不同產地枸杞多糖含量的比較研究

陳麗麗+++張忠山

[摘要] 目的 比較不同產地枸杞多糖的含量。方法 采用熱水浸提法分別提取寧夏、浙江和四川產枸杞中的多糖成分，苯酚-硫酸法測定枸杞多糖含量。結果 浙江產枸杞多糖含量0.830%，寧夏產枸杞多糖含量0.769%，四川產枸杞多糖含量0.590%。 結論 不同產地枸杞多糖含量不同，可能與環境、采摘時間及加工過程等有關。

[關鍵詞] 枸杞多糖；不同產地；熱水浸提法；苯酚-硫酸法

[中圖分類號] R917 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）26-0071-03

枸杞（Lycium chinense Mill）是雙子葉植物綱茄目枸杞屬植物，藥用部位為其成熟果實枸杞子。抗旱能力很強，其漿果枸杞子在《神農本草經》中引為上品，是我國傳統名貴中藥材。枸杞作為藥食同源類植物，具有補腎養肝、清熱涼血及益精明目等功效[1]。它既含有碳水化合物、蛋白質、脂肪、胡蘿卜素、核黃素、鈣、磷、鐵、鋅，還含有多種維生素及玉蜀黍黃素，因而一直受到中外醫學與食療專家的高度重視。枸杞主產寧夏、河北、浙江、四川等省。枸杞多糖是從枸杞中提取而得的一種水溶性多糖，經研究表明，枸杞多糖是枸杞子調節免疫、控制腫瘤生長和細胞突變、延緩衰老等的主要活性成分，可改善老年人易疲勞、食欲不振和視力模糊等癥狀，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用[2，3]，枸杞多糖對人體免疫功能低下所致的各種疾病有顯著的療效，已成為保健食品的一種重要功能性添加劑，而且顯示出良好的應用前景。但有關不同產地枸杞多糖含量比較方面的研究不多。本實驗選取具有地域代表性的寧夏枸杞、浙江枸杞和四川枸杞，采用熱水浸提法分別對枸杞多糖進行提取，并采用苯酚-硫酸法對枸杞多糖的含量進行測定。比較三種不同產地的枸杞中多糖含量的差異，為進一步開發枸杞資源及探討其藥用價值奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1儀器

DK-S22型電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設備有限公司）；旋轉蒸發器（上海申勝生物技術有限公司）；SC-101型鼓風電熱恒溫干燥箱（浙江省嘉興市新滕電器廠制造）；BP-Ⅱ型藥物天平（上海醫用激光儀器廠）；Spectrumlab 22PC可見分光光度計（上海楞光技術有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循環水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）。

1.2試劑

無水葡萄糖（中國藥品生物制品檢定所）；硫酸（天津化學試劑有限公司）；無水乙醇（天津化學試劑有限公司）；枸杞（寧夏、浙江和四川）經浙江中醫藥大學資源與鑒定教研室陳孔榮老師鑒定為枸杞Lycium chinense Mill。

2 方法與結果

2.1溶液的制備

2.1.1供試品溶液的制備[4-6] 分別取不同產地的陰干的枸杞各20 g，剪碎，精密稱取5 g，加80%乙醇適量，加熱回流提取2次，每次2 h，回收乙醇，藥渣加蒸餾水100 mL，95℃水浴提取3次，每次2 h，合并濾液，濃縮至10 mL，加無水乙醇至溶液乙醇體積分數80%，放置24 h。過濾取沉淀，并離心濾液，取沉淀；合并沉淀，置25 mL容量瓶，加蒸餾水至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.1.2對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的葡萄糖對照品50 mg，置500 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，即得濃度為0.1 mg/mL的對照品溶液。

2.2 最大吸收波長的確定

精密吸取對照品溶液和供試品溶液各1.0 mL，置試管中，補蒸餾水至2 mL，加入1 mL 5 %苯酚溶液，搖勻，迅速加入濃硫酸5 mL，混勻，室溫靜置30 min待其冷卻，以蒸餾水同行試劑空白，在400～600 nm波長范圍內對對照品和供試品溶液分別進行掃描，結果表明兩者均在490 nm處有最大吸收，故確定490 nm為測定波長。

2.3標準曲線的繪制[7-9]

分別精密移取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置15 mL比色管中，按“2.2”項下方法操作，在490 nm波長下測定吸光度，以吸光度A為縱坐標，濃度C（mg/mL）為橫坐標進行線性回歸，回歸方程為Y=7.4486X+0.0122，R2=0.9993。表明葡萄糖在（0～0.1） mg/mL濃度范圍內與吸光度呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

精密吸取對照品溶液1 mL，置于15 mL比色管中，其余操作按“2.2”項下方法進行，測定吸光度，平行測定6次，結果RSD為1.94%，表明儀器的精密度良好。

2.5 穩定性試驗

取浙江產枸杞適量，按“2.1.1”項下方法制備供試品溶液，精密吸取1 mL置15 mL比色管中，其余操作按“2.2”項下方法進行。分別于10、20、30、40、50、60 min后測定吸光度，結果RSD為0.16 %，表明枸杞多糖1 h內吸光度穩定，故含量測定應在顯色后1 h內完成。

2.6 加樣回收試驗

取已知多糖含量的供試品溶液6份，分別加入適量的葡萄糖對照品溶液，定容于25 mL容量瓶中，精密移取1 mL置15 mL比色管中，其余操作按“2.2”項下方法進行，測定吸光度，計算加樣回收率，得回收率平均值為99.98%，RSD為4.14%。

2.7多糖的含量測定[10，11]

分別精密移取三個產地溶液各1.0 mL，蒸餾水定容于25 mL容量瓶，搖勻后各取1 mL，置于15 mL比色管中，其余操作按“2.2”項中方法進行，并在490 nm波長處于分光光度計上測定吸光度，由回歸方程計算多糖含量。

3討論

枸杞多糖是一種易溶于熱水、稀酸和稀堿溶液并能被乙醇、丙酮等有機溶劑析出的蛋白多糖，其提取的方法有熱水浸提、酸浸提和堿浸提等[12]，但酸性或堿性條件易引起糖苷鍵斷裂，因此，大多采用熱水浸提法。水是強極性溶劑，對植物組織的穿透力強，提取效率高，在生產上使用安全，且此方法提取設備簡單、成本低、易操作。endprint

枸杞多糖因其強大的功能活性備受國內外學者的關注，其提取技術已成為中醫藥、保健食品等領域的研究熱點。枸杞多糖的提取也由傳統的提取技術發展為超聲波、微波、生物酶、發酵等輔助提取技術，但各自仍存在一些問題。此外，枸杞多糖的提取新技術主要停留在實驗室研究階段，尚需加大研究力度擴大規模到工業化生產。隨著問題的提出與新技術的不斷成熟以及多學科的交叉發展，相信枸杞多糖的提取技術必將取得長足的發展。

苯酚-硫酸法是測定多糖的常用方法，利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再以比色法測定。此方法簡單、靈敏度高，重復性好，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，并且產生的顏色穩定時間長。但影響該法顯色的因素較多，對不同多糖物質，其最佳顯色條件不同。苯酚-硫酸法測定結果更為準確合理，可考慮作為枸杞子中多糖含量測定的首選方法。

現代藥理研究表明，枸杞多糖是枸杞的主要有效成分之一，因此通過枸杞多糖含量檢測可以對枸杞質量進行評價。本實驗結果表明，藥用植物有效成分的形成、轉化與積累，受著環境條件的影響。不同產地枸杞中所含多糖含量略有差異，其中浙江枸杞多糖含量為0.830%，寧夏枸杞多糖含量為0.769%，四川枸杞多糖含量為0.590%。其原因可能與收獲時間、干燥方法、貯藏方法、溫度、光照、地理條件、土壤條件、濕度、地貌、水質等[10]有關。環境是藥用植物生長發育和產品質量形成的物質能量基礎，研究環境與藥用植物生產的關系，是調整藥用植物生產、控制生藥質量的理論基礎。浙江枸杞的多糖含量最高，高于藥典收載的寧夏枸杞多糖含量，從而顯示浙江枸杞有較高的藥用價值，但其是否優于寧夏枸杞還有待進一步研究。另一方面，藥用植物體內有效成分的形成和積累，是植物代謝過程的結果，并與其生長、發育有關。因此，中藥材采收季節是影響中藥材質量的關鍵因素，如果不進行適時的采收，勢必導致中藥材質差效低。

[參考文獻]

[1] 劉錫建，肖穩發，曹儉，等. 枸杞多糖的研究進展[J]. 上海工程技術大學學報，2008，22（4）：299-302.

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[11] 吳濤，龐坤宇，候杰，等. 枸杞多糖含量種間差異比較[J]. 北華大學學報，2013，14（5）：594-596.

[12] 李新虎. 土壤地球化學環境對寧夏枸杞品質的制約影響研究[D]. 中國地質大學，2007.

（收稿日期：2014-01-14）endprint

枸杞多糖因其強大的功能活性備受國內外學者的關注，其提取技術已成為中醫藥、保健食品等領域的研究熱點。枸杞多糖的提取也由傳統的提取技術發展為超聲波、微波、生物酶、發酵等輔助提取技術，但各自仍存在一些問題。此外，枸杞多糖的提取新技術主要停留在實驗室研究階段，尚需加大研究力度擴大規模到工業化生產。隨著問題的提出與新技術的不斷成熟以及多學科的交叉發展，相信枸杞多糖的提取技術必將取得長足的發展。

苯酚-硫酸法是測定多糖的常用方法，利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再以比色法測定。此方法簡單、靈敏度高，重復性好，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，并且產生的顏色穩定時間長。但影響該法顯色的因素較多，對不同多糖物質，其最佳顯色條件不同。苯酚-硫酸法測定結果更為準確合理，可考慮作為枸杞子中多糖含量測定的首選方法。

現代藥理研究表明，枸杞多糖是枸杞的主要有效成分之一，因此通過枸杞多糖含量檢測可以對枸杞質量進行評價。本實驗結果表明，藥用植物有效成分的形成、轉化與積累，受著環境條件的影響。不同產地枸杞中所含多糖含量略有差異，其中浙江枸杞多糖含量為0.830%，寧夏枸杞多糖含量為0.769%，四川枸杞多糖含量為0.590%。其原因可能與收獲時間、干燥方法、貯藏方法、溫度、光照、地理條件、土壤條件、濕度、地貌、水質等[10]有關。環境是藥用植物生長發育和產品質量形成的物質能量基礎，研究環境與藥用植物生產的關系，是調整藥用植物生產、控制生藥質量的理論基礎。浙江枸杞的多糖含量最高，高于藥典收載的寧夏枸杞多糖含量，從而顯示浙江枸杞有較高的藥用價值，但其是否優于寧夏枸杞還有待進一步研究。另一方面，藥用植物體內有效成分的形成和積累，是植物代謝過程的結果，并與其生長、發育有關。因此，中藥材采收季節是影響中藥材質量的關鍵因素，如果不進行適時的采收，勢必導致中藥材質差效低。

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枸杞多糖因其強大的功能活性備受國內外學者的關注，其提取技術已成為中醫藥、保健食品等領域的研究熱點。枸杞多糖的提取也由傳統的提取技術發展為超聲波、微波、生物酶、發酵等輔助提取技術，但各自仍存在一些問題。此外，枸杞多糖的提取新技術主要停留在實驗室研究階段，尚需加大研究力度擴大規模到工業化生產。隨著問題的提出與新技術的不斷成熟以及多學科的交叉發展，相信枸杞多糖的提取技術必將取得長足的發展。

苯酚-硫酸法是測定多糖的常用方法，利用多糖在硫酸的作用下先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后與苯酚生成橙黃色化合物，再以比色法測定。此方法簡單、靈敏度高，重復性好，實驗時基本不受蛋白質存在的影響，并且產生的顏色穩定時間長。但影響該法顯色的因素較多，對不同多糖物質，其最佳顯色條件不同。苯酚-硫酸法測定結果更為準確合理，可考慮作為枸杞子中多糖含量測定的首選方法。

現代藥理研究表明，枸杞多糖是枸杞的主要有效成分之一，因此通過枸杞多糖含量檢測可以對枸杞質量進行評價。本實驗結果表明，藥用植物有效成分的形成、轉化與積累，受著環境條件的影響。不同產地枸杞中所含多糖含量略有差異，其中浙江枸杞多糖含量為0.830%，寧夏枸杞多糖含量為0.769%，四川枸杞多糖含量為0.590%。其原因可能與收獲時間、干燥方法、貯藏方法、溫度、光照、地理條件、土壤條件、濕度、地貌、水質等[10]有關。環境是藥用植物生長發育和產品質量形成的物質能量基礎，研究環境與藥用植物生產的關系，是調整藥用植物生產、控制生藥質量的理論基礎。浙江枸杞的多糖含量最高，高于藥典收載的寧夏枸杞多糖含量，從而顯示浙江枸杞有較高的藥用價值，但其是否優于寧夏枸杞還有待進一步研究。另一方面，藥用植物體內有效成分的形成和積累，是植物代謝過程的結果，并與其生長、發育有關。因此，中藥材采收季節是影響中藥材質量的關鍵因素，如果不進行適時的采收，勢必導致中藥材質差效低。

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[12] 李新虎. 土壤地球化學環境對寧夏枸杞品質的制約影響研究[D]. 中國地質大學，2007.

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