茜草中總蒽醌的提取工藝優化

衛亞麗+鐘簫+湯洪敏

摘要：利用紫外可見分光光度儀，在400～800 nm范圍內對1，8-二羥基蒽醌的吸收光譜進行掃描，確定最大吸收波長；探討提取次數、提取濃度、提取時間、料液比等單因素對茜草中總蒽醌的提取效果，在此基礎上，通過L9（34）正交試驗，確定總蒽醌的最佳提取工藝。結果表明，茜草總蒽醌的最大吸收波長為511 nm；對照品1，8-二羥基蒽醌的吸收度與濃度線性關系良好，相關系數r=0.999 46；茜草總蒽醌最佳提取工藝為料液比1 g ∶12 mL、提取時間1.5 h、提取次數3次、乙醇濃度70%。

關鍵詞：紫外分光光度法；茜草；總蒽醌；提取

中圖分類號：R284.2 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2014）08-0268-02

茜草（Rubia Cordifolia L.）為茜草科植物，別稱活血草、鋸子草、拉拉草、纏老鼠、粘粘草、血見愁等，多年生攀援草本，主產于陜西、江蘇、安徽、河南、山東，春、秋2季采挖，根及根莖干燥藥用，性寒、味苦，歸肝經，具有涼血、止血、祛瘀、通經之功效，臨床上用于吐血、崩漏下血、外傷出血、經閉瘀阻、關節痹痛、跌打腫痛等病癥^[1-2]，特別對心腦血管疾病療效顯著。

蒽醌類物質不僅在藥用方面有極大的發展潛力，而且可作為天然色素用于食品添加劑，安全性高，具有營養和藥用價值，逐漸受到人們的重視^[3-5]。茜草蒽醌類物質的研究報道較多^[6-11]，大多是對其組成和結構進行鑒定，對提取工藝的研究報道較少。采用正交試驗，研究4因素（乙醇濃度、提取次數、時間、料液比）3水平醇提工藝，采用紫外可見分光光度儀測定總蒽醌含量，確定最佳醇提條件，為工業化提取茜草總蒽醌提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 儀器材料

UV-cary300型紫外可見分光光度儀；W201B恒溫水浴鍋，上海中生生物技術有限公司生產；AEG-45SM電子天平（1/100 000），日本島津公司生產；1，8-二羥基蒽醌，中國藥品生物制品檢定所提供；R-201型旋轉蒸發儀，上海中生科技有限公司生產；無水乙醇、三氯甲烷及其他試劑均為分析純。茜草購自貴陽市醫藥公司，產地陜西。

1.2 試驗方法

1.2.1 最大吸收波長測定 精確稱取1，8-二羥基蒽醌標準品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；吸取1 mL水浴蒸干，加0.5%醋酸鎂-甲醇溶液，搖勻使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸鎂-甲醇溶液作空白溶液，用紫外可見分光光度計對1，8-二羥基蒽醌標準溶液在500～800 nm波長范圍內進行光譜掃描，確定其最大吸收波長。

1.2.2 標準曲線的繪制 精確稱取1，8-二羥基蒽醌標準品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；分別精確吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL減壓蒸干，加0.5%醋酸鎂-甲醇溶液，搖勻使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸鎂-甲醇溶液作空白，在波長511 nm處測量吸光度，并繪制標準曲線。

1.2.3 茜草總蒽醌的提取和含量測定^[6]精確稱取茜草10.0 g，按照不同料液比、提取時間、提取次數和提取劑濃度對茜草總蒽醌進行提取，制成提取液并記錄其體積；精確量取10.0 mL提取液于50 mL圓底燒瓶中，減壓回收溶劑，加20%硫酸溶液20 mL、10%三氯化鐵溶液100 mL，沸水加熱回流水解60 min，并不斷搖振；回流液冷卻至室溫，依次加入30、20、20 mL三氯甲烷，回流10 min，吸出三氯甲烷層，反復抽提至三氯甲烷層無色，合并三氯甲烷層，減壓回收溶劑；殘渣加入0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解，25 mL容量瓶定容，于511 nm處測定吸光度，根據標準曲線讀出樣品中總蒽醌化合物的含量。

1.2.4 茜草總蒽醌單因素試驗 （1）不同提取次數。準確稱取4份茜草樣品，在料液比1 g ∶10 mL、提取時間2 h、70%乙醇 100 mL 作為浸提劑的條件下，分別提取1、2、3、4次，過濾、合并所得濾液即為提取液，對提取液進行測定。（2）不同浸提劑濃度。準確稱取4份茜草樣品，在料液比1 g ∶10 mL、提取時間1 h、提取次數為1次的條件下，分別以濃度為60%、70%、75%、80%乙醇溶液進行提取，并對提取液進行測定。（3）不同提取時間。準確稱取4份茜草樣品，在料液比為 1 g ∶10 mL、乙醇濃度70%、提取次數為1次的條件下，分別提取1.0、1.5、2.0、3.0 h，對提取液進行測定。（4）不同料液比。準確稱取4份茜草樣品，在乙醇濃度70%、提取次數為1次、時間1.0 h的條件下，分別以料液比為1 g ∶6 mL、1 g ∶8 mL、1 g ∶10 mL、1 g ∶12 mL加入乙醇溶液進行提取，對提取液進行測定。

1.2.5 正交試驗優化工藝設計 以總蒽醌化合物含量為評價指標，采用正交試驗設計法L9（34）對茜草樣品進行總蒽醌的提取，考察茜草總蒽醌最優提取工藝（表1）。

為B、C、D，即提取時間﹥提取次數﹥料液比﹥乙醇濃度；總蒽醌最佳提取條件為A2B3C3D2，即浸提時間為1.5 h、提取次數為3次、乙醇濃度為70%、料液比為1 g ∶12 mL。在最優提取條件下，茜草總蒽醌的提取率為12.45%。

3 小結

茜草中含有豐富的蒽醌類化合物，本試驗詳細探討茜草中蒽醌類物質的提取工藝，為茜草的進一步開發利用提供了有益的參考。雖然提取的次數和時間越多越好，但結合生產實踐，最佳提取工藝為浸提時間為1.5 h、提取次數為3次、乙醇濃度為70%、料液比為1 g ∶12 mL，此時，總蒽醌的提取率最高，為12.45%。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會. 中國藥典：一部[M]. 2010版. 北京：中國醫藥科技出版社，2010，218.

[2]楊連榮，周慶華，張哲鋒，等. 茜草的化學成分與藥理作用研究進展[J]. 中醫藥信息，2007，24（1）：21-23.

[3]張 琳，彭 亮，胡本祥. 茜草的化學成分研究進展[J]. 現代中醫藥，2008，28（2）：52-54.

[4]余旭東，楊季菱. 茜草與茜草炭藥理作用比較研究[J]. 中國實驗方劑學雜志，2007，13（9）：53-56.

[5]許蘭芝，趙世琴，胡慶偉，等. 茜草總蒽醌抗炎抗風濕作用及機制[J]. 濰坊醫學院學報，2002，24（1）：11-13.

[6]陳 星，王 侃，單鳴秋，等. UPLC測定茜草炭中4種醌類成分的含量[J]. 中國中藥雜志，2012，37（19）：2922-2925.

[7]陳小全，楊曉東，邵輝瑩，等. 超聲波作用下提取茜草色素及穩定性實驗[J]. 泰山醫學院學報，2013，34（3）：173-176.

[8]浦益瓊，王 冰，張 彤，等. 大孔樹脂柱層析法制備茜草總醌提取物的實驗研究[J]. 中成藥，2013，35（9）：1900-1905.

[9]衛亞麗，梁 芳，湯洪敏. 中藥茜草中總蒽醌含量的測定[J]. 貴州農業科學，2011，39（8）：51-53.

[10]蘇靜慧，呂強三，李紅霞. 超聲波法提取茜草中蒽醌成分[J]. 河北理工大學學報：自然科學版，2011，33（4）：101-104.

[11]浦益瓊，王 冰，張 彤，等. 茜草提取物中大葉茜草素測定的方法研究[J]. 中國實驗方劑學雜志，2012，18（6）：94-96.endprint

摘要：利用紫外可見分光光度儀，在400～800 nm范圍內對1，8-二羥基蒽醌的吸收光譜進行掃描，確定最大吸收波長；探討提取次數、提取濃度、提取時間、料液比等單因素對茜草中總蒽醌的提取效果，在此基礎上，通過L9（34）正交試驗，確定總蒽醌的最佳提取工藝。結果表明，茜草總蒽醌的最大吸收波長為511 nm；對照品1，8-二羥基蒽醌的吸收度與濃度線性關系良好，相關系數r=0.999 46；茜草總蒽醌最佳提取工藝為料液比1 g ∶12 mL、提取時間1.5 h、提取次數3次、乙醇濃度70%。

關鍵詞：紫外分光光度法；茜草；總蒽醌；提取

中圖分類號：R284.2 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2014）08-0268-02

茜草（Rubia Cordifolia L.）為茜草科植物，別稱活血草、鋸子草、拉拉草、纏老鼠、粘粘草、血見愁等，多年生攀援草本，主產于陜西、江蘇、安徽、河南、山東，春、秋2季采挖，根及根莖干燥藥用，性寒、味苦，歸肝經，具有涼血、止血、祛瘀、通經之功效，臨床上用于吐血、崩漏下血、外傷出血、經閉瘀阻、關節痹痛、跌打腫痛等病癥^[1-2]，特別對心腦血管疾病療效顯著。

蒽醌類物質不僅在藥用方面有極大的發展潛力，而且可作為天然色素用于食品添加劑，安全性高，具有營養和藥用價值，逐漸受到人們的重視^[3-5]。茜草蒽醌類物質的研究報道較多^[6-11]，大多是對其組成和結構進行鑒定，對提取工藝的研究報道較少。采用正交試驗，研究4因素（乙醇濃度、提取次數、時間、料液比）3水平醇提工藝，采用紫外可見分光光度儀測定總蒽醌含量，確定最佳醇提條件，為工業化提取茜草總蒽醌提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 儀器材料

UV-cary300型紫外可見分光光度儀；W201B恒溫水浴鍋，上海中生生物技術有限公司生產；AEG-45SM電子天平（1/100 000），日本島津公司生產；1，8-二羥基蒽醌，中國藥品生物制品檢定所提供；R-201型旋轉蒸發儀，上海中生科技有限公司生產；無水乙醇、三氯甲烷及其他試劑均為分析純。茜草購自貴陽市醫藥公司，產地陜西。

1.2 試驗方法

1.2.1 最大吸收波長測定 精確稱取1，8-二羥基蒽醌標準品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；吸取1 mL水浴蒸干，加0.5%醋酸鎂-甲醇溶液，搖勻使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸鎂-甲醇溶液作空白溶液，用紫外可見分光光度計對1，8-二羥基蒽醌標準溶液在500～800 nm波長范圍內進行光譜掃描，確定其最大吸收波長。

1.2.2 標準曲線的繪制 精確稱取1，8-二羥基蒽醌標準品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；分別精確吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL減壓蒸干，加0.5%醋酸鎂-甲醇溶液，搖勻使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸鎂-甲醇溶液作空白，在波長511 nm處測量吸光度，并繪制標準曲線。

1.2.3 茜草總蒽醌的提取和含量測定^[6]精確稱取茜草10.0 g，按照不同料液比、提取時間、提取次數和提取劑濃度對茜草總蒽醌進行提取，制成提取液并記錄其體積；精確量取10.0 mL提取液于50 mL圓底燒瓶中，減壓回收溶劑，加20%硫酸溶液20 mL、10%三氯化鐵溶液100 mL，沸水加熱回流水解60 min，并不斷搖振；回流液冷卻至室溫，依次加入30、20、20 mL三氯甲烷，回流10 min，吸出三氯甲烷層，反復抽提至三氯甲烷層無色，合并三氯甲烷層，減壓回收溶劑；殘渣加入0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解，25 mL容量瓶定容，于511 nm處測定吸光度，根據標準曲線讀出樣品中總蒽醌化合物的含量。

1.2.4 茜草總蒽醌單因素試驗 （1）不同提取次數。準確稱取4份茜草樣品，在料液比1 g ∶10 mL、提取時間2 h、70%乙醇 100 mL 作為浸提劑的條件下，分別提取1、2、3、4次，過濾、合并所得濾液即為提取液，對提取液進行測定。（2）不同浸提劑濃度。準確稱取4份茜草樣品，在料液比1 g ∶10 mL、提取時間1 h、提取次數為1次的條件下，分別以濃度為60%、70%、75%、80%乙醇溶液進行提取，并對提取液進行測定。（3）不同提取時間。準確稱取4份茜草樣品，在料液比為 1 g ∶10 mL、乙醇濃度70%、提取次數為1次的條件下，分別提取1.0、1.5、2.0、3.0 h，對提取液進行測定。（4）不同料液比。準確稱取4份茜草樣品，在乙醇濃度70%、提取次數為1次、時間1.0 h的條件下，分別以料液比為1 g ∶6 mL、1 g ∶8 mL、1 g ∶10 mL、1 g ∶12 mL加入乙醇溶液進行提取，對提取液進行測定。

1.2.5 正交試驗優化工藝設計 以總蒽醌化合物含量為評價指標，采用正交試驗設計法L9（34）對茜草樣品進行總蒽醌的提取，考察茜草總蒽醌最優提取工藝（表1）。

為B、C、D，即提取時間﹥提取次數﹥料液比﹥乙醇濃度；總蒽醌最佳提取條件為A2B3C3D2，即浸提時間為1.5 h、提取次數為3次、乙醇濃度為70%、料液比為1 g ∶12 mL。在最優提取條件下，茜草總蒽醌的提取率為12.45%。

3 小結

茜草中含有豐富的蒽醌類化合物，本試驗詳細探討茜草中蒽醌類物質的提取工藝，為茜草的進一步開發利用提供了有益的參考。雖然提取的次數和時間越多越好，但結合生產實踐，最佳提取工藝為浸提時間為1.5 h、提取次數為3次、乙醇濃度為70%、料液比為1 g ∶12 mL，此時，總蒽醌的提取率最高，為12.45%。

參考文獻：

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[2]楊連榮，周慶華，張哲鋒，等. 茜草的化學成分與藥理作用研究進展[J]. 中醫藥信息，2007，24（1）：21-23.

[3]張 琳，彭 亮，胡本祥. 茜草的化學成分研究進展[J]. 現代中醫藥，2008，28（2）：52-54.

[4]余旭東，楊季菱. 茜草與茜草炭藥理作用比較研究[J]. 中國實驗方劑學雜志，2007，13（9）：53-56.

[5]許蘭芝，趙世琴，胡慶偉，等. 茜草總蒽醌抗炎抗風濕作用及機制[J]. 濰坊醫學院學報，2002，24（1）：11-13.

[6]陳 星，王 侃，單鳴秋，等. UPLC測定茜草炭中4種醌類成分的含量[J]. 中國中藥雜志，2012，37（19）：2922-2925.

[7]陳小全，楊曉東，邵輝瑩，等. 超聲波作用下提取茜草色素及穩定性實驗[J]. 泰山醫學院學報，2013，34（3）：173-176.

[8]浦益瓊，王 冰，張 彤，等. 大孔樹脂柱層析法制備茜草總醌提取物的實驗研究[J]. 中成藥，2013，35（9）：1900-1905.

[9]衛亞麗，梁 芳，湯洪敏. 中藥茜草中總蒽醌含量的測定[J]. 貴州農業科學，2011，39（8）：51-53.

[10]蘇靜慧，呂強三，李紅霞. 超聲波法提取茜草中蒽醌成分[J]. 河北理工大學學報：自然科學版，2011，33（4）：101-104.

[11]浦益瓊，王 冰，張 彤，等. 茜草提取物中大葉茜草素測定的方法研究[J]. 中國實驗方劑學雜志，2012，18（6）：94-96.endprint

摘要：利用紫外可見分光光度儀，在400～800 nm范圍內對1，8-二羥基蒽醌的吸收光譜進行掃描，確定最大吸收波長；探討提取次數、提取濃度、提取時間、料液比等單因素對茜草中總蒽醌的提取效果，在此基礎上，通過L9（34）正交試驗，確定總蒽醌的最佳提取工藝。結果表明，茜草總蒽醌的最大吸收波長為511 nm；對照品1，8-二羥基蒽醌的吸收度與濃度線性關系良好，相關系數r=0.999 46；茜草總蒽醌最佳提取工藝為料液比1 g ∶12 mL、提取時間1.5 h、提取次數3次、乙醇濃度70%。

關鍵詞：紫外分光光度法；茜草；總蒽醌；提取

中圖分類號：R284.2 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2014）08-0268-02

茜草（Rubia Cordifolia L.）為茜草科植物，別稱活血草、鋸子草、拉拉草、纏老鼠、粘粘草、血見愁等，多年生攀援草本，主產于陜西、江蘇、安徽、河南、山東，春、秋2季采挖，根及根莖干燥藥用，性寒、味苦，歸肝經，具有涼血、止血、祛瘀、通經之功效，臨床上用于吐血、崩漏下血、外傷出血、經閉瘀阻、關節痹痛、跌打腫痛等病癥^[1-2]，特別對心腦血管疾病療效顯著。

蒽醌類物質不僅在藥用方面有極大的發展潛力，而且可作為天然色素用于食品添加劑，安全性高，具有營養和藥用價值，逐漸受到人們的重視^[3-5]。茜草蒽醌類物質的研究報道較多^[6-11]，大多是對其組成和結構進行鑒定，對提取工藝的研究報道較少。采用正交試驗，研究4因素（乙醇濃度、提取次數、時間、料液比）3水平醇提工藝，采用紫外可見分光光度儀測定總蒽醌含量，確定最佳醇提條件，為工業化提取茜草總蒽醌提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 儀器材料

UV-cary300型紫外可見分光光度儀；W201B恒溫水浴鍋，上海中生生物技術有限公司生產；AEG-45SM電子天平（1/100 000），日本島津公司生產；1，8-二羥基蒽醌，中國藥品生物制品檢定所提供；R-201型旋轉蒸發儀，上海中生科技有限公司生產；無水乙醇、三氯甲烷及其他試劑均為分析純。茜草購自貴陽市醫藥公司，產地陜西。

1.2 試驗方法

1.2.1 最大吸收波長測定 精確稱取1，8-二羥基蒽醌標準品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；吸取1 mL水浴蒸干，加0.5%醋酸鎂-甲醇溶液，搖勻使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸鎂-甲醇溶液作空白溶液，用紫外可見分光光度計對1，8-二羥基蒽醌標準溶液在500～800 nm波長范圍內進行光譜掃描，確定其最大吸收波長。

1.2.2 標準曲線的繪制 精確稱取1，8-二羥基蒽醌標準品10 mg，甲醇溶解，定容至100 mL；分別精確吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL減壓蒸干，加0.5%醋酸鎂-甲醇溶液，搖勻使之溶解，10 mL容量瓶定容；以0.5%醋酸鎂-甲醇溶液作空白，在波長511 nm處測量吸光度，并繪制標準曲線。

1.2.3 茜草總蒽醌的提取和含量測定^[6]精確稱取茜草10.0 g，按照不同料液比、提取時間、提取次數和提取劑濃度對茜草總蒽醌進行提取，制成提取液并記錄其體積；精確量取10.0 mL提取液于50 mL圓底燒瓶中，減壓回收溶劑，加20%硫酸溶液20 mL、10%三氯化鐵溶液100 mL，沸水加熱回流水解60 min，并不斷搖振；回流液冷卻至室溫，依次加入30、20、20 mL三氯甲烷，回流10 min，吸出三氯甲烷層，反復抽提至三氯甲烷層無色，合并三氯甲烷層，減壓回收溶劑；殘渣加入0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解，25 mL容量瓶定容，于511 nm處測定吸光度，根據標準曲線讀出樣品中總蒽醌化合物的含量。

1.2.4 茜草總蒽醌單因素試驗 （1）不同提取次數。準確稱取4份茜草樣品，在料液比1 g ∶10 mL、提取時間2 h、70%乙醇 100 mL 作為浸提劑的條件下，分別提取1、2、3、4次，過濾、合并所得濾液即為提取液，對提取液進行測定。（2）不同浸提劑濃度。準確稱取4份茜草樣品，在料液比1 g ∶10 mL、提取時間1 h、提取次數為1次的條件下，分別以濃度為60%、70%、75%、80%乙醇溶液進行提取，并對提取液進行測定。（3）不同提取時間。準確稱取4份茜草樣品，在料液比為 1 g ∶10 mL、乙醇濃度70%、提取次數為1次的條件下，分別提取1.0、1.5、2.0、3.0 h，對提取液進行測定。（4）不同料液比。準確稱取4份茜草樣品，在乙醇濃度70%、提取次數為1次、時間1.0 h的條件下，分別以料液比為1 g ∶6 mL、1 g ∶8 mL、1 g ∶10 mL、1 g ∶12 mL加入乙醇溶液進行提取，對提取液進行測定。

1.2.5 正交試驗優化工藝設計 以總蒽醌化合物含量為評價指標，采用正交試驗設計法L9（34）對茜草樣品進行總蒽醌的提取，考察茜草總蒽醌最優提取工藝（表1）。

為B、C、D，即提取時間﹥提取次數﹥料液比﹥乙醇濃度；總蒽醌最佳提取條件為A2B3C3D2，即浸提時間為1.5 h、提取次數為3次、乙醇濃度為70%、料液比為1 g ∶12 mL。在最優提取條件下，茜草總蒽醌的提取率為12.45%。

3 小結

茜草中含有豐富的蒽醌類化合物，本試驗詳細探討茜草中蒽醌類物質的提取工藝，為茜草的進一步開發利用提供了有益的參考。雖然提取的次數和時間越多越好，但結合生產實踐，最佳提取工藝為浸提時間為1.5 h、提取次數為3次、乙醇濃度為70%、料液比為1 g ∶12 mL，此時，總蒽醌的提取率最高，為12.45%。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會. 中國藥典：一部[M]. 2010版. 北京：中國醫藥科技出版社，2010，218.

[2]楊連榮，周慶華，張哲鋒，等. 茜草的化學成分與藥理作用研究進展[J]. 中醫藥信息，2007，24（1）：21-23.

[3]張 琳，彭 亮，胡本祥. 茜草的化學成分研究進展[J]. 現代中醫藥，2008，28（2）：52-54.

[4]余旭東，楊季菱. 茜草與茜草炭藥理作用比較研究[J]. 中國實驗方劑學雜志，2007，13（9）：53-56.

[5]許蘭芝，趙世琴，胡慶偉，等. 茜草總蒽醌抗炎抗風濕作用及機制[J]. 濰坊醫學院學報，2002，24（1）：11-13.

[6]陳 星，王 侃，單鳴秋，等. UPLC測定茜草炭中4種醌類成分的含量[J]. 中國中藥雜志，2012，37（19）：2922-2925.

[7]陳小全，楊曉東，邵輝瑩，等. 超聲波作用下提取茜草色素及穩定性實驗[J]. 泰山醫學院學報，2013，34（3）：173-176.

[8]浦益瓊，王 冰，張 彤，等. 大孔樹脂柱層析法制備茜草總醌提取物的實驗研究[J]. 中成藥，2013，35（9）：1900-1905.

[9]衛亞麗，梁 芳，湯洪敏. 中藥茜草中總蒽醌含量的測定[J]. 貴州農業科學，2011，39（8）：51-53.

[10]蘇靜慧，呂強三，李紅霞. 超聲波法提取茜草中蒽醌成分[J]. 河北理工大學學報：自然科學版，2011，33（4）：101-104.

[11]浦益瓊，王 冰，張 彤，等. 茜草提取物中大葉茜草素測定的方法研究[J]. 中國實驗方劑學雜志，2012，18（6）：94-96.endprint