湖南漢族群體STR基因座D1S1656多態性調查

黃健+++吳華+++蔡金洪+等

[摘要] 目的 為了獲得湖南漢族人群D1S1656基因座遺傳多態性信息及其法醫學參數。 方法 采用Powerplex 21 system試劑盒檢測湖南漢族無關個體451例，對D1S1656基因座進行Hardy-weinberg平衡檢驗，并計算其法醫學參數。 結果 D1S1656基因座符合Hardy-weinberg平衡（P>0.05），共發現16個等位基因，個體識別力（Power of Discrimination，DP）0.954，非父排除率（Power of Exclusion，PE） 0.667。 結論 D1S1656基因座在湖南漢族人群中具有良好多態性，有法庭科學應用價值。

[關鍵詞] 法醫物證；D1S1656；遺傳多態性；湖南漢族人群

[中圖分類號] DF795.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）26-0131-02

隨著法庭科學親權鑒定、個體識別技術的不斷深入，為了達到更高的系統效能，商品化試劑盒所采用的短串聯重復序列（short tandem repeats，STR）遺傳標記數目不斷增加。最初商品化試劑盒由美國FBI認可的13個聯合索引系統（Combined DNA Index System，CODIS）STR基因座組成，之后發展到2000年之后普遍采用的16個STR基因座[1，2]。2011年美國promega公司推出PowerPlex 21 System（PP21）商品化試劑盒，其STR基因座增加為21個，該體系引進了新的STR基因座D1S1656。對于新引入的基因座D1S1656，雖然2000年之后相繼有一些該基因座群體多態性的報道[3-6]，然而相對于其他STR基因座，該基因座的群體多態性研究相當有限。自2011年至今，每年司法部上海司法技術研究所開展的全國法醫DNA實驗室能力驗證，均未提供能夠用于計算該遺傳標記的法醫學個體識別力及非父排除率數值，信息的不足導致DNA實驗室間比對困難。由于D1S1656基因座的群體數據不足，當親權鑒定評估系統效能及計算個案的親權指數時，常常只能粗略地參考美國亞裔人或是中國某一地區人群的數據。

為了能夠逐漸補充、完善D1S1656基因座在中國群體中的等位基因信息，促進親權鑒定及個體識別的嚴謹性，本次研究調查了湖南群體D1S1656基因座的遺傳多態性，為今后法醫學應用提供參考依據。

1資料與方法

1.1 臨床資料

2013～2014年期間湖南地區漢族無關個體血痕451例（男313例，女138例），均知情同意，所有樣本均來源于湖南省腦科醫院法醫物證科。

1.2 儀器與試劑

ABI公司9700 PCR擴增儀，3130遺傳分析儀，GeneMapper 3.2基因分析軟件；所用擴增試劑盒為 promaga 公司的Plower Plex 21（批號0000094593），電泳為POP4分離膠（批號：1401130）。

1.3 DNA提取及檢測

DNA提取采用chelex-100法，PCR體系及條件根據試劑盒說明。10 μL體系：Master mix 2 μL，引物2 μL，模板DNA 2 μL（2 ng），去離子水4 μL。PCR 的反應循環參數為：96℃，1 min；94℃，10 sec；59℃，60 sec；72℃，30 sec，29個循環；60℃ 10 min。

1.4統計學分析

Hardy-weinberg 平衡檢驗及法醫學參數多態信息量（polymorphism information content， PIC）；觀測雜合度（observed heterozygosity，Ho）；匹配概率（Matching probability， PM）；個體識別力DP[7]；非父排除率PE的計算采用Powerstats V12.xls軟件[8]。

2 結果

D1S1656基因座在無關個體中符合Hardy-Weinberg平衡（P>0.05），湖南漢族人群451個無關個體中共檢測到16個等位基因，其中等位基因15分布頻率最高為0.284；等位基因10、14.3、15.3、19.3均檢測到其頻率均為0.001；等位基因18、19其頻率也較低，均小于0.01。湖南漢族人群D1S1656基因座多態信息量PIC為0.820，個體識別力 DP 為0.954， 非父排除率PE 為0.667。

3 討論

STR基因座由于其信息含量豐富已成為法庭科學親權鑒定及個體識別首選遺傳標記。然而STR基因座相對于插入/缺失（Insertion/Deletion， InDel）和單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）其突變率較高，約為0.002[9]，并且隨著親權鑒定技術規范要求日益嚴謹，法庭科學所采用商品化試劑盒中所含有的STR基因座近兩年已達到20個以上。2011年，美國研發了21個基因座的商品化試劑盒PP21，并于2012年進入中國法庭科學實驗室。通常一個STR基因座要科學、準確地應用于法醫學領域，必須首先建立該遺傳標記群體遺傳數據。針對PP21試劑盒中引入的新基因座D1S1656，國內先后報道過浙江漢族人群、北京地區漢族人群多態性調查[5，6]，但目前為止其不同地區群體的多態性研究還是相當有限，常常使其實際應用受限。

D1S1656基因座位于1號染色體，系四核苷酸重復STR基因座，為了研究該基因座在湖南漢族人群中是否具有較豐富的多態性并評估其法醫學應用價值，本次研究采用商品化試劑盒PP21對基因座D1S1656進行湖南漢族人群多態性調查。研究結果發現該基因座在湖南漢族人群中共檢測到16個等位基因，相比于浙江漢族人群中所發現的13個等位基因[5]，湖南漢族人群中還檢測到等位基因10、15.3和19。其中10、14.3、15.3、19.3表現為稀有等位基因，頻率均為0.001。本研究湖南漢族人群D1S1656基因座個體識別力DP為0.954、非父排除率PE 為0.667，略高于浙江漢族人群的DP 0.945、PE 0.650[5]，湖南漢族人群顯示出更豐富的信息含量。同時D1S1656基因座法醫學各參數值高于法醫學常用STR基因座體系的平均參數值[1，2]，表明該基因座含有較豐富的信息量，具有良好的法醫學應用前景。endprint

[參考文獻]

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（收稿日期：2014-06-19）endprint

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