瘤胃微生物體外降解玉米秸稈與苜蓿干草混合粉的研究

付釣鈞，周清波，王長平，解志峰，李鳳剛，戴志江

（1.佳木斯大學生命科學學院；黑龍江佳木斯 154007；2.黑龍江農業職業技術學院，黑龍江佳木斯 154007；3.佳木斯市獸醫衛生防疫站，黑龍江佳木斯 154002）

本試驗研究了反芻動物瘤胃微生物對玉米秸稈與苜蓿干草混合粉的體外降解規律。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 動物的選擇 牛是反芻動物，其瘤胃中有大量的細菌和原蟲等微生物，代謝活躍，可以消化和分解飼料中的粗纖維，因此選擇牛為試驗動物。

1.1.2 玉米秸稈粉、苜蓿干草粉的制備 將當地農田秋收后剩余秸稈曬干，用40目粉碎機將新鮮、無霉變的玉米秸稈和苜蓿干草粉碎，備用。

1.2 主要儀器及試劑

1.2.1 試驗設備與儀器 三角瓶（60 mL）、分析天平（GH-120，日本 AND）、GW-06A 烘干箱（哈爾濱理化儀器制造廠）、pH酸度計（PT25型，德國塞多利斯公司）、粉碎機（ZN-02，北京興時利和科技發展有限公司）、水浴鍋（SC-15，上海比朗儀器有限公司）、恒溫箱（DHG-9030，無錫三鑫精工試驗設備有限公司）、雙目顯微鏡（BM311110，北京視界通儀器有限公司）、漏斗、玻璃棒、燒杯、容量瓶、量筒、注射器（25 mL）、濾紙、紗布、溫度計等。

1.2.2 試驗試劑 微量元素溶液 （A液）：CaCl2·2H2O 13.2 g，MnCl2·4H2O 10.0 g，CoCl2·6H2O 1.0 g，FeCl3·6H2O 8.0 g，蒸餾水定容至 100 mL。 緩沖溶液（B 液）：NH4HCO34.0 g，NaHCO335.0 g，蒸餾水定容至1000 mL。常量元素溶液（C液）：Na2HPO45.7 g，KH2PO46.2 g，MgSO4·7H2O 0.6 g， 蒸餾水定容至 1000 mL。 還原劑溶液：NaOH 0.16 g，Na2S·9H2O 0.625 g，蒸餾水定容至95 mL。

牛瘤胃液：將屠宰場剛宰殺牛瘤胃內容物取出，經三層紗布過濾獲得牛瘤胃液，置于40℃水浴中，備用（付釣鈞等，2011）。

1.3 試驗方法

1.3.1 混合草粉制備 待測樣品置于烘干箱，測其含水量，測定結果見表1。

表1 樣品含水量

將玉米秸稈粉和苜蓿干草粉按不同配比（8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8）混合，形成 7 種混合草粉。

1.3.2 營養液配制 蒸餾水400 mL+A液0.1 mL+B液200 mL+C液200 mL+還原劑溶液40 mL，現用現配，用前預熱至39℃。

1.3.3 人工瘤胃培養液配制 將牛瘤胃液與營養液按體積比1∶2混合，制成人工瘤胃培養液。

1.3.4 分裝和培養 將已稱重樣品的每個培養瓶中分別加入36 mL人工瘤胃培養液搖勻，每組3只三角瓶并連接有刻度的注射器。然后將不加底物的空白組與培養組成批轉入恒溫箱中連續培養36 h，每2 h記錄1次產氣量，記錄結果后搖勻（劉丹丹等，2007）。培養36 h后將其迅速放入0℃冰箱中1 h，使其停止發酵。將濾紙濾后的干物質置于120℃烘干箱中烘干。

2 結果

2.1 不同配比玉米秸稈與苜蓿干草混合粉各時間段的產氣量 從表2可見，試驗開始至8 h左右產氣速度均比較緩慢而且產氣量非常少。隨著發酵過程的進行，瘤胃微生物逐漸適應了環境條件，產氣速度規律性加快，8 h后才進入正常產氣階段，各組產氣量開始增加。12～20 h產氣量達到高峰，這個時期正是瘤胃微生物活躍期，而24 h之后產氣速度又明顯變慢，產氣量減少是因為培養瓶內代謝產物累積，瘤胃微生物受到反饋抑制的結果。

2.2 不同配比玉米秸稈與苜蓿干草混合粉干物質降解率 從表3可見，干物質降解率以3∶7組合和4∶6組合明顯高于其他比例組合，瘤胃微生物繁殖發酵粗飼料效果最好。這是因為苜蓿干草中氮源比較豐富，有利于微生物生長繁殖，而以3∶7組碳氮比最符合微生物生長，其他組由于氮源的不足，使微生物繁殖受阻，產氣量下降，干物質降解少，導致干物質降解率下降，本試驗結果與于長青和張日俊（2004）研究結果相吻合。同時結合各時間段的鏡檢發現，3∶7組和4∶6組纖毛蟲極多且活動旺盛，瘤胃液中主要微生物有細菌、纖毛蟲、厭氧真菌等，而細菌和厭氧真菌在光鏡下是很難分離觀察到的，通過纖毛蟲的活動可以推斷出瘤胃微生物的代謝是非常旺盛的。

3 結論

試驗結果表明，通過產氣量和干物質降解率的比較，在玉米秸稈粉和苜蓿干草粉配比為3∶7時，其營養成分最符合瘤胃微生物的營養需要，瘤胃微生物代謝最旺盛，繁殖數量最多，底物配比為4∶6 的組合次之。

表2 不同配比玉米秸稈與苜蓿干草混合粉在不同時間段發酵產氣量 mL

表3 不同配比玉米秸稈與苜蓿干草混合粉干物質降解率

[1]付釣鈞，趙瑞艷，王長平，等.瘤胃微生物體外發酵不同配比大豆莢與稻草混合粉產氣量研究[J].飼料工業，2011，32（3）：30 ～ 32.

[2]劉丹丹，遲文峰，張永根，等.影響瘤胃微生物種群建立及其數量的因素[J].飼料博覽，2007，9：19 ～ 21.

[3]于長青，張日俊.瘤胃真菌的營養功能及最新應用前景[J].飼料工業，2004，25（2）：19 ～ 21.■