鑒定為腎葉打碗花的全草。蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100080－200306);所用試劑亞硝酸鈉、氫氧化鈉、無水乙醇，硝酸鋁均為分析純，實驗用水為純化水。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 用電子天平準確稱取25.00 mg蘆丁對照品，加乙醇定容至50 mL，搖勻，配制成0.5 mg·mL－1的溶液。

2.2 樣品溶液的制備 打碗花全草室溫下風干，用搖擺式粉碎機粉碎，過60目篩后備用。精密稱取2 g樣品粉末，置于100 mL圓底燒瓶內，加入70%的乙醇60 mL，放置在水浴中，70℃左右回流提取60 min，過濾、定容至100 mL，備用。

2.3 檢測波長的選擇［6～8］精密量取樣品溶液和蘆丁對照品溶液各2 mL，分別置于25 mL量瓶中，各加入60%的乙醇10 mL，加入1.00 mL 5%的亞硝酸鈉溶液，混合均勻，室溫下放置6 min;加入1.00 mL 10%硝酸鋁溶液，搖勻，室溫下放置6 min;加入10.00 mL 4%的氫氧化鈉溶液，然后用純化水，定容至刻度，搖勻，室溫放置15 min。以60%的乙醇溶液作為空白溶液，分別在300～600 nm范圍內進行波長掃描，結果顯示，制備的腎葉打碗花樣品溶液和蘆丁對照品溶液在510 nm處均有較平緩的吸收峰，確定檢測波長為510 nm。

2.4 標準曲線的繪制 精確量取蘆丁對照品溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 mL，按照上述“2.3”項下的測量方法，空白為不加蘆丁對照品的溶液，分別在510 nm波長處測定吸光度，然后選取對照品的質量濃度C(mg·mL－1)為橫坐標，吸光值(A)為縱坐標，繪制標準曲線。結果顯示蘆丁質量濃度在0.020～0.12 mg·mL－1范圍內有良好的線性關系?；貧w方程為A=9.897C+0.003 4，R2=0.999 5。

2.5 樣品含量測定 精確量取樣品溶液5份，每份1 mL，按標準曲線制備的方法測定腎葉打碗花樣品的吸光度，利用回歸方程計算總黃酮含量，測定結果表明，腎葉打碗花全草總黃酮的平均含量為5.73%，結果見表1。

表1 腎葉打碗花全草總黃酮含量測定結果

2.6 精密度試驗 精確量取5份1 mL的蘆丁對照品溶液，在510 nm處測定各吸光度，計算總黃酮含量，RSD=1.15%(n=5)，結果表明該測量方法精密度良好。

2.7 穩定性試驗 精確量取“2.2”項下所制備的1 mL 的樣品溶液，按“2.3”項下方法分別在 0、15、30、45、60 min，于510 nm處測定各吸光度，計算后得到RSD=1.05%(n=5)，表明在1 h內樣品穩定。

2.8 重現性試驗 精確稱取腎葉打碗花樣品粉末2 g，按照“2.2”項下的方法制備5份樣品溶液，按“2.3”項下的方法分別測定5份樣品的吸光度，代入回歸方程，計算得到總黃酮含量為5.74%，RSD=0.89%(n=5)，重現性良好。

2.9 加標回收率試驗 精確稱取5份腎葉打碗花細粉，每份2 g，按“2.2”項下的方法處理得到樣品溶液，再向每份樣品液中精密加入蘆丁對照品溶液1 mL(0.5 mg·mL－1)，按照“2.5”項下的方法分別測定5份溶液的吸光度，計算回收率。結果顯示，平均回收率為99.6%，RSD值為0.33%(n=5)，說明該方法具有較好的回收率，結果見表2。

表2 加標回收率試驗結果

3 結論

腎葉打碗花是分布在沿海沙灘常見的植物，分布廣，數量大，易采集;已有研究證明該植物的水提物和醇提物具有抗炎鎮痛作用［9］，但目前該植物藥用價值和物質基礎研究較少，基本上作為雜草，影響了該藥材的開發利用。本研究采用乙醇提取法，提取了腎葉打碗花的黃酮成分，并采用紫外－可見分光光度法初步測定了腎葉打碗花中總黃酮的含量，測定結果顯示腎葉打碗花黃酮含量較高，為該植物的進一步開發研究提供了一定理論基礎。

［1］謝宗萬.全國中草藥匯編［M］.北京:人民衛生出版社，1996:630.

［2］第二軍醫大學藥學系生藥學教研室.中國藥用植物圖鑒［M］.上海:上海教育出版社出版，1960:923.

［3］國家中醫藥管理局中華本草編委會.中華本草(第18卷)［M］.上海:上?？茖W技術出版社，1999:497－498.

［4］嚴永清，余傳隆.中藥辭海(第二卷)［M］.北京:中國醫藥科技出版社，1996:51－52.

［5］Tori M，Ohara Y，Nakashima K，et al.Caffeic and coumaric acid esters from Calystegia soldanella［J］.Fitoterapia，2000，71(4):353 －359.

［6］何可群，盧文蕓，李相興，等.貴州鼠尾草的總黃酮含量測定［J］.貴州農業科學，2013，41(1):77 －79.

［7］胡海清，韓賀東，王曉玲.雙花千里光中總黃酮含量測定［J］.西南民族大學學報(自然科學版)，2013，39(4):505－507.

［8］牛明娟，惠秋沙.澤漆總黃酮的提取與含量測定［J］.藥學研究，2013，32(3):131 －133.

［9］譚麗，沈清，黃真.孝扇草抗炎鎮痛有效部位的篩選［J］.中華中醫藥學刊，2012，30(1):155 －157.